張放 孫怡蕓 梁曉倩 楊爽

1976 年Friedenstein 等［1］首次證實(shí)骨髓中存在間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells, MSC），發(fā)現(xiàn)其可以作為壁龕細(xì)胞對(duì)造血干細(xì)胞發(fā)揮支持和輔助的作用。隨著研究的深入，MSC 被證實(shí)為人體內(nèi)重要的多能干細(xì)胞，主要存在于機(jī)體多種結(jié)締組織，不僅具有低免疫原性的特點(diǎn)，還具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)和多向分化功能［2］。近年來(lái)研究顯示，MSC 是人體內(nèi)成骨細(xì)胞的主要來(lái)源，可作為組織工程與修復(fù)醫(yī)學(xué)的種子細(xì)胞，廣泛應(yīng)用于骨折修復(fù)、組織重建等再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域［3，4］。然而，在實(shí)際應(yīng)用中卻發(fā)現(xiàn)，MSC移植后在體內(nèi)定向分化效率較低，限制了MSC的臨床應(yīng)用［5］。如何進(jìn)一步提高M(jìn)SC 成骨分化效率，從而推動(dòng)其臨床應(yīng)用，是當(dāng)前研究的重點(diǎn)與熱點(diǎn)。

MSC成骨分化受到多種炎癥因子的調(diào)控［6］。白細(xì)胞介素23（interleukin-23,IL-23）屬于IL-12家族中的一類促炎因子，主要由巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞產(chǎn)生，發(fā)揮調(diào)控多種T細(xì)胞分化、增殖的功能［7］。已有研究發(fā)現(xiàn)，IL-12家族中多個(gè)因子對(duì)MSC的功能有重要的調(diào)控作用，但I(xiàn)L-23 對(duì)MSC 功能影響的研究較少［8］。在本研究中，我們擬在體外探討IL-23對(duì)MSC成骨分化功能的調(diào)控作用，探索提高M(jìn)SC分化效率的方法。

材料與方法

一、主要材料與儀器

H-DMEM 培養(yǎng)基、0.25%胰蛋白酶-EDTA（Gibco，美國(guó)）；胎牛血清（杭州四季青，中國(guó)）；PBS 緩沖液、Percoll分離液、RIPA蛋白裂解液、蛋白定量試劑盒、氯仿、異丙醇、無(wú)水乙醇、多聚甲醛、焦碳酸二乙酯（DEPC）水（碧云天公司，中國(guó)）；地塞米松、β-磷酸甘油、抗壞血酸、氯化十六烷基吡啶（CPC）、茜素紅（Sigma，美國(guó)）；堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性檢測(cè)試劑盒（南京建成生物，中國(guó)）；IL-23（R&D，美國(guó)）；cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green 熒光定量試劑盒（TAKARA，日本）；Trizol提取液、全基因組表達(dá)譜芯片、Lipo 2000 轉(zhuǎn)染試劑盒（Life，美國(guó)）；siRNA（吉瑪基因，中國(guó)）；CD14-PE、CD45-FITC、HLA-DR-PE、CD29-FITC、CD44-PE、CD105-FITC 抗體（Meltenyi，德國(guó)）；離心管（15 ml、50 ml）、6孔板、96孔板、25 cm2培養(yǎng)瓶（Corning，美國(guó)），移液器（Eppendorf，德國(guó)）。生物安全柜、CO2恒溫培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、低溫高速離心機(jī)、Nano 分光光度計(jì)、PCR 儀（Thermo Fisher，美國(guó)）；Roche480 熒光定量PCR儀（Roche，美國(guó)）；倒置相差顯微鏡（Olympus，日本）；Hybridization Oven、Fluidics Station、GeneChip Scanner 3000（Affymetrix，美國(guó)），均用于芯片雜交與檢測(cè)。

二、MSC體外分離、培養(yǎng)

8周齡的C57BL/6J小鼠購(gòu)自遼寧省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公共服務(wù)平臺(tái)，本研究動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理規(guī)范。所有小鼠均采取頸椎脫臼法處死，處死后解剖、切除雙側(cè)股骨，用10 ml PBS 緩沖液沖洗股骨骨髓腔，將骨髓沖入離心管中。骨髓樣本用注射器緩慢加入等量Percoll分離液（1.073 g/ml）于液面上，以2 000 r/min 離心30 min。用巴氏吸管吸取中間白膜層并用PBS 緩沖液洗滌1 次，用含10%胎牛血清的H-DMEM 培養(yǎng)基重懸后以2×106cells/cm2的密度接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，放置于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。72 h后洗去未貼壁細(xì)胞，此后每3 d換液1 次。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%～90%融合時(shí)，0.25%胰蛋白酶-EDTA 消化傳代，第2～3 代細(xì)胞用于進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

三、流式細(xì)胞術(shù)

MSC 分離培養(yǎng)3 d 后，常規(guī)消化收集細(xì)胞，通過(guò)計(jì)數(shù)法調(diào)整至濃度為1×106/ml，加入對(duì)應(yīng)流式抗體10 μl，于室溫下避光孵育30 min。隨后用PBS 緩沖液清洗離心，通過(guò)流式細(xì)胞儀分析相應(yīng)細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)。

四、成骨分化誘導(dǎo)與刺激

MSC 以1×105cells/孔的密度接種于6 孔板，待細(xì)胞完全貼壁后換為成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、50 mg/L 抗壞血酸、10 mmol/L β-磷酸甘油、10 nmol/L 地塞米松的H-DMEM），此后每3 d 換液1 次。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基中添加不同濃度IL-23（0、10、50、100 μg/L）持續(xù)刺激。

五、ALP活性測(cè)定

MSC誘導(dǎo)至10 d后，棄去上清，用PBS緩沖液輕輕清洗3 次，每孔加入RIPA 蛋白裂解液100 μl，冰上放置30 min。隨后吸取蛋白裂解液，于4 ℃下以12 000 r/min 離心30 min。按照試劑盒方法配置ALP反應(yīng)液，于96孔板中每孔加入反應(yīng)液100 μl，同時(shí)加入蛋白上清30 μl，37 ℃孵育15 min。隨后每孔加入顯色液150 μl，充分混勻后通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)吸光度。部分離心后的蛋白上清通過(guò)BCA 蛋白濃度試劑盒測(cè)定蛋白濃度，經(jīng)蛋白標(biāo)準(zhǔn)化定量后樣品的ALP活性單位為U·（g pro）-1·（15 min）-1。

六、茜素紅染色與定量分析

MSC誘導(dǎo)至14 d后，棄去上清，用PBS緩沖液輕輕清洗3 次，隨后用4%多聚甲醛溶液固定10 min。再次用PBS緩沖液清洗3次，吸干后每孔加入pH=4的1%茜素紅染色液1 ml，室溫孵育15 min。隨后用PBS 緩沖液洗去非特異性染色與雜質(zhì)，于倒置相差顯微鏡下選取中心區(qū)域拍照記錄。拍照完成后，每孔加入1 ml 的10%CPC 萃取液，室溫萃取1 h?；靹蛭?00 μl 置入96 孔板中，于酶標(biāo)儀下測(cè)定吸光度。

七、RNA提取與逆轉(zhuǎn)錄

MSC 刺激誘導(dǎo)10 d 后，用PBS 緩沖液輕輕清洗3 次。每孔加入1 ml Trizol，于冰上孵育5 min。將裂解液轉(zhuǎn)移至EP管中并三氯甲烷200 μl，劇烈震蕩混勻后靜置5 min，隨后12 000 r/min離心15 min。離心后吸取上層水相液體并轉(zhuǎn)移入新的EP 管中。每管加入異丙醇500 μl，室溫靜置10 min 后12 000 r/min離心10 min。棄去上清，加入75%乙醇1 ml 洗滌RNA 沉淀，7 500 r/min 離心5 min。棄去上清，加入20 μl DEPC水。于Nanodrop紫外分光光度計(jì)下檢測(cè)RNA濃度與純度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒方法，每管加入逆轉(zhuǎn)錄試劑2 μl、RNA 8 μl，于37 ℃孵育15 min。

八、全基因組表達(dá)譜芯片

逆轉(zhuǎn)錄完成的cDNA 經(jīng)過(guò)標(biāo)記、芯片雜交、清洗、染色、掃描，收集數(shù)據(jù)后采用AGCC軟件（Affymetrix，美國(guó)）進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)方法按照文獻(xiàn)［6］報(bào)道方案進(jìn)行。

九、熒光定量PCR

EP管中分別加入cDNA 2 μl、引物0.2 μl、DEPC水2.8 μl、SYBR Green 5 μl，總體積為10 μl，充分混勻后加入96孔板中。將PCR反應(yīng)板置入Roche 480熒光定量PCR儀中進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過(guò)軟件分析數(shù)據(jù)基因相對(duì)表達(dá)量。內(nèi)參GAPDH引物：GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT、GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG；IL-23 引物：CTCAGGGACAACAGTCAGTTC、ACAGGGCTATCAGGGAGCA；Smad4 引物：CTCATGTGATCTATGCCCGTC、AGGTGATACAACTCGTTCGTAGT。

十、siRNA干擾

根據(jù)Smad4 序列設(shè)計(jì)3 個(gè)siRNA 序列，通過(guò)PCR法驗(yàn)證并選擇干擾效率最高的siRNA序列。將20 pmol的siRNA溶于50 μl DMEM培養(yǎng)基中。另將1 μl Lipo 2000 轉(zhuǎn)染試劑溶于50 μl DMEM 培養(yǎng)基中，混勻后于37 ℃孵育10 min。隨后將兩管試劑混勻孵育20 min，加入對(duì)應(yīng)孔板中，于培養(yǎng)箱中孵育6 h。干擾后用PBS 緩沖液清洗3 次，加入新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。Smad4 的干擾序列為GCCAGCAGCTTT-CACAGAA；對(duì)照（NC）序列為AGTTGGCTAATTCCGGCCATT。轉(zhuǎn)染后分別為誘導(dǎo)組（成骨誘導(dǎo)、未轉(zhuǎn)染序列）、NC組（成骨誘導(dǎo)并轉(zhuǎn)染了NC序列）、siRNA 組（成骨誘導(dǎo)并轉(zhuǎn)染了干擾序列），使用IL-23（100 μg/L）對(duì)誘導(dǎo)組、NC 組、siRNA 組持續(xù)刺激10 d，并進(jìn)行茜素紅及ALP實(shí)驗(yàn)。

十一、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0軟件（IBM公司，美國(guó)）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD 法，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、MSC的形態(tài)與表型鑒定

MSCs呈梭型、成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)。流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果提示MSC 表型為CD14、CD45、HLA-DR 為陰性，CD29、CD44、CD105 為陽(yáng)性，符合MSC 特征（圖1）。

二、IL-23促進(jìn)MSC成骨分化

MSC 分別在不同濃度IL-23 刺激下誘導(dǎo)分化。茜素紅結(jié)果顯示隨著IL-23濃度增高（0～100 μg/L），茜素紅染色深度逐漸增加，鏡下可見(jiàn)MSC所形成的鈣結(jié)節(jié)數(shù)量和面積均顯著增加。通過(guò)CPC 萃取實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)隨著IL-23濃度提高，其吸光度也相應(yīng)增高，與未刺激組（0 μg/L）對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這與茜素紅染色結(jié)果一致。堿性磷酸酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，隨著IL-23濃度提高，MSC 中堿性磷酸酶活性明顯上升，與未刺激組（0 μg/L）對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這些結(jié)果均提示不同濃度的IL-23 均可以顯著刺激MSC 成骨分化（圖2）。

圖1 MSC 的形態(tài)與表型鑒定 a：MSC 呈梭型集落樣貼壁生長(zhǎng)；b：流式細(xì)胞學(xué)分析結(jié)果提示MSC 為CD29、CD44、CD105 陽(yáng)性，CD14、CD45、HLA-DR陰性，符合國(guó)際干細(xì)胞協(xié)會(huì)鑒定標(biāo)準(zhǔn)

三、IL-23上調(diào)Smad4表達(dá)

通過(guò)全基因組表達(dá)譜芯片，我們對(duì)不同濃度IL-23 刺激下成骨分化第10 天的MSC 全基因組進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)IL-23 刺激后MSC 基因表達(dá)譜出現(xiàn)顯著異常，共有差異基因682 個(gè)。我們進(jìn)一步對(duì)這些差異基因進(jìn)行KEGG 信號(hào)通路分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)差異最顯著的前三位通路分別是BMP/Smad 信號(hào)通路（P＜0.001）、MAPK 信號(hào)通路（P=0.001）和Hedgehog 信號(hào)通路（P=0.014）。我們對(duì)BMP/Smad 信號(hào)通路進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)富集到該通路的差異表達(dá)基因有11 個(gè)，其中表達(dá)變化最顯著的基因?yàn)镾mad4。我們進(jìn)一步通過(guò)熒光定量PCR 對(duì)Smad4 的表達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果提示隨著IL-23 濃度升高（0～100 μg/L），Smad4 的表達(dá)也隨之顯著上調(diào)（P＜0.05），與芯片的結(jié)果一致（圖3）。

四、干擾Smad4 表達(dá)可以抑制IL-23 促進(jìn)MSC成骨分化

為了探討Smad4 在IL-23 促進(jìn)MSC 成骨分化中的作用，我們?cè)O(shè)計(jì)了siRNA 對(duì)MSC 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并使用IL-23（100 μg/L）對(duì)誘導(dǎo)組、NC 組、siRNA 組進(jìn)行持續(xù)刺激。干擾MSC 的Smad4表達(dá)后，茜素紅結(jié)果顯示siRNA組染色較NC組明顯變淡，鏡下可見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)數(shù)量明顯減少，且茜素紅定量結(jié)果明顯降低（P＜0.05）。此外，ALP 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示siRNA 組MSC ALP活性水平較NC 組明顯降低，與茜素紅實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（P＜0.05）（圖4）。

圖2 IL-23促進(jìn)MSC成骨分化結(jié)果 a：茜素紅染色結(jié)果示不同濃度IL-23刺激下茜素紅染色逐漸加深；b：茜素紅定量結(jié)果提示吸光度隨著IL-23濃度增加而升高（與0 μg/L組對(duì)比，*P＜0.05）；c：ALP活性結(jié)果提示隨著IL-23刺激濃度增高，MSC成骨分化后ALP活性明顯增加（與0 μg/L組對(duì)比，*P＜0.05）

圖3 IL-23上調(diào)Smad4表達(dá)結(jié)果 a：全基因表達(dá)譜芯片提示，IL-23刺激后MSC基因表達(dá)譜出現(xiàn)明顯改變；b：熒光定量PCR結(jié)果提示Smad4表達(dá)量隨著濃度上升而增高（與0 μg/L組對(duì)比，*P＜0.05）

圖4 干擾Smad4表達(dá)后MSC成骨分化結(jié)果 在IL-23刺激情況下，干擾Smad4表達(dá)組的茜素紅染色顯著淡于單純誘導(dǎo)組和NC轉(zhuǎn)染組（a），茜素紅定量結(jié)果（b）及ALP結(jié)果（c）提示干擾Smad4表達(dá)后MSC成骨分化能力顯著下調(diào)（與誘導(dǎo)組對(duì)比，*P＜0.05）

討 論

MSC 是人體內(nèi)重要的多能干細(xì)胞，廣泛存在于體內(nèi)多種結(jié)締組織中，以骨髓中含量最為豐富［9］。研究顯示，MSC 主要三類功能：①支持造血。MSC可以作為骨髓微環(huán)境的壁龕細(xì)胞，一方面發(fā)揮支持造血干細(xì)胞的作用，另一方面可以分泌血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet derived growth factor, PDGF）等多種因子，從而調(diào)控造血干細(xì)胞的增殖、分化等功能，發(fā)揮對(duì)人體內(nèi)造血系統(tǒng)的調(diào)控［10］。②免疫調(diào)節(jié)。MSC 可以通過(guò)接觸抑制或者分泌IL-6、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor,TGF-β）等炎性因子，對(duì)機(jī)體內(nèi)T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞發(fā)揮調(diào)控作用，從而維持機(jī)體內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)［11-13］。③多向分化功能。MSC 為中胚層來(lái)源細(xì)胞，在體外誘導(dǎo)環(huán)境下可分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂肪細(xì)胞［14］。新近研究指出，MSC 是人體內(nèi)成骨細(xì)胞的主要來(lái)源之一，MSC 正常成骨分化能力是維持機(jī)體內(nèi)骨代謝平衡的重要因素，而MSC成骨分化異常則會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松等骨代謝疾病［3］。因此，深入研究MSC 成骨分化的機(jī)制，有助于闡明機(jī)體骨骼生長(zhǎng)發(fā)育的具體機(jī)制，同時(shí)有助于揭示骨代謝異常疾病的發(fā)病機(jī)制。此外，MSC 具有低免疫原性的特點(diǎn)，其低表達(dá)或不表達(dá)MHC I類分子，不表達(dá)MHC Ⅱ類分子，同時(shí)也不表達(dá)共刺激分子，不具備激發(fā)免疫應(yīng)答的活性，具有良好的臨床應(yīng)用能力［4］。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已利用MSC 的成骨分化功能開(kāi)展多項(xiàng)臨床應(yīng)用研究，證實(shí)MSC可以作為組織工程與再生醫(yī)學(xué)的種子細(xì)胞，應(yīng)用于骨折修復(fù)等疾病的治療［15］。然而，部分學(xué)者的研究也發(fā)現(xiàn)，臨床應(yīng)用中MSC 的成骨分化受到多種細(xì)胞因子的影響和調(diào)控，其中炎性因子是影響體內(nèi)MSC 成骨分化的主要因素之一［6］。研究證實(shí)炎性因子在體內(nèi)作為“雙刃劍”調(diào)控MSC的成骨分化：當(dāng)炎性因子處在正常水平范圍內(nèi)，則可以調(diào)控MSC正常成骨分化，從而維持人體的骨代謝平衡；當(dāng)體內(nèi)炎性因子紊亂時(shí)，則會(huì)過(guò)度促進(jìn)或抑制MSC 成骨分化，從而引起異位骨化或骨質(zhì)疏松，導(dǎo)致疾病發(fā)生發(fā)展［16］。IL-23 是人體內(nèi)重要的炎性因子，在體內(nèi)發(fā)揮調(diào)控Th17細(xì)胞分化、增殖的功能［7］。研究發(fā)現(xiàn)，在強(qiáng)直性脊柱炎等疾病病人體內(nèi)IL-23水平明顯升高，與病人病理性成骨密切相關(guān)，提示IL-23水平升高可能參與正性促進(jìn)成骨的作用，但I(xiàn)L-23具體如何調(diào)控成骨細(xì)胞主要來(lái)源——MSC 的分化，目前相關(guān)研究不多［17］。闡明IL-23 調(diào)控成骨分化的機(jī)制，將有助于闡明多種相關(guān)疾病骨代謝異常的發(fā)病機(jī)制。除此之外，骨折術(shù)后不愈合、脊柱手術(shù)術(shù)后不融合等也是困擾當(dāng)前骨外科醫(yī)師的重要并發(fā)癥，這主要是由于術(shù)后局部炎性微環(huán)境紊亂等因素所引起［18］。已有部分學(xué)者將MSC 作為種子細(xì)胞移植治療骨折不愈合、脊柱術(shù)后不融合等骨科疾病，但MSC 分化效率仍較低，闡明IL-23 調(diào)控MSC 成骨分化的機(jī)制，也將有助于提高M(jìn)SC 的分化效率，促進(jìn)和推動(dòng)MSC的臨床應(yīng)用。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)隨著IL-23 濃度升高，茜素紅染色與定量及ALP 結(jié)果均顯著上升，這從定性和定量?jī)煞矫婢C實(shí)，IL-23可以顯著促進(jìn)MSC成骨分化，且這種效應(yīng)隨著濃度升高而提升。為了進(jìn)一步探討IL-23 調(diào)控MSC 成骨分化的機(jī)制，我們對(duì)MSC 的全基因表達(dá)譜進(jìn)行分析，KEGG 信號(hào)通路分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)BMP/Smad 信號(hào)通路差異最為明顯，而其中成骨分化關(guān)鍵基因Smad4顯著上調(diào)。Smad4是BMP/Smad信號(hào)通路關(guān)鍵的中介分子，主要通過(guò)與磷酸化的Smad2/3或Smad1/5/8結(jié)合，介導(dǎo)入核調(diào)控相關(guān)成骨基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)MSC 的成骨分化［19］。在本研究中，我們進(jìn)一步通過(guò)熒光定量PCR技術(shù)證實(shí)IL-23可以顯著上調(diào)Smad4表達(dá)，且隨著濃度增加而效果升高，這與茜素紅及ALP 結(jié)果一致。此外，我們通過(guò)siRNA 干擾Smad4 表達(dá)，發(fā)現(xiàn)抑制MSC 的Smad4 表達(dá)后，最高濃度的IL-23（100 μg/L）的刺激也無(wú)法促進(jìn)MSC 成骨分化，這一結(jié)果提示IL-23 確是通過(guò)Smad4 以調(diào)控MSC 成骨分化的。既往已有許多研究提示Smad4 是MSC 成骨分化的正性調(diào)控分子，而炎性因子可以通過(guò)上調(diào)Smad4 以促進(jìn)MSC的成骨分化［20］。本研究結(jié)果證實(shí)，IL-23刺激正是通過(guò)上調(diào)MSC的Smad4表達(dá)，從而正性調(diào)控MSC的成骨分化。我們推測(cè)，在疾病模型中，可以通過(guò)抑制BMP/Smad 通路信號(hào)，從而阻斷IL-23 引起的異位骨化；而在臨床應(yīng)用中，也可以通過(guò)IL-23對(duì)MSC進(jìn)行預(yù)刺激，從而提高M(jìn)SC 成骨分化能力，促進(jìn)MSC 的臨床骨修復(fù)功能。

綜上所述，我們研究證實(shí)IL-23通過(guò)上調(diào)Smad4表達(dá)以促進(jìn)MSC 成骨分化。但本研究中仍有一些不足，如IL-23在體內(nèi)如何影響MSC功能，IL-23是否對(duì)MSC 成脂分化、免疫調(diào)節(jié)等功能發(fā)揮影響，IL-23對(duì)人來(lái)源的MSC 是否具有相同的作用？這些問(wèn)題仍需在未來(lái)的研究中繼續(xù)解答。