王曉琳 張平 劉志榮 馬瀟 李冬華 宋平順

摘要：目的 ?建立岷縣當(dāng)歸50種禁限用農(nóng)藥殘留的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測方法，掌握其禁限用農(nóng)藥殘留情況，為保障岷縣當(dāng)歸品質(zhì)提供依據(jù)。方法 ?以50種禁限用農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品為混合對照，以磷酸三苯酯為內(nèi)標(biāo)，建立岷縣當(dāng)歸50種禁限用農(nóng)藥殘留篩查的LC-MS/MS檢測方法，對岷縣不同區(qū)域采集的20批當(dāng)歸樣品進(jìn)行測定。結(jié)果 ?各成分在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)≥0.982，94%以上農(nóng)藥平均回收率為70%～130%，符合痕量檢出要求。20批岷縣當(dāng)歸樣品均檢出2種及以上農(nóng)藥殘留，所有樣品均檢出甲拌磷、辛硫磷，辛硫磷殘留量均低于5 μg/kg（除S4外），甲基異硫磷及苯線磷檢出率較高，S7甲拌磷殘留量高達(dá)822.5 μg/kg，S8禁限用農(nóng)藥檢出多達(dá)10種。結(jié)論 ?本研究建立的方法適用于岷縣當(dāng)歸50種禁限用農(nóng)藥殘留測定。不同樣品農(nóng)藥殘留量分布有較大差異，應(yīng)制定當(dāng)歸的農(nóng)藥多殘留限度標(biāo)準(zhǔn)，確保道地藥材品質(zhì)。

關(guān)鍵詞：道地藥材;岷縣當(dāng)歸;禁限用農(nóng)藥;農(nóng)藥殘留;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

中圖分類號：R284.1 ???文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ???文章編號：1005-5304（2019）11-0079-06

Abstract： Objective To establish a liquid chromatographer-tandem mass spectrometry （LC-MS/MS） method for the determination of 50 banned and restricted pesticide residues of Angelicae Sinensis Radix in Minxian County; To master the situation of banned and restricted pesticide residues; To guarantee the quality of Angelicae Sinensis Radix in Minxian County. Methods LC-MS/MS detection method was established for screening 50 kinds of banned and restricted pesticide residues in Angelicae Sinensis Radix in Minxian County， using 50 kinds of banned and restricted pesticide standard substance as mixed control and triphenyl phosphate as internal standard. 20 batches of Angelicae Sinensis Radix samples collected in different areas of Minxian County were detected. Results The linear relationship of each component in the corresponding range was good， the correlation coefficient ≥0.982， and the average recovery rate of pesticides more than 94% was 70%–130%， which was in line with the trace detection requirements. Two or more kinds of pesticide residues were detected in all 20 batches of Angelicae Sinensis Radix samples from Minxian County. Phosphorus and phoxim were detected in all samples， and the residue of phoxim was all lower than 5 g/kg except S4. The residue of phosphorus in S7 was up to 822.5 g/kg. The detection rates of methyl isothion and benzene-phosphorus were also higher， and up to 10 kinds of banned and restricted pesticides were detected in S8. Conclusion This method is suitable for the determination of 50 kinds of banned and restricted pesticide residues in Angelicae Sinensis Radix in Minxian County. There are large differences in the distribution of pesticide residues in different samples. It is necessary to establish a multi-residue limit standard for pesticides in Angelicae Sinensis Radixto ensure the quality of authentic medicinal materials.

Keywords： authentic medicinal materials; Angelicae Sinensis Radix in Minxian County; banned and restricted pesticides; pesticide residues; LC-MS/MS

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤腸通便功效[1]。甘肅為當(dāng)歸的道地產(chǎn)區(qū)，早在1800年前，當(dāng)歸就在岷縣、宕昌、漳縣及渭源一帶栽培，據(jù)《中國植物志》記載，當(dāng)歸主產(chǎn)甘肅東南部，以岷縣產(chǎn)量多、質(zhì)量好，稱“岷歸”，被歷代醫(yī)家公認(rèn)為道地藥材。研究表明，岷縣出產(chǎn)的當(dāng)歸骨質(zhì)重、氣香濃、油性足、質(zhì)量佳[2-3]。當(dāng)歸是我國十大大宗藥材之一、甘肅省十大隴藥之一，也是藥食同源品種，在藥品、食品、化妝品等生產(chǎn)行業(yè)作為原料被廣泛使用，其品質(zhì)與大眾健康生活密切相關(guān)。目前我國使用的中藥材主要來源于栽培藥材，在中藥材種植過程中，為了預(yù)防病蟲害、提高產(chǎn)量，施用農(nóng)藥成為生產(chǎn)者采取的必要措施[4-5]，但部分生產(chǎn)者濫用或誤用農(nóng)藥特別禁限用農(nóng)藥，導(dǎo)致農(nóng)藥殘留不僅對人體健康構(gòu)成威脅，而且對自然環(huán)境形成污染。另外，農(nóng)藥殘留是中藥材出口檢測的重要指標(biāo)[6]，農(nóng)殘超標(biāo)易導(dǎo)致中藥材出口的貿(mào)易壁壘。因此，對中藥材進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測與控制極其重要[7]。

本研究共采集20批岷縣當(dāng)歸藥材樣品，采集地涉及岷縣8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)、20個村，針對部分藥農(nóng)可能施用的高毒高風(fēng)險農(nóng)藥品種，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測方法，共篩查50種禁限用農(nóng)藥殘留，以期為道地藥材岷縣當(dāng)歸農(nóng)藥殘留情況研究和農(nóng)藥殘留限度標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1 ?儀器與試藥

Agilent 1290超高壓液相色譜/三重串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀（型號G6460C），美國安捷倫科技股份有限公司;ME-204型分析天平，梅特勒公司;R-200基本型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI（布奇）公司;IKA MS 3 control渦旋震蕩儀，德國IKA公司。

甲胺磷、丁酰肼、滅多威、多菌靈、殺蟲脒、涕滅威亞砜、涕滅威、氧樂果、敵枯雙、克百威、久效磷、水胺硫磷、三羥基克百威、涕滅威砜、滅線磷、地蟲硫磷、硫環(huán)磷、內(nèi)吸磷、甲拌磷、甲基對硫磷、硫線磷、甲拌磷亞砜、百草枯、對硫磷、甲拌磷砜、倍硫磷亞砜、辛硫磷、磷胺、殺撲磷、苯線磷、倍硫磷砜、氯唑磷、三唑磷、苯線磷亞砜、特丁硫磷砜、治螟磷、甲基異柳磷、苯線磷砜、毒死蜱、氯磺隆、蠅毒磷、甲磺隆、氟甲腈、胺苯磺隆、氟蟲腈、氧甲拌磷、氧甲拌磷砜、2，4-滴丁酯、特定硫磷亞砜、敵百蟲50種農(nóng)藥對照品，Dr.Ehrenstorfer公司，純度>90%。乙腈、丙酮、甲酸均為色譜純，Merck公司;無水硫酸鎂、氯化鈉為分析純，國藥集團(tuán)。

當(dāng)歸藥材樣品共20批，為本課題組成員于2018年4月分別從甘肅省岷縣閭井鎮(zhèn)、維新鎮(zhèn)、梅川鎮(zhèn)等8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)20個村采集，樣品經(jīng)甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院馬瀟主任藥師鑒定，均為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根。樣品采集地信息見表1。

2 ?方法與結(jié)果

2.1 ?色譜條件

采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（2.1 mm×150 mm，1.8 μm）;以0.1%甲酸（含5 mmol/L甲酸銨）溶液為流動相A，95%乙腈溶液（含5 mmol/L甲酸銨、0.1%甲酸）為流動相B，梯度洗脫（0～0.2 min，30%B;0.2～10 min，30%～100%B;10～11 min，100%～30%B，11～13 min，30%B，）;流速：0.30 mL/min;柱溫：40 ℃;進(jìn)樣室溫度：20 ℃。

2.2 ?質(zhì)譜條件

采用三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，帶鞘氣電噴霧離子源，正負(fù)離子模式，動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測模式掃描，檢測窗2 min，干燥氣溫度350 ℃，干燥氣流速10 L/min，霧化器壓力50 psi，鞘氣溫度300 ℃，鞘氣流速11 L/min，毛細(xì)管電壓正離子4.5 kV、負(fù)離子3.5 kV，噴嘴電壓500 V。51種化合物（磷酸三苯酯為內(nèi)標(biāo)物）參考監(jiān)測離子對、碎裂電壓、碰撞電壓和加速電壓參考值見表2。

2.3 ?農(nóng)藥單標(biāo)對照品貯備液制備

精密稱取各農(nóng)藥對照品10 mg，置100 mL容量瓶中，分別加丙酮溶解并稀釋至刻度，作為單標(biāo)對照品貯備溶液（100 μg/mL），置于-20 ℃冰箱中保存。

2.4 ?混合對照品貯備溶液制備

按各農(nóng)藥濃度，分別精密量取一定量各農(nóng)藥單標(biāo)對照品貯備溶液，置200 mL量瓶中，用丙酮稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品貯備溶液（200 ng/mL）。

2.5 ?內(nèi)標(biāo)溶液制備

量取磷酸三苯酯溶液（100 μg/mL）1 mL，用乙腈稀釋至100 mL，搖勻，即得1 μg/mL溶液。精密量取5 mL，用乙腈稀釋至100 mL，搖勻，即得每1 mL含內(nèi)標(biāo)磷酸三苯酯50 ng的溶液。

2.6 ?基質(zhì)匹配混合對照品溶液制備

取空白基質(zhì)樣品適量，按供試品溶液制備方法制成空白基質(zhì)溶液。分別精密量取混合對照品貯備液適量，加空白基質(zhì)溶液，制成對照品濃度分別為1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的系列基質(zhì)匹配混合對照品溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.7 ?供試品溶液制備

取供試品粉末（過3號篩）約3 g，精密稱定，置50 mL聚苯乙烯具塞離心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，渦旋使藥粉充分浸潤，放置30 min，精密加乙腈15 mL渦旋混勻，置振蕩器上劇烈振蕩5 min，加入QuECHERS包（無水硫酸鎂與無水乙酸鈉4∶1混合粉末7.5 g），立即搖散，再置振蕩器上劇烈振蕩3 min，于冰浴中冷卻10 min，離心5 min，取上清液9 mL，置QuECHERS凈化管（無水硫酸鎂900 mg、N-丙基乙二胺300 mg、十八烷基硅烷鍵合硅膠300 mg、硅膠300 mg、石墨化炭黑90 mg）中，渦旋使充分混勻，再置振蕩器上劇烈振蕩5 min使凈化完全，離心5 min，精密吸取上清液5 mL，加內(nèi)標(biāo)溶液0.3 mL，置氮吹儀上，40 ℃水浴濃縮至近干，加初始比例流動相定容至l mL，渦旋混勻，微孔濾膜過濾，即得。

2.8 ?方法學(xué)考察

2.8.1 ?線性關(guān)系與檢測限

精密量取“2.4”項(xiàng)下混合對照品貯備溶液適量，采用倍數(shù)稀釋法分別稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和“2.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜峰面積。以對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸。以信噪比（S/N）=3時各對照品的量作為檢出限。結(jié)果50種待測成分回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.982，表明線性關(guān)系良好，各成分線性范圍、回歸方程、檢出限見表9。

2.8.2 ?精密度試驗(yàn)

取混合對照品貯備溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和“2.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行分析，結(jié)果各成分色譜峰積分面積的RSD均小于8%，表明精密度良好。

2.8.3 ?重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，按“2.4”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和“2.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果各成分峰面積的RSD≤9%，表明重復(fù)性良好。

2.8.4 ?加樣回收率試驗(yàn)

取已知農(nóng)藥殘留量的當(dāng)歸樣品，分別精密加入3個水平（50、200、500 ng/g）的混合對照品貯備溶液，按“2.7”項(xiàng)下方法平行制備3份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和“2.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果平均回收率為67.3%～103.5%，RSD為0.8%～14.0%，見表4。表明該方法準(zhǔn)確可靠，符合痕量物質(zhì)檢出要求。

2.9 ?樣品含量測定結(jié)果

取20批岷縣當(dāng)歸樣品，按“2.7”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件和“2.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件分別測定。結(jié)果50種禁限用農(nóng)藥檢測指標(biāo)在20批岷縣當(dāng)歸樣品中最終檢出11種;甲拌磷、辛硫磷在所有樣品中均檢出，且殘留量分布有較大差異;辛硫磷殘留量檢出較低，除S4外，其他樣品均低于5 μg/kg;S7甲拌磷殘留檢出量高達(dá)822.5 μg/kg;20批樣品中甲基異硫磷及苯線磷檢出率也較高;S8檢出禁限用農(nóng)藥多達(dá)10種。20批樣品農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果見表5。岷縣當(dāng)歸農(nóng)藥殘留量檢測結(jié)果與實(shí)地調(diào)研所悉農(nóng)藥施用情況基本相符。

3 ?討論

農(nóng)藥殘留分析屬于痕量分析，LC-MS/MS技術(shù)是目前最重要、應(yīng)用最廣泛的多農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)[8-9]。本研究20批當(dāng)歸樣品農(nóng)藥殘留檢測涵蓋了50種禁限用農(nóng)藥，其中包括部分高毒、高風(fēng)險農(nóng)藥品種，當(dāng)歸主要使用甲基異柳磷、甲拌磷、多菌靈、毒死蜱、苯線磷等農(nóng)藥，本方法適用于道地藥材岷縣當(dāng)歸的農(nóng)藥多殘留測定?？傮w來看，除個別批次外，20批樣品中農(nóng)藥檢出品種不多，檢出量大部分在限量范圍內(nèi)。根據(jù)現(xiàn)場調(diào)研，當(dāng)歸農(nóng)藥殘留主要來自三方面：一是藥材種苗栽培前用農(nóng)藥蘸根防止病蟲害，二是種植過程中直接施用，三是輪作植物中使用而殘留于土壤中[10]。鑒于當(dāng)歸為常用大宗中藥材，且單劑用量大，建議新版藥典在當(dāng)歸標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下制定農(nóng)藥多殘留限度要求，以確保藥品質(zhì)量，保障用藥安全。

岷縣當(dāng)歸為甘肅省道地藥材和大宗藥材之一，岷縣當(dāng)歸產(chǎn)業(yè)已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民創(chuàng)業(yè)增收的重要支柱。受經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)使，部分當(dāng)歸種植戶不重視輪作，導(dǎo)致當(dāng)歸生長過程中病蟲害加劇，進(jìn)而出現(xiàn)農(nóng)藥不合理使用、濫用情況。為保證岷縣當(dāng)歸品質(zhì)，建議有關(guān)部門加強(qiáng)岷歸種植過程中的科學(xué)引導(dǎo)，建立岷歸種植規(guī)范，加強(qiáng)外源性風(fēng)險管控力度，合理使用低毒農(nóng)藥，避免禁限用農(nóng)藥污染風(fēng)險。

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（收稿日期：2019-03-03）

（修回日期：2019-03-21;編輯：陳靜）