謝海花

福建省立醫(yī)院南院 福建省立金山醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建省福州市 350028

無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)又稱B群鏈球菌(Group B streptococcus，GBS)，是導(dǎo)致圍產(chǎn)期母嬰感染的重要病原菌之一，占16%～61%[1]。孕婦感染后可引起羊膜炎、傷口感染、血流和尿路感染等，新生兒感染可引起肺炎、腦膜炎和敗血癥等，是孕婦流產(chǎn)、胎膜早破和危及新生兒生命的重要原因[2-3]。統(tǒng)計(jì)分析，新生兒有50.0%的概率從產(chǎn)道攜帶無(wú)乳鏈球菌，其中有2%的概率會(huì)引起新生兒感染[4]。因此，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)孕產(chǎn)婦無(wú)乳鏈球菌的產(chǎn)道感染情況和耐藥狀況，并在分娩前進(jìn)行干預(yù)，可有效預(yù)防侵襲性新生兒GBS感染，對(duì)保證孕婦和新生兒健康具有重要的臨床意義。筆者對(duì)本院門診的3 108例孕35～37周的孕婦無(wú)乳鏈球菌的帶菌情況進(jìn)行了初步研究，探討福州地區(qū)育齡女性圍產(chǎn)期無(wú)乳鏈球菌的感染情況，并分析其藥敏結(jié)果，預(yù)防新生兒無(wú)乳鏈球菌感染性疾病的發(fā)生。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1—11月在我院門診健康檢查的孕婦共3 108例。入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)孕期35～37周；(2)患者接受生殖道標(biāo)本培養(yǎng)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有其他泌尿生殖道感染性疾??；(2)長(zhǎng)期使用抗生素或激素類藥物。

1.2 標(biāo)本來(lái)源 采集陰道分泌物標(biāo)本共3 108份。陰道分泌物采集方法：患者取膀胱截石位，消毒外陰并清除外陰分泌物，取樣前對(duì)陰道未做清潔處理，使用一次性采樣無(wú)菌拭子插入陰道1/3處采集分泌物，采集后置于COPAN運(yùn)送培養(yǎng)基中立即送檢培養(yǎng)。

1.3 儀器和試劑 哥倫比亞血平板購(gòu)自鄭州市貝瑞特生物技術(shù)有限公司，GBS顯色培養(yǎng)基購(gòu)自鄭州安圖生物工程股份有限公司。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌鑒定卡GP、革蘭陽(yáng)性菌藥敏卡AST-GP67和全自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)(VITEK2-Compact)購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司。

1.4 細(xì)菌的培養(yǎng)與鑒定 血瓊脂平板和GBS顯色培養(yǎng)基接種標(biāo)本，并置于培養(yǎng)箱(溫度35℃，二氧化碳濃度5%)中培養(yǎng)24h。對(duì)血平板上β-溶血的可疑菌落進(jìn)行革蘭染色和觸酶試驗(yàn)，對(duì)革蘭染色陽(yáng)性和觸酶試驗(yàn)陰性者進(jìn)行協(xié)同溶血試驗(yàn)(CAMP)，指示菌株為金黃色葡萄球菌ATCC 25923(購(gòu)自國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心)。同時(shí)直接選取GBS顯色平板上的淺粉到紅色典型菌落使用VITEK2-Compact全自動(dòng)微生物分析儀與CAMP試驗(yàn)進(jìn)一步進(jìn)行菌種鑒定。CAMP試驗(yàn)與上機(jī)鑒定均符合者確認(rèn)為無(wú)乳鏈球菌。

1.5 細(xì)菌的藥敏試驗(yàn) 細(xì)菌的耐藥性檢測(cè)使用VITEK2-Compact全自動(dòng)微生物分析儀和革蘭陽(yáng)性球菌藥敏卡(AST-GP67)，檢測(cè)藥物包括：青霉素G、氨芐青霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、氯潔霉素、奎奴普丁/達(dá)福普汀、力奈唑胺、萬(wàn)古霉素、四環(huán)素、替加環(huán)素。藥物敏感性判定均采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)2017年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，分為敏感(S)、中介(I)、耐藥(R)。認(rèn)定耐藥率=R/(R+I+S)。

2 結(jié)果

2.1 無(wú)乳鏈球菌檢出情況 通過(guò)在血平板和GBS顯色平板上直接接種，3 108例圍產(chǎn)期孕婦共檢出無(wú)乳鏈球菌173株，陽(yáng)性率為5.57%(173/3 108)，其中28例伴有真菌感染。血平板上培養(yǎng)出的GBS為典型的β-溶血性菌落 (圖1A)。GBS顯色平板上培養(yǎng)出的典型GBS為圓形、透亮的淺粉色到紅色的菌落(圖1B)，培養(yǎng)24h后菌落2～3mm，培養(yǎng)48h后菌落顏色為深紅到紫色。非GBS的菌落呈現(xiàn)出藍(lán)色或灰色(圖1C)。

圖1 無(wú)乳鏈球菌在平板上的形態(tài)

A:血平板上的GBS形態(tài) B：GBS顯色平板上的GBS形態(tài) C:GBS顯色平板上非GBS的形態(tài)

2.2 耐藥性分析 對(duì)173份陽(yáng)性標(biāo)本全部上機(jī)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，抗生素的耐藥性分析顯示：無(wú)乳鏈球菌對(duì)青霉素G、氨芐青霉素、利奈唑胺、萬(wàn)古霉素和替加環(huán)素的耐藥率均為0.00%，環(huán)丙沙星的耐藥率為26.01%、左氧氟沙星的耐藥率為31.79%、莫西沙星的耐藥率為26.01%、氯潔霉素的耐藥率為61.85%、奎奴普丁/達(dá)福普汀的耐藥率為0.58%、四環(huán)素的耐藥率為77.46%，具體見表1。

表1 173株無(wú)乳鏈球菌對(duì)不同抗菌藥物的耐藥性情況

3 討論

無(wú)乳鏈球菌是女性生殖道常見的一種兼性厭氧菌，是圍產(chǎn)期孕婦感染的首要病原菌[1-2]。圍產(chǎn)期孕婦感染無(wú)乳鏈球菌會(huì)引起絨毛膜羊膜炎、胎膜早破等，從而誘發(fā)胎兒早產(chǎn)、死產(chǎn)等；研究發(fā)現(xiàn)GBS可通過(guò)羊水或分娩時(shí)經(jīng)產(chǎn)道傳染給新生兒，從而引起新生兒肺炎、敗血癥和化膿性腦膜炎等[1-3]。據(jù)美國(guó)疾病控制預(yù)防中心報(bào)道，每年平均有8 000例新生兒感染GBS，病死率約為5%[2]。

GBS的感染率具有種族、區(qū)域和年齡的差異性，在不同國(guó)家感染率差異很大，如美國(guó)為2.0%～29.0%，韓國(guó)為13.0%[4]。而在國(guó)內(nèi)，因孕周、陰道分泌物的采集方法、檢測(cè)樣本的數(shù)目以及檢測(cè)方法的不同等，孕婦GBS的帶菌率也存在較大差別，浮動(dòng)在2.4%～37.5%之間[5]。福州地區(qū)目前還未見相關(guān)報(bào)道，本文結(jié)果顯示，3 108例產(chǎn)婦確診173株GBS，陽(yáng)性率為5.57%(173/3 108)，與張傳飛[6]報(bào)道的陽(yáng)性率5.9%(177/3 000)相近。

目前醫(yī)學(xué)界對(duì)預(yù)防圍產(chǎn)期GBS感染的主要措施是使用抗菌藥物進(jìn)行干預(yù)治療，CLSI推薦GBS感染可使用經(jīng)驗(yàn)性青霉素進(jìn)行干預(yù)治療。青霉素可作為圍產(chǎn)期孕婦治療無(wú)乳鏈球菌感染的首選用藥，備選藥物可用氨芐西林。目前尚未發(fā)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌對(duì)青霉素存在耐藥，若孕婦對(duì)青霉素過(guò)敏但非速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)者可選擇使用頭孢唑啉，因其穿透胎盤的方式與青霉素相似；若孕婦有青霉素過(guò)敏史且為速發(fā)型超敏反應(yīng)者則需進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇合適的抗生素[2]。本文結(jié)果也顯示，無(wú)乳鏈球菌對(duì)萬(wàn)古霉素、青霉素、利奈唑胺、氨芐青霉素和替加環(huán)素等均無(wú)耐藥，敏感性為100%，對(duì)氯潔霉素和四環(huán)素的敏感性較低，與雷蜜等國(guó)內(nèi)其他的[7]報(bào)道相近。

美國(guó)疾病控制預(yù)防中心于2010年發(fā)布了GBS的最新防治指南。指南中建議對(duì)所有妊娠35～37周的孕婦進(jìn)行GBS的細(xì)菌培養(yǎng)，培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性者應(yīng)給予GBS預(yù)防性治療(Intrapartumantibiotic prophylaxis，IAP)[2]。目前為止，國(guó)內(nèi)還沒有發(fā)布孕期GBS篩查及分娩時(shí)預(yù)防性應(yīng)用抗生素的相關(guān)防治指南。對(duì)GBS攜菌孕婦在臨產(chǎn)時(shí)或胎膜早破時(shí)進(jìn)行敏感抗生素預(yù)防性治療，可有效地降低新生兒GBS敗血癥的發(fā)病率，改善妊娠結(jié)局[8]。因此，將GBS篩查納入妊娠晚期孕婦的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目，對(duì)陽(yáng)性患者進(jìn)行積極有效的干預(yù)治療，通過(guò)良好的GBS管理，可有效降低孕婦的感染率，避免早產(chǎn)、宮內(nèi)感染等產(chǎn)前不良事件的發(fā)生。