耿曉桐，王豐青，謝彩俠,，張 苗，陳志紅，龔海燕，雷敬衛(wèi)，張重義

1河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，鄭州450046；2福建農(nóng)林大學(xué)作物科學(xué)學(xué)院作物科學(xué)學(xué)院，福州350000；3河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，鄭州450000

地黃(RehmanniaglutinosaLibosch)是玄參科(Scrophulariaceae)地黃屬多年生草本植物，以根莖入藥，含有糖類、苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜苷類[1]、酚類等物質(zhì)[2]，具有抗衰老、降血糖、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能等多種藥理作用[3]，上述藥理作用均與其抗氧化活性密切相關(guān)[4]。隨著自由基和抗氧化理論研究的深入，尤其是一些合成抗氧化劑的毒副作用被發(fā)現(xiàn)后，天然抗氧化劑的開發(fā)和應(yīng)用越來越受到人們的重視，因此從中草藥及其提取物中尋找低毒、廉價(jià)、高效的抗氧化成分引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注[5]。地黃對生長環(huán)境要求較低，可以大量人工栽培，并將其抗氧化成分進(jìn)行提取制成天然抗氧化劑具有一定的現(xiàn)實(shí)意義[6]。

明朝李時(shí)珍曰:“今人惟以懷慶地黃為上，亦各處隨時(shí)興廢不同爾”，《本草從新》記載:“以懷慶肥大而短，糯體細(xì)皮，菊花心者佳”[7,8]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，道地產(chǎn)區(qū)的懷地黃橫切面有“菊花心”特征。文獻(xiàn)研究表明地黃“菊花心”的比例影響梓醇及毛蕊花糖苷的含量[9,10]。課題組前期研究也發(fā)現(xiàn)地黃有效成分在“菊花心”與“非菊花心”組織部位的分布并不均勻[11]，而且不同種質(zhì)地黃“菊花心”部位的有效成分及表型性狀也存在差異，其中85-5與北京1號地黃塊根的“菊花心”質(zhì)量特征差異較大[12]?？寡趸钚允堑攸S重要的藥理活性之一[4]，目前關(guān)于地黃抗氧化活性的研究主要側(cè)重于不同地黃飲片、多糖及其他提取物等方面[13-15]，而地黃塊根中“菊花心”與非菊花心部位抗氧化活性的研究還未見報(bào)道?；诖?，本實(shí)驗(yàn)以85-5、北京1號地黃為研究對象，對其“菊花心”、“非菊花心”及整體塊根不同極性部位的抗氧化活性進(jìn)行測定，并利用Pearson相關(guān)系數(shù)法對抗氧化活性較強(qiáng)部位的HPLC指紋圖譜與其抗氧化活性進(jìn)行譜效關(guān)系分析，為地黃抗氧化活性物質(zhì)的篩選及地黃菊花心與其道地性關(guān)系的研究提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1510型酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技有限公司)；ME204E萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；DZF-6050真空干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；10～100 μL移液槍(艾本德國際貿(mào)易有限公司)；MS105DU十萬分之一電子天平(奧豪斯儀器有限公司)。

1.2 試劑

抗壞血酸(分析純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，批號：GB/T 15347-1994)、甲醇(分析純，天津恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼( DPPH)(東京化成工業(yè)株式會社)；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇(分析純，天津富宇精細(xì)化工有限公司)；乙腈(色譜純，安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?；溴化鉀(天津恒興試劑制造有限公司)；毛蕊花糖苷(四川維克奇有限公司，批號：MUST-17020715，純度：99.57%)；自制蒸餾水。

1.3 實(shí)驗(yàn)樣品

實(shí)驗(yàn)所用的85-5、北京1號種質(zhì)地黃藥材均采集于道地產(chǎn)區(qū)河南溫縣武德鎮(zhèn)亢村懷地黃種植基地，分別于9.10～11.10在地黃生育期內(nèi)采集地黃塊根，每次隨機(jī)選取10株，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)董誠明教授鑒定為玄參科植物地黃RehmanniaglutinosaLibosch的新鮮塊根。將采集到的兩個種質(zhì)地黃塊根用流水沖洗干凈，并用陶瓷刀將其分為菊花心、非菊花心及整體塊根三部分。將三個部位的藥材烘干、粉碎后過三號篩，保存于干燥器中備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 地黃塊根不同組織及部位的體外抗氧化活性測定方法的建立

2.1.1 供試品溶液的制備[16]

準(zhǔn)確稱取地黃根、菊花心、非菊花心三個部位的粉末300 g，分別以10、8、6倍蒸餾水為提取液，加熱煮沸，保持沸騰1 h，合并提取液，紗布濾過，減壓濃縮至浸膏，減壓濃縮至粉末，即得總提取物。取適量總提取物用蒸餾水溶解，并轉(zhuǎn)入分液漏斗中，依次用石油醚(極性偏小，萃取量過少，此部位舍棄)、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取(1∶1)，每級重復(fù)3次，依次得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取液。將提取液至減壓干燥中于粉末狀，4 ℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.2 DPPH對照品溶液的制備

精密稱取DPPH 8 mg，甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，即得濃度為20 mmol/mL的DPPH溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.3 陽性對照液的制備

精密稱定抗壞血酸20 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，即得陽性對照液，現(xiàn)配現(xiàn)用，臨用前按所需濃度進(jìn)行稀釋。

2.1.4 DPPH抗氧化活性的測定[17]

用甲醇少量多次溶解各部位萃取物，采用超聲波使其溶解完全，配制不同濃度梯度的各萃取物溶液，并用抗壞血酸(Vc)溶液作為對照，取樣品溶液100 μL，加入100 μL 20 mmol/mL DPPH甲醇溶液?；靹虮芄夥胖?0 min后，在517 nm處測定樣品吸光度A1；空白組A0以等量蒸餾水代替DPPH溶液；對照組A2以等量蒸餾水代替樣品溶液。平行測定3次，取平均值。

DPPH自由基清除率計(jì)算公式為：

DPPH自由基清除率=[1-(A1-A0)/A2]×100%

式中：A0為空白組吸光值，A1為樣品溶液吸光值，A2為對照組吸光值。

2.2 地黃塊根DPPH抗氧化活性結(jié)果分析

2.2.1 DPPH陽性對照液抗氧化活性

按“2.1.4”項(xiàng)所示測定陽性對照抗壞血酸溶液對DPPH自由基的清除率，以抗壞血酸為陽性對照，在0.006～0.016 mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，DPPH自由基的清除效果隨著抗壞血酸濃度的增加，DPPH自由基的清除效果逐漸增強(qiáng)。

2.2.2 北京1號和85-5地黃菊花心、非菊花心及整體塊根氯仿部位抗氧化活性分析

兩品種地黃菊花心、非菊花心及整體塊根氯仿部位溶液的DPPH自由基清除率結(jié)果(見表1、圖1)表明，85-5和北京1號地黃菊花心、非菊花心及整體塊根氯仿部位樣品都對DPPH自由基的清除作用存在劑量依賴效應(yīng)，當(dāng)樣品濃度范圍為0.05～0.70 mg/mL內(nèi)，隨著各萃取物濃度增加，清除率也相應(yīng)增加。在0.05～0.7 mg/mL濃度范圍內(nèi)，85-5地黃清除率為非菊花心樣品>整體塊根樣品，北京1號地黃非菊花心與整體塊根樣品清除率相當(dāng)；在0.30～0.70 mg/mL濃度時(shí)北京1號地黃清除率為菊花心>非菊花心，85-5品種在相同濃度條件下清除率為非菊花心>菊花心；而在0.05～0.3 mg/mL濃度范圍內(nèi)，兩種質(zhì)地黃菊花心清除率均低于非菊花心，說明低濃度下兩種質(zhì)地黃氯仿部位的非菊花心清除率高于菊花心部位。整體而言，北京1號地黃菊花心樣品在高濃度時(shí)的清除率明顯高于同濃度其他樣品，后期可進(jìn)一步對北京1號地黃“菊花心”部位的有效成分與抗氧化活性之間的關(guān)系進(jìn)行深入研究。

2.2.3 北京1號和85-5地黃菊花心、非菊花心及整體塊根乙酸乙酯部位抗氧化活性分析

兩品種地黃菊花心、非菊花心及整體塊根乙酸乙酯部位溶液的DPPH自由基的清除率結(jié)果(見表2、圖2)表明，85-5、北京1號地黃菊花心、非菊花心及整體塊根乙酸乙酯部位對DPPH均有一定的清除作用，且表現(xiàn)出良好的劑量效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)樣品濃度為0.03～0.50 mg/mL時(shí)，兩種質(zhì)地黃清除DPPH自由基能力均為非菊花心、整體塊根部位>菊花心部位，在0.03～0.2 mg/mL濃度范圍內(nèi)，85-5地黃在此濃度范圍內(nèi)清除率關(guān)系為整體塊根>非菊花心，北京1號地黃在此濃度范圍內(nèi)清除率關(guān)系為非菊花心>整體塊根；而在0.2～0.5 mg/mL濃度范圍內(nèi)，兩者的清除率相當(dāng)?？傮w而言，兩品種地黃菊花心部位的清除率均低于其它部位；當(dāng)濃度較低時(shí)，地黃非菊花心、整體塊根的清除率隨種質(zhì)不同而略有差異，濃度較高時(shí)兩者清除率無明顯差異。后期可進(jìn)一步對其他品種地黃整體塊根與非菊花心部位的清除率進(jìn)行系統(tǒng)分析。

表1 兩品種地黃氯仿部位DPPH自由基清除率結(jié)果(%)Table 1 DPPH free radical scavenging results of two varieties of Rehmannia glutinosa chloroform(%)

圖1 地黃氯仿部位的抗氧化活性Fig.1 Antioxidant activity of chloroform at Rehmannia glutinosa

表2 乙酸乙酯部位DPPH自由基清除率結(jié)果(%)Table 2 DPPH free radical scavenging results of ethyl acetate fraction(%)

圖2 地黃乙酸乙酯部位的抗氧化活性Fig.2 Antioxidant activity of ethyl acetate at Rehmannia glutinosa

2.2.4 北京1號和85-5地黃菊花心、非菊花心及整體塊根正丁醇部位抗氧化活性分析

兩品種地黃菊花心、非菊花心及整體塊根正丁醇部位溶液的DPPH自由基的清除率結(jié)果(見表3、圖3)表明，在0.05～0.70 mg/mL的樣品濃度范圍內(nèi)，85-5、北京1號地黃整體塊根及非菊花心的正丁醇部位抗氧化能力無明顯差異，均大于兩品種地黃菊花心正丁醇部位的抗氧化能力，但在此濃度范圍內(nèi)菊花心、非菊花心及整體塊根正丁醇部位抗氧化能力均弱于抗壞血酸。

2.2.5 北京1號和85-5地黃菊花心、非菊花心及整體塊根清除DPPH自由基的半數(shù)抑制率方差分析

為了進(jìn)一步比較地黃塊根不同極性萃取部位樣品抗氧化活性的差異，我們利用SPSS19.0計(jì)算不同地黃樣品DPPH自由基清除率的IC50值(見圖4)，并對85-5、北京1號地黃“菊花心”、“非菊花心”及整體塊根的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取樣品清除DPPH自由基IC50值進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果顯示，乙酸乙酯部位與氯仿、正丁醇部位樣品清除DPPH IC50值具有顯著性差異，而氯仿與正丁醇部位樣品清除DPPH IC50值并無顯著性差異。

表3 正丁醇部位DPPH自由基清除率結(jié)果 /%Table 3 DPPH free radical scavenging results of n-Butanol site /%

圖3 地黃正丁醇部位的抗氧化活性Fig.3 Antioxidant activity of n-butanol at Rehmannia glutinosa

IC50值，即指抑制率達(dá)到50%時(shí)樣品的濃度，IC50值越小，則說明樣品的抑制率越高，即樣品清除DPPH自由基的活性越強(qiáng)。圖4表明，兩種地黃不同極性部位IC50值均為乙酸乙酯部位<氯仿部位<正丁醇部位，即乙酸乙酯部位清除DPPH自由基的活性最強(qiáng)，且單因素方差分析結(jié)果顯示乙酸乙酯部位樣品IC50值與氯仿、正丁醇部位IC50值具有顯著性差異，而氯仿與正丁醇部位樣品清除DPPH 的IC50值無顯著性差異。另外，圖4結(jié)果顯示，兩種地黃乙酸乙酯部位非菊花心與整體塊根IC50值相對較低，且兩品種之間差異較??；兩品種地黃菊花心IC50值相對偏高，而且品種之間差異較大，說明兩品種地黃菊花心中具有抗氧化性物質(zhì)的特征可能存在一定差異。

2.3 乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜方法的建立

2.3.1 供試品溶液的制備

精密稱取“2.4.1”項(xiàng)下所得乙酸乙酯部位萃取物粉末0.1 g，甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，0.22 μm微孔濾膜過濾即得。

圖4 樣品清除DPPH自由基的半數(shù)抑制率結(jié)果Fig.4 Results of half-inhibition rate of sample scavenging DPPH free radicals 注：1,2,3分別為85-5菊花心氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；4,5,6分別為85-5非菊花心氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；7,8,9分別為85-5整體塊根氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；10,11,12分別為北京1號菊花心氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；13,14,15分別為北京1號非菊花心氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；16,17,18分別為北京1號整體塊根氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位；19：抗壞血酸陽性對照。Note:1,2,3 are the chloroform part,ethyl acetate part and n-butanol part of the radial striation of 85-5;4,5,6 are the chloroform part,ethyl acetate part and n-butanol part of the un-radial striation of 85-5;7,8,9 are the chloroform part,ethyl acetate part and n-butanol part of the whole roots of 85-5;10,11,12 are the chloroform part,ethyl acetate part and n-butanol part of the radial striation of BJ-1;13,14,15 are the chloroform part,ethyl acetate part and n-butanol part of the un-radial striation of BJ-1;16,17,18 are the chloroform part,ethyl acetate part and n-butanol part of the whole roots of BJ-1;19 is a positive con- trol for ascorbic acid.

2.3.2 對照品溶液的制備

精密稱取毛蕊花糖苷對照品1.08 mg置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得濃度為0.216 mg/mL的毛蕊花糖苷對照品溶液。

2.3.3 色譜條件

Athean C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測波長245 nm，流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；流動相為乙腈(A)-0.02%醋酸水溶液(B)梯度洗脫(0～10 min，3%～12% A；10～15 min，12% A；15～20 min，12%～15% A；20～25 min， 15% A；25～30 min，15%～18% A；30～46 min，18%～20% A；46～65 min， 20% A)。分別精密吸取供試品與對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖5。

圖5 乙酸乙酯部位HPLC色譜圖 (A：對照品色譜圖 B：供試品色譜圖 a：毛蕊花糖苷)Fig.5 HPLC chromatogram of ethyl acetate (A:chromatogram of reference substance B:chromatogram of test sample a:acteoside)

2.3.4 精密度試驗(yàn)

取85-5地黃塊根乙酸乙酯萃取物樣品粉末制備供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，以13號峰為參照物峰，計(jì)算各主要色譜峰，計(jì)算各主要色譜峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積，其RSD值均小于3%，表明儀器精密度良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取85-5非菊花心乙酸乙酯萃取物粉末制備供試品溶液6份，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，以13號峰為參照物峰，計(jì)算各主要色譜峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積，其RSD 值均小于3%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取北京1號根乙酸乙酯部位萃取物藥粉末制備供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，以13號共有峰為參照物峰，計(jì)算各主要色譜峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積，其RSD值均小于3%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 地黃菊花心、非菊花心及整體塊根乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜疊加圖及對照圖譜生成

將85-5和北京1號地黃的24份不同部位的樣品(s1～s4為85-5菊花心樣品，s5～s8為85-5非菊花心樣品，s9～s12為85-5整體塊根樣品，s13～s16為北京1號菊花心樣品，s17～s20為北京1號非菊花心樣品，s21～s24為北京1號整體塊根)按2.2.1項(xiàng)下制備供試品溶液，按2.2.3項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，并記錄色譜圖，獲取24批地黃樣品的HPLC指紋圖譜疊加圖(見圖6)。采用國家藥典委員會頒布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)》(2004 A版)對24批樣品HPLC色譜圖進(jìn)行圖譜擬合，設(shè)定時(shí)間窗寬度為0.3，采用中位數(shù)法生成對照圖譜(見圖7)。

圖6 24批樣品HPLC指紋圖譜疊加圖譜Fig.6 HPLC fingerprint overlay map of 24 batch samples

圖7 24批樣品HPLC指紋圖譜對照圖譜(13：毛蕊花糖苷)Fig.7 HPLC fingerprint map of 24 batch samples (13:acteoside)

圖4結(jié)果顯示，兩品種地黃菊花心、非菊花心及整體塊根乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜色譜峰的數(shù)目基本相同，但色譜峰的面積差異較大，而相同組織的乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜特征較為較近，說明地黃塊根不同組織乙酸乙酯部位的化學(xué)成分種類基本一致，其質(zhì)量特征的差異主要表現(xiàn)在化學(xué)成分含量的高低。圖5顯示，不同地黃樣品乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜的共有模式共標(biāo)定出14個共有峰，均指認(rèn)出毛蕊花糖苷成分。

2.5 地黃塊根乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜與DPPH抗氧化活性譜效關(guān)系分析

將8批85-5和北京1號地黃塊根乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜共有模式各峰面積量化值(見表4)分別與所對應(yīng)的DPPH清除率(表5)進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。由結(jié)果可以看出，不同濃度樣品與其HPLC指紋圖譜峰面積量化值的相關(guān)性具有明顯差異，當(dāng)乙酸乙酯部位樣品濃度為0.50和0.40 mg/mL時(shí)，其DPPH清除率已達(dá)到較高平穩(wěn)狀態(tài)，不同樣品之間差異較小，Pearson分析結(jié)果顯示并無特定的共有峰與其呈顯著相關(guān)；當(dāng)乙酸乙酯部位樣品濃度為0.30和0.20 mg/mL時(shí)，Pearson分析結(jié)果顯示共有峰X1與其呈顯著負(fù)相關(guān)；當(dāng)乙酸乙酯部位樣品濃度小于0.10 mg/mL時(shí)，Pearson分析結(jié)果顯示共有峰X2與其呈顯著負(fù)相關(guān)，共有峰X10與其呈顯著正相關(guān)。以上結(jié)果表明地黃乙酸乙酯部位中X1、X2、X10成分對其抗氧化活性具有顯著的影響。另外，不同濃度乙酸乙酯部位的譜效關(guān)系結(jié)果顯示毛蕊花糖苷與地黃抗氧化活性均呈明顯的正相關(guān)關(guān)系，說明毛蕊花糖苷具有一定的抗氧化活性，這與文獻(xiàn)報(bào)道[18,19]相一致。

3 討論

自由基能夠引起脂質(zhì)過氧化、DNA氧化損壞等重要分子物質(zhì)損傷，與心血管、腫瘤等疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，適當(dāng)服用抗氧化劑有利于疾病的預(yù)防，而合成類抗氧化劑對人體有一定的毒副作用[18]，因此從中藥中篩選出天然抗氧化活性成分是科研界的熱點(diǎn)[19]。

表4 地黃整體塊根乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜共有峰峰面積量化值Table 4 Quantitative peak area peak value of HPLC fingerprint of ethyl acetate in roots of roots

表5 樣品HPLC峰面積量化值與不同濃度供試品溶液(mg/mL)對DPPH清除率的相關(guān)分析矩陣Table 5 Quantitative analysis of HPLC peak area of sample and correlation analysis matrix of DPPH clearance rate of sample solution (mg/mL)

注：*在P<0.05 水平下顯著相關(guān)；**在P<0.01 水平下極顯著相關(guān)。

Note:*Significantly correlated atP< 0.05 level;**extremely significant correlation atP< 0.01 level.

多糖作為中藥中一類重要的活性成分，具有多種藥理活性。文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)歸多糖能顯著提高D-半乳糖致衰老小鼠血清中抗氧化相關(guān)酶的活性，降低自由基對膜脂的過氧化作用；靈芝多糖可降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的增多，增強(qiáng)抗氧化酶的活力，減少氧自由基對機(jī)體的損傷。地黃味甘，塊根中的多糖具有抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗焦慮、促進(jìn)造血等藥理作用，而地黃在臨床使用過程中多以水煎為主，水煎后味道變甘甜，這可能與煎煮過程中地黃中多糖水解成單糖有關(guān)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，地黃塊根菊花心中多糖的含量均低于非菊花心部位[16]，而本研究結(jié)果表明，地黃塊根菊花心部位的抗氧化能力均低于非菊花心部位，而且不同品種的菊花心部位抗氧化能力也存在差異，那么這種差異的存在是否與兩組織中地黃多糖的含量及煎煮后產(chǎn)生的單糖種類存在著一定的關(guān)系，后期可利用衍生化技術(shù)對不同地黃品種煎煮前后菊花心、非菊花心及整體塊根中單糖的種類、含量及其與地黃抗氧化活性的關(guān)系進(jìn)行深入研究，以揭示地黃菊花心和非菊花心部位抗氧化活性的差異與多糖特征之間的內(nèi)在聯(lián)系。

本研究結(jié)果表明乙酸乙酯為地黃菊花心、非菊花心、整體塊根抗氧化活性最強(qiáng)的部位，該部位中的X1、X2及X10三個成分對其抗氧化活性具有顯著影響，毛蕊花糖苷則具有較強(qiáng)的抗氧化活性。這與文獻(xiàn)報(bào)道中發(fā)現(xiàn)地黃中玉葉金花苷酸[20]、海膽苷、焦地黃苯乙醇苷A1/A2、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷[21]等成分具有一定的抗氧化能力相一致。中藥是一個復(fù)雜的體系，地黃抗氧化活性是地黃中多種成分通過多個靶點(diǎn)共同作用所產(chǎn)生的，本研究指認(rèn)出與抗氧化活性相關(guān)的毛蕊花糖苷成分，而關(guān)于X1、X2、X10三個共有峰所代表的成分并不清楚，而且本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)相同及不同地黃品種菊花心與非菊花心的乙酸乙酯部位中的化學(xué)成分含量與抗氧化活性均存在明顯差異，說明地黃品種及塊根不同組織對地黃的抗氧化活性均有一定影響。后期可利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對X1、X2、X10三個未知成分及其他成分進(jìn)行指認(rèn)，并對其含量進(jìn)行分析，為地黃抗氧化藥效物質(zhì)的確定、地黃不同品種抗氧化活性的評價(jià)及塊根菊花心特征與地黃道地性的揭示提供依據(jù)。