陳景新，倪 林,3 *，王 欽，吳楚紅，裴新穎，鄒小興，鄒雙全

1福建農(nóng)林大學(xué)植物保護學(xué)院；2福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院；3自然生物資源保育利用福建省高校工程研究中心，福州 350002

圓齒野鴉椿(EuscaphiskonishiiHayata)為省沽油科(Staphyleaceae)野鴉椿屬(EuscaphisSieb.et Zucc.)植物。野鴉椿屬植物共3種，中國有2種，分別是野鴉椿(Euscaphisjaponica(Thunb.) Dippe)和圓齒野鴉椿(EuscaphiskonishiiHayata)，是民間常用中草藥，具有抗炎鎮(zhèn)痛，祛風(fēng)除濕，活血化瘀的功效[1]。該植物廣泛分布于長江以南地區(qū)，據(jù)作者統(tǒng)計，僅福建地區(qū)就約有10萬株，資源較為豐富。已發(fā)現(xiàn)的野鴉椿屬植物的化學(xué)成分有苯丙素類，三萜類，黃酮類，鞣質(zhì)類化合物，其具有抗炎、抗腫瘤、抗肝纖維化、抑菌等藥理活性[2]，而對圓齒野鴉椿果皮化學(xué)成分目前尚無報道。圓齒野鴉椿果皮生物量大，常年掛于枝頭色澤鮮亮甚少植物病害，推測可能與自身所特有的次生代謝產(chǎn)物有關(guān)。而本課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)，該植物的果皮提取物對多種植物病原真菌顯示較好的抑制作用，尤以瓜果霉腐菌最為突出。

因此，本研究采用生物活性追蹤法，對圓齒野鴉椿果皮提取的抑制瓜果腐霉的活性成分進行了系統(tǒng)研究，以期為圓齒野鴉椿植物資源利用和植物源殺菌劑的研發(fā)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters W2695-QDA高效液相色譜儀-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國沃特世公司)；CPA225D型電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；高速多功能粉碎機(永康市天祺盛世工貿(mào)有限公司)；KQ500DE型數(shù)控超聲波清洗機(昆山超聲儀器公司)；BS-100A自動部份收集器(上海滬西分析儀器廠有限公司)；WRR熔點儀(鄭州南北儀器設(shè)備有限公司)；BS-214D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；LC-20AP制備型高效液相色譜儀(日本島津有限公司)。

1.2 材料

硅膠、氧化鋁(青島海洋化工有限公司)；D101大孔吸附樹脂、Sephadex LH-20凝膠(美國通用電氣公司)；PRP-512A樹脂(北京聚福樹脂廠)；YMC-Pack ODS-A反相色譜柱(日本YMC公司)；Diamonsil C18分析型反相色譜柱(北京迪馬科技有限公司)；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯(西隴化工有限公司)；色譜純甲醇、乙腈(默克公司)；丁子香酚(山東億嘉農(nóng)化有限公司)。

圓齒野鴉椿果皮樣品于2016年11月，采自福建三明清流圓齒野鴉椿種植基地上坡位的10棵4～5年生樹，經(jīng)福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院鄒雙全教授鑒定為省沽油科野鴉椿屬圓齒野鴉椿(EuscaphiskonishiiHayata)，臘葉標(biāo)本(No.20161105)保存在福建農(nóng)林大學(xué)植物保護學(xué)院制藥工程系。樣品采集后陰干，粉碎過40目篩，保存?zhèn)溆谩?/p>

瓜果腐霉菌(Pythiumaphanidermatum)該供試真菌由福建農(nóng)林大學(xué)農(nóng)藥學(xué)教育部重點實驗室提供，菌種保存于福建農(nóng)林大學(xué)植物保護學(xué)院制藥工程系。

2 實驗方法

2.1 提取分離

取干燥的圓齒野鴉椿果皮粗粉10 kg，用100 L的70%的乙醇回流提取3次每次2 h，提取液減壓濃縮得浸膏(A)2.7 kg。將所得浸膏經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，分別用水、70%的乙醇進行洗脫，得到水部位(A2)和70%乙醇洗脫部位(A3)。將A2部位經(jīng)D101孔吸附樹脂色譜柱進行吸附，分別用水、10%、30%、60%、95%乙醇進行洗脫，收集洗脫液減壓濃縮后所得B1～B5部位。將B2部位(166 g)與60～100目硅膠拌樣，硅膠柱色譜分離，采用V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=100∶1、50∶1、30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1依次進行梯度洗脫，收集餾分，通過TLC檢測合并，得15個餾分，B2.1～B2.15。取B2.5(4.4 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1洗脫分離，收集餾分，通過TLC檢測合并得到6個餾分B2.5.1～B2.5.6。其中B2.5.2(230 mg)經(jīng)制備型HPLC進行制備，以甲醇-水(45∶55)為流動相，得到化合物7(3.5 mg)、8(12.8 mg)、9(11.32 mg)、10(20.19 mg)。B2.5.3(158 mg)經(jīng)制備型HPLC進行制備以甲醇-水(55:45)為流動相，得到化合物和11(6.8 mg)、12(9.8 mg)、13(27.3 mg)。B2.5.4(220 mg)經(jīng)硅膠柱V(二氯甲烷)∶V(甲醇)∶(水)=5∶1∶0.1為流動相，進行洗脫，得14(19.8 mg)，15(27.3 mg)。B2.6(4.8 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以甲醇洗脫分離，得到7個組分為B2.6.1～A2.6.7；B2.6.3(177 mg)經(jīng)制備型HPLC進行制備以甲醇-水(48∶52)為流動相純化得到化合物16(3.3 mg)和17(12.8 mg)；B2.6.4(100 mg)經(jīng)制備型HPLC以甲醇-水(55∶45)為流動相，制備得到化合物18(40.9 mg)。取B2.8部位(13 g)經(jīng)硅柱色譜，依次用V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、0∶1依次進行梯度洗脫，收集餾分，通過TLC檢測合并，得到7個餾分B2.8.1～B2.8.7。B2.8.3(737 mg)經(jīng)制備型HPLC進行制備以甲醇-水(40∶60)為流動相純化得到化合物1(9.3 mg)和2(10.4 mg)，取B2.8.4(3.87 g)經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜，以V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=1∶1洗脫分離，收集餾分，通過TLC檢測合并得到6個餾分B2.8.4.1～B2.8.4.6，其中B2.8.4.2(96 mg)經(jīng)制備型HPLC進行制備以甲醇-水(38∶62)為流動相純化得到化合物3(22.8 mg)。B2.8.4.4(172 mg)部位經(jīng)制備型HPLC進行制備以甲醇-水(38∶62)為流動相，制備得到化合物4(11.5 mg)、5(7.6 mg)、6(22.2 mg)。

2.2 果皮粗提物抑菌活性測定

采用菌絲生長速率法[3]測定圓齒野鴉椿果皮粗提物對瓜果霉腐菌菌絲的抑制作用。將試樣用50%甲醇溶液溶解，制成1.0 g/L含藥培養(yǎng)進行抑菌活性初篩；以50%甲醇溶液為空白對照；打取直徑為5 mm的瓜果腐霉菌餅，接種于含藥培養(yǎng)基上，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并計算菌絲生長抑制率。將初篩抑制率 ≥ 40%的提取物，配制成濃度為0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 g/L的含藥培養(yǎng)基，接種培養(yǎng)后測定其抑菌活性并計算毒力方程、抑制中濃度(EC50)和決定系數(shù)(R2)。

2.3 單體化合物對菌絲生長抑制作用的測定

采用菌絲生長速率法[3]測定化合物1～18對瓜果霉腐菌的抑制活性。將上述化合物用50%甲醇溶液溶解，藥液最終濃度150 mg/L，以此濃度進行抑菌活性篩選。將初篩抑制率≥ 40%的提取物，配制成濃度為50、100、200、400、800 μg/mL的含藥培養(yǎng)基，接種培養(yǎng)后測定其抑菌活性并計算毒力方程、抑制中濃度(EC50)和決定系數(shù)(R2)。

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色油狀物(甲醇)；分子式為C26H34O11；mp.140～142 ℃；ESI-MS：m/z545 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：9.03(1H，s，4-OH)，6.94(1H，d，J=1.6 Hz)，6.77(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz)，6.70(1H，d，J=8.0 Hz)，5.49(1H，d，J=6.0 Hz)，4.24(1H，d，J=8.0 Hz)，4.05(1H，dd，J=5.6，9.2 Hz)，3.77(3H，s)，3.74(3H，s)，2.54(2H，s)，1.68(2H，m)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：147.5(C-3)，146.2(C-4)，145.5(C-4′)，143.4(C-3′)，135.2(C-1′)，132.5(C-1)，128.2(C-5′)，118.3(C-6)，116.8(C-6′)，115.3(C-5)，112.6(C-2′)，110.3(C-2)，103.1(C-1")，86.7(C-7)，76.9(C-3′′)，76.7(C-5′′)，73.5(C-2")，70.1(C-4")，63.0(C-9)，61.1(C-6′′)，60.2(C-9′)，55.7(3"-OCH3)，55.6(3′-OCH3)，51.1(C-8)，34.8(C-7′)，31.6(C-8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[4]報道一致，故鑒定化合物1為(7S，8R)-二氫脫氫二松柏醇9-O-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2黃色油狀物(甲醇)；分子式為C17H19O6；ESI-MS：m/z341 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.60(1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-6)，7.48(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，6.91(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-2′)，6.82(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.67(2H，m，H-5′，H-6′)，4.75(1H，dd，J=9.2，5.2 Hz，H-8)，4.09(1H，t，J=9.2 Hz，H-9a)，3.79(3H，s，3-OCH3)，3.72(3H，s，3′-OCH3)，3.51(1H，dd，J=9.2，5.2 Hz，H-9b)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：197.1(C-7)，151.1(C-4)，147.6(C-3′)，147.5(C-3)，145.6(C-4′)，128.5(C-1)，128.3(C-1′)，123.6(C-6)，120.3(C-6′)，115.5(C-5′)，114.9(C-5)，112.4(C-2′)，111.6(C-2)，63.8(C-9)，55.6(3-OCH3)，55.5(3′-OCH3)，53.9(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道一致，故鑒定化合物2為楝葉吳萸素B。

化合物3黃色油狀物(甲醇)；分子式為C20H26O7；ESI-MS：m/z461 [M﹣H]-；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：6.97(1H，d，J=1.2 Hz，H-2)，6.80(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.75(1H，dd，J=1.2，8.4 Hz，H-6)，6.68(1H，dd，J=1.2，8.4 Hz，H-5′)，6.64(1H，d，J=8.4 Hz，H-6′)，5.30(1H，d，J=4.4 Hz，H-7)，3.73(3H，s，2′-OCH3)，3.69(3H，s，3-OCH3)，1.67(2H，m，H-8′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：149.5(C-2′)，147.0(C-3)，145.7(C-4)，145.5(C-1′)，135.2(C-4′)，132.7(C-1)，120.2(C-5′)，120.2(C-6)，116.0(C-5)，114.6(C-6′)，112.9(C-2)，111.5(C-3′)，103.3(C-1′′)，81.8(C-8)，76.9(C-3")，76.7(C-5")，73.4(C-2")，71.6(C-7)，70.0(C-4")，60.9(C-6")，60.2(C-9)，60.2(C-9′)，55.4(2′-OCH3)，55.6(3-OCH3)，34.5(C-8′)，31.3(C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道一致，故鑒定化合物3為(7R，8R)-threo-7，9，9′-三羥基-3，3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4黃色油狀物(甲醇)；分子式為C30H34O9；ESI-MS：m/z561 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:9.03(1H，s，4-OH)，6.90(1H，d，J=1.6 Hz)，6.76(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz)，6.75(1H，d，J=8.0 Hz)，5.03(1H，d，J=4.8 Hz)，3.76(6H，m)，3.74(3H，s)，1.68(2H，m)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：147.5(C-3)，146.2(C-4)，145.5(C-4′)，143.4(C-3′)，135.2(C-1′)，132.5(C-1)，128.2(C-5′)，118.3(C-6)，116.8(C-6′)，115.3(C-5)，112.6(C-2′)，110.3(C-2)，103.1(C-1")，86.7(C-7)，76.9(C-3")，76.7(C-5")，73.5(C-2")，70.1(C-4")，63.0(C-9)，61.1(C-6")，60.2(C-9′)，55.6(3"-OCH3)，55.4(3，3′-OCH3)，51.1(C-8)，34.8(C-7′)，31.6(C-8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道一致，故鑒定化合物4為illiciumlignan B。

化合物5黃色粉末(甲醇)；分子式為C16H12O7；mp.301～302 ℃；ESI-MS：m/z317 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.45(1H，s，5-OH)，7.75(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.70(1H，dd，J=2.0，6.0 Hz)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.47(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，7.76(1H，t，J=2.5 Hz，H-2′)，6.95(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.75(1H，d，J=2.0 Hz，H-6′)，3.84(3H，s，-OCH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：175.9(C-4)，164.0(C-7)，160.7(C-5)，156.2(C-9)，147.4(C-4′)，146.8(C-2)，146.6(C-3′)，135.8(C-3)，122.0(C-1′)，121.7(C-6′)，115.5(C-5′)，111.7(C-2′)，103.0(C-10)，98.2(C-6)，55.7(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道一致，故鑒定化合物5為異鼠李素。

化合物6黃色粉末(甲醇)；分子式為C15H10O6；mp.276～277 ℃；ESI-MS：m/z287 [M+H]+；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：12.48(1H，s，5-OH)，8.04(2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′)，6.92(2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′)，6.43(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.19(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ：175.9(C-4)，163.9(C-7)，160.7(C-5)，159.2(C-4′)，156.2(C-8a)，146.8(C-2)，135.7(C-3)，129.5(C-2′)，129.5(C-6′)，121.7(C-1′)，115.5(C-3′)，115.5(C-5′)，103.0(C-4a)，98.2(C-6)，93.5(C-8)。上述數(shù)據(jù)與文獻[9]報道一致，故鑒定化合物6為山萘酚。

化合物7黃色粉末(甲醇)；分子式為C15H10O7；mp.304～305 ℃；ESI-MS：m/z303 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.5(1H，s，5-OH)，9.40(2H，s，C3′，4′-OH)，7.67(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，7.54(1H，dd，J=2.2，8.4 Hz，H-6′)，6.88(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，6.40(1H，d，J=2.0 Hz，H-5′)，6.18(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：175.7(C-4)，162.1(C-7)，161.6(C-9)，156.6(C-5)，147.8(C-4′)，146.8(C-2)，144.3(C-3′)，135.8(C-3)，122.9(C-1′)，121.9(C-6′)，115.6(C-2′)，115.3(C-5′)，104.9(C-10)，98.6(C-6)，93.3(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道一致，故鑒定該化合物7為槲皮素。

化合物8黃色粉末(甲醇)；分子式為C21H20O11；mp.275～276 ℃；ESI-MS：m/z465 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：12.64(1H，s，5-OH)，7.58(1H，dd，J=2.0，9.2 Hz，H-6′)，6.84(1H，d，J=2.0 Hz，H-6′)，6.40(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.20(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.46(1H，d，J=2.0 Hz，H-1′′)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：177.5(C-4)，164.2(C-7)，161.3(C-9)，156.4(C-5)，156.2(C-9)，148.5(C-4′)，144.9(C-3′)，133.3(C-3)，121.6(C-6′)，121.2(C-1′)，116.2(C-2′)，115.2(C-5′)，104.0(C-10)，100.8(C-1′′)，99.6(C-6)，93.6(C-8)，77.6(C-5′′)，76.5(C-3′′)，74.1(C-4′′)，70.0(C-4′′)，61.0(C-6′′)，上述數(shù)據(jù)與文獻[11]報道一致，故鑒定化合物8為槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物9黃色粉末(甲醇)；分子式為C28H32O16；mp.266～267 ℃；ESI-MS：m/z625 [M+H]+；1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：12.56(1H，s，5-OH)，7.85(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.51(1H，dd，J=2.0，8.0 Hz，H-6)，6.90(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.40(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.18(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，5.43(1H，d，J=7.0 Hz，H-1′′)，4.41(1H，brs，H-1′′′)，3.83(3H，s，3′-OCH3)，0.97(3H，d，J=6.0 Hz)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：177.2(C-4)，164.2(C-7)，161.2(C-5)，156.5(C-9)，156.3(C-2)，149.4(C-3′)，146.9(C-4′)，133.0(C-3)，122.2(C-6′)，121.0(C-1′)，115.2(C-2′)，113.2(C-5′)，101.2(C-1′′)，100.9(C-1′′′)，98.9(C-6)，93.9(C-8)，76.4(C-3′′)，75.9(C-5′′)，74.3(C-2′′)，71.8(C-4′′′)，70.6(C-4′′)，70.3(C-3′′′)，70.1(C-2′′′)，68.3(C-5′′′)，66.8(C-6′′)，55.6(3′-OCH3)，17.7(C-6′′′)，上述數(shù)據(jù)與文獻[12]報道一致，故鑒定化合物9為異鼠李素3-O-β-D-蕓香糖苷。

化合物10黃色粉末(甲醇)；分子式為C26H28O14；mp.222～224 ℃；ESI-MS：m/z565 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.69(1H，s，5-OH)，10.26(1H，brs，7-OH)，9.25(1H，brs，4′-OH)，8.05(2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′)，6.97(2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′)，6.84(1H，s，H-3)，4.77(1H，d，J=9.9 Hz，H-1′′′)，4.73(1H，d，J=9.6 Hz，H-1′′)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.3(C-4)，164.1(C-2)，161.5(C-7)，161.2(C-4′)，158.2(C-5)，155.1(C-4a)，129.0(C-2′，6′)，121.5(C-1′)，115.9(C-3′，5′)，108.1(C-6)，105.1(C-8)，103.7(C-8a)，102.6(C-3)，81.9(C-5′′)，78.9(C-3′′)，74.2(C-3′′′)，73.8(C-1′′′)，73.3(C-1′′)，70.9(C-2′′)，70.5(C-5′′′)，70.1(C-4′′)，69.6(C-2′′′)，68.4(C-4′′′)，61.2(C-6′′)，上述數(shù)據(jù)與文獻[13]報道一致，故鑒定為化合物10為夏佛托苷。

化合物11黃色粉末(甲醇)；分子式為C25H26O13；mp.277～279 ℃；ESI-MS：m/z535 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.69(1H，s，5-OH)，8.23(1H，brs，7-OH)，7.55(1H，dd，J=2.0，8.2 Hz，H-6′)，7.48(1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，6.88(1H，d，J=2.0 Hz，H-5′)，6.69(1H，d，J=2.0 Hz，H-3)，4.75(1H，d，J=2.0 Hz，H-1′′′)，4.72(1H，d，J=2.0 Hz，H-1′′)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：182.2(C-4)，164.3(C-2)，161.1(C-7)，158.2(C-5)，155.1(C-4a)，149.7(C-4′)，145.9(C-3′)，121.9(C-1′)，119.5(C-6′)，115.6(C-5′)，114.1(C-2′)，108.1(C-6)，105.1(C-8)，103.7(C-8a)，102.6(C-3)，82.1(C-5′′)，79.0(C-3′′)，74.2(C-1′′′)，73.8(C-3′′′)，73.3(C-1′′)，70.8(C-4′′)，70.7(C-5′′′)，70.1(C-2′′)，69.6(C-2′′′)，68.4(C-4′′′)，61.6(C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道一致，故鑒定化合物11為木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷-8-C-α-吡喃阿拉伯糖苷。

化合物12白色粉末(甲醇)；分子式為C7H6O2；mp.115～116 ℃；ESI-MS：m/z123 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：9.78(1H，s，-CHO)，7.76(2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6)，6.93(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：190.9(-CHO)，163.4(C-4)，132.1(C-2，6)，128.3(C-1)，115.8(C-3，5)，以上數(shù)據(jù)與文獻[15]報道一致，故鑒定化合物12為對羥基苯甲醛。

化合物13白色粉末(甲醇)；分子式為C8H8O3；mp.151～152 ℃；ESI-MS：m/z169 [M+H]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.44(1H，d，J=2.4 Hz，H-2)，7.35(1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-6)，6.54(1H，d，J=8.4 Hz，H-5)，3.65(3H，s，3-OCH3)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：174.1(-COOH)，151.1(C-4)，147.3(C-3)，131.0(C-6)，123.6(C-1)，114.7(C-5)，114.5(C-2)，55.8(3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[16]報道一致，故鑒定該化合物13為香草酸。

化合物14白色粉末(甲醇)；分子式為C19H32O7；mp.136～137 ℃；ESI-MS：m/z375 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ:4.21(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，3.82(1H，m，H-9)，1.56(3H，s，H-13)，1.05(1H，d，J=6.0 Hz，H-1′)1.00(3H，s，H-12)，0.98(3H，s，H-11)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：136.9(C-6)，123.7(C-5)，101.5(C-1′)，76.8(C-9)，76.8(C-5′)，73.5(C-3′)，71.6(C-2′)，70.2(C-4′)，66.3(C-3)，61.2(C-6′)，44.9(C-2)，40.3(C-4)，39.8(C-1)，37.2(C-8)，29.6(C-12)，28.2(C-11)，24.1(C-7)，23.5(C-10)，19.5(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻[17]報道一致，故鑒定化合物14為[R-(R*，R*)]-(1R)-3-[(4R)-4-羥基-2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基]-1-甲基丙基-β-D吡喃葡萄糖苷。

化合物15無定型粉末(甲醇)；分子式C19H30O7；mp.121～123 ℃；ESI-MS：m/z385 [M+H]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.32(1H，d，J=16.4 Hz，H-7)，6.13(1H，d，J=16.4 Hz，H-8)，4.43(1H，d，J=7.6 Hz，H-1′)，2.30(3H，s，H-10)，1.94(1H，d，J=12.4 Hz，H-2)，1.80(3H，s，H-11)，1.14(3H，s，H-12)，1.11(3H，s，H-13)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：201.2(C-9)，144.4(C-7)，137.1(C-6)，134.0(C-8)，133.2(C-7)，102.5(C-1′)，78.1(C-5′)，77.9(C-3′)，75.2(C-2′)，72.5(C-4′)，71.7(C-3)，62.7(C-6′)，47.4(C-4)，40.4(C-2)，37.7(C-1)，30.5(C-13)，28.7(C-12)，27.2(C-10)，21.8(C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道一致，故鑒定化合物15為(3E)-4-[(3R，4R，5R)-4-(β-D-吡喃葡糖氧基)-3，5-二羥基-2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基]-3-丁烯-2-酮。

化合物16黃色油狀物(甲醇)；分子式為C19H30O8；ESI-MS：m/z409 [M+Na]+；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：5.95(1H，d，J=15.2 Hz，H-7)，5.76(1H，s，H-4)，5.15(1H，d，J=4.2 Hz)，5.02(1H，s，OH)，4.90(1H，s，OH)，4.43(1H，m，H-9)，3.63(1H，m，H-3′)，3.03(2H，m，H-4′)，2.94(1H，m，H-5′)，2.55(1H，d，J=16.8 Hz，H-2b)，2.05(1H，d，J=16.8 Hz，H-2a)，1.81(3H，s，H-13)，1.18(3H，d，J=6.4 Hz，H-10)，0.91(3H，s，H-11)，0.93(3H，s，H-12)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ：197.5(C-3)，163.9(C-5)，131.7(C-8)，131.7(C-7)，131.5(C-4)，100.0(C-1′)，78.0(C-6)，77.2(C-3′)，77.0(C-5′)，733(C-9)，72.0(C-2′)，70.1(C-4′)，61.1(C-6′)，49.4(C-2)，41(C-1)，24.1(C-12)，23.2(C-11)，22.1(C-10)，18.7(C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻[19]報道一致，故化合物16鑒定為長春花苷。

化合物17黃色油狀物(甲醇)；分子式為C10H14O2；ESI-MS：m/z169 [M﹣H]-；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ：7.14(4H，m，H-2，3，5，6)，2.59(2H，q，J=7.6 Hz，CH2)，1.17(3H，t，J=7.6 Hz，CH3)；13C NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ：143.9(C-1)，143.6(C-4)，128.2(C-6)，126.6(C-5)，126.2(C-2)，124.1(C-3)，74.4(C-1′)，68.0(C-2′)，28.7(CH2)，16.1(CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]報道一致，故鑒定化合物17為1-(4-乙基苯基)-1，2-乙二醇。

化合物18無色晶體(甲醇)；分子式為C11H16O3；mp.139～141 ℃；ESI-MS：m/z197 [M+H]+；1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：5.78(1H，s，H-7)，4.99(1H，d，J=3.5 Hz，3-OH)，4.08(1H，m，H-3)，2.28(1H，dd，J=2.5，10.5 Hz，H-4a)，1.86(1H，dd，J=3.0，11.5 Hz，H-2a)，1.66(3H，s，H-11)，1.63(1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，H-4b)，1.41(1H，dd，J=3.5，13.5 Hz，H-2b)，1.38(3H，s，H-9)，1.20(3H，s，H-10)；13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：183.1(C-6)，171.0(C-8)，112.1(C-7)，86.5(C-5)，64.9(C-3)，46.6(C-4)，45.3(C-2)，35.7(C-1)，30.4(C-9)，26.8(C-11)，26.2(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻[21]報道一致，故鑒定化合物18為黑麥草內(nèi)酯。

3.2 果皮粗提物抑菌活性分析

果皮粗提物抑菌活性測定表明：A、A2、A3、B2部位對瓜果霉腐菌菌絲均有一定的抑制作用，其抑制率分別為45.99%±1.94%、63.17%±4.63%、51.52%±1.47%、64.60%±7.63%。其他部位在1.0 g/L濃度下對瓜果霉腐菌菌絲抑制率均低于40%。毒力測試結(jié)果表明，圓齒野鴉椿果皮提取物A、A2、A3、B2對瓜果霉腐菌的EC50值分別為1 175.28、275.10、585.80、207.45 mg/L，如表1所示。

表1 4種不同部位對瓜果霉腐菌菌絲的抑制作用 Table 1 The inhibitory effect of four different parts on P.aphanidermatum

3.3 單體化合物抑菌活性分析

單體化合物抑菌測試結(jié)果表明，化合物1、9、10、11對瓜果霉腐菌都具有較好的抑制作用，與陽性對照藥丁子香酚活性相當(dāng)。除化合物1、9、10、11以外，其余化合物在150 mg/L的濃度下對瓜果霉腐菌的抑制率均低于40%。4種化合物對抑制瓜果霉腐菌菌絲生長的EC50值分別為123.94、56.06、67.66、101.88 μM，如表2所示。

表2 化合物對瓜果霉腐菌的菌絲抑制作用 Table 2 Toxicity of the compounds against P.aphanidermatum

4 討論

本研究首次發(fā)現(xiàn)圓齒野鴉椿果皮提取物對瓜果霉腐菌具有較好的抑制作用，并從活性部位分離鑒定了18已知個化合物，包括4個木脂素類、7個黃酮及其苷類、4個倍半萜及其苷類、3個酚酸類，其中除化合物6～8、12～13外均為該屬植物中首次分離得到?；衔?、9～11對抑制瓜果霉腐菌菌絲生長的EC50值分別為123.94、56.06、67.66、101.88 μM。從化合物分類上來看，圓齒野鴉椿果皮中木脂素類化合物和黃酮碳苷類化合物對瓜果霉腐菌顯示較好的抑制作用，且通過成分研究說明了黃酮碳苷類化合物是該植物的重要成分。

已報道的圓齒野鴉椿的相關(guān)研究多集中于總化學(xué)成分的測定，本研究對圓齒野鴉椿果皮成分進行系統(tǒng)分離鑒定，并發(fā)現(xiàn)對瓜果霉腐菌起抑制作用的單體成分，對繼續(xù)挖掘圓齒野鴉椿抑菌活性成分具有重要意義。另外，且圓齒野鴉椿果皮生物量大，資源豐富，經(jīng)濟成本低，具有較高的開發(fā)價值和應(yīng)用前景。

本研究僅對圓齒野鴉椿果皮粗提物的水洗脫部位(A2)進行了活性成分追蹤，而抑菌測試表明70%乙醇部位(A3)對瓜果霉腐菌仍有抑制作用，其活性成分有待進一步探究。