江昀珈

（錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，錦州 121001）

布魯氏菌?。?Brucellosis ） 是由布魯氏菌 （Brucella）引起的一種自然疫源性人畜共患病，簡稱布病，該病在世界各地均有發(fā)現(xiàn)，能侵害牛、羊、豬等多種家畜，還可感染野生動物與人類，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病[1～4]。布魯氏菌菌株依據(jù)其優(yōu)先感染的宿主動物進行命名，目前學(xué)界大致將其分為九種，即：羊布魯氏菌（B.abortus）、牛布魯氏菌（B.melitensis）、豬布魯氏菌（B.suis）、沙林鼠布魯氏菌（B.neotome）、綿羊布魯氏菌（B.ovis）、犬布魯氏菌（B.canis）、田鼠布魯菌氏菌（B.microti）、鯨布魯氏菌（B.ceti）和鰭布魯氏菌（B.pinnipedialis），其中羊布魯氏菌的致病力最強[5～8]。布魯氏菌病有明顯的季節(jié)性特征和職業(yè)性特征，多發(fā)于每年1～4月，牛、羊、豬是最易感染群體，感染菌型以羊型最多，豬型次之，牛型最少[9,10]。感染布魯氏菌病的母畜主要表現(xiàn)為胎膜炎癥、流產(chǎn)，公畜則主要表現(xiàn)為不育癥、睪丸炎、腱鞘炎、關(guān)節(jié)炎等[11,12]。通常情況下，從事畜牧獸醫(yī)、畜產(chǎn)品加工、屠宰、皮革加工等工作人員感染率明顯高于其他職業(yè)從業(yè)人員，另外，實驗室中布魯氏菌培養(yǎng)物的暴露也是布魯氏菌病傳染人類的重要原因[13～15]。

為了解遼寧省某市部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖場（戶）牛、羊布魯氏菌的感染現(xiàn)狀，本試驗采用虎紅平板凝集方法，對2018年該市12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)春季采集的牛羊血清進行了布魯氏菌病的流行病學(xué)調(diào)查，旨在了解該地區(qū)布魯氏菌病的流行情況，為該地區(qū)牛、羊布魯氏菌病的防控提供參考及防治對策。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2018年間遼寧省某市轄區(qū)內(nèi)12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖場（戶）的牛羊尾靜脈血，采集對象為飼養(yǎng)的6月齡以上牛、4月齡以上羊，此次調(diào)查涉及12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，177個行政村，88個散養(yǎng)戶，17個規(guī)模養(yǎng)殖場，共采集有效血清2 709份，其中牛血清931份，羊血清1 778份。

1.2 主要試劑

布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原、標準陽性血清、標準陰性血清，均購于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所（哈藥集團生物疫苗有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 血清的采集

牛、羊血清由專業(yè)獸醫(yī)技術(shù)人員到各大養(yǎng)殖區(qū)的規(guī)模養(yǎng)殖場及散養(yǎng)戶家中組織采集并進行編號，采血當天分離出血清后送檢。采樣前，按規(guī)定穿戴防護服衣物，并做到防護用品 “一場地一更換”，避免交叉感染。

1.3.2 虎紅平板凝集試驗

參考《動物布魯菌病診斷技術(shù)》（GB/T18646—2002）對采集的牛、羊血清進行布魯氏菌病的血清學(xué)分析。首先取潔凈虎紅平板紙，用記號筆標記各個血清編號，再將血清和布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原室溫下放置30～60min待測；用移液器取待測血清30μL滴在虎紅平板紙上，并設(shè)置陰性血清、陽性血清進行對照；向虎紅平板上加入布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原30μL；用潔凈的牙簽將待檢血清和抗原充分攪拌混勻，5min后通過肉眼觀察試驗結(jié)果，每批次試驗均需設(shè)置平行陽性和陰性對照。

1.3.3 結(jié)果判定

采用虎紅平板凝集檢測方法對血清樣品進行初篩，對檢出布魯氏菌陽性血清進行復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果仍為陽性的血清則記為陽性。在陰、陽性對照組成立的條件下，待測血清在5min內(nèi)呈現(xiàn)肉眼可見的顆粒凝集現(xiàn)象者判定為布魯氏菌陽性，記為 “+”；若無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色，判定為布魯氏菌陰性，記為 “-”。

2 結(jié)果與分析

在本次檢測中， 牛布魯氏菌的總陽性率為1.93%（18/931），羊布魯氏菌的總陽性率為2.31%（41/1778），牛和羊布魯氏菌的總陽性率為2.18%（59/2709），羊布魯氏菌的陽性率明顯高于牛，羊更易感染布魯氏菌。12個養(yǎng)殖區(qū)均有布魯氏菌檢出。牛布魯氏菌陽性率低于總體陽性率的養(yǎng)殖區(qū)共7個，分別為B、C、D、G、I、J和L鄉(xiāng)；羊布魯氏菌陽性率低于總體陽性率的養(yǎng)殖區(qū)為8個，分別為A、C、D、E、F、G、J和L鄉(xiāng)。其中D鄉(xiāng)的牛布魯氏菌陽性率在12個養(yǎng)殖區(qū)中最低，為1.04%，G鄉(xiāng)的羊布魯氏菌陽性率最低，為0.93%，K鄉(xiāng)的牛、羊布魯氏菌陽性率均為最高，分別達到5.19%、5.56%。說明該鄉(xiāng)布魯氏菌疫病較為嚴重，防控形勢嚴峻（表1）。

由表2可知，不同的養(yǎng)殖方式對布魯氏菌病的陽性率有較大的影響，規(guī)?；B(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶牛布魯氏菌的陽性率分別為1.51%和2.49%，羊布魯氏菌的陽性率分別為1.96%和2.78%，規(guī)模化養(yǎng)殖場的牛、羊布魯氏菌病的陽性率均顯著低于散養(yǎng)戶。

表1 牛羊布魯氏菌病陽性率

表2 不同養(yǎng)殖方式下布病陽性率

從整體上看，此次調(diào)查的陽性率在0.93%～5.56%之間，規(guī)?；B(yǎng)殖場的陽性率明顯低于散養(yǎng)戶。調(diào)查結(jié)果顯示，該市的布魯氏菌疫病防控現(xiàn)狀仍不容樂觀，應(yīng)加大防控力度，加速病畜的淘汰與凈化，同時，應(yīng)進一步強化養(yǎng)殖人員對布魯氏菌病的防范意識和生物安全意識，保護從業(yè)人員安全，降低人畜共患病的風(fēng)險。

3 小結(jié)

布魯氏菌病是一種危害極其嚴重的人獸共患傳染病，近年來在全世界范圍內(nèi)呈明顯流行的趨勢，感染后會導(dǎo)致動物流產(chǎn)，造成巨大的經(jīng)濟損失，對人類和動物健康及公共衛(wèi)生安全構(gòu)成了巨大的威脅和損害，極大地阻礙經(jīng)濟發(fā)展和社會進步。目前，布魯氏菌病的診斷方法主要包括血清學(xué)診斷法和細菌學(xué)診斷法。血清學(xué)診斷法主要包括試管凝集試驗（SAT）、虎紅平板凝集試驗（RBPT）、乳環(huán)試驗（MRT）、補體結(jié)合試驗（CFT）及酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等，基層實驗室的大規(guī)模檢測主要采取試管凝集試驗(SAT)和虎紅平板凝集試驗（RBPT），其中虎紅平板凝集試驗（RBPT）的特異性優(yōu)于試管凝集試驗(SAT)，因而是最常見的布魯氏菌病的常規(guī)診斷方法之一[16,17]。細菌學(xué)診斷法是采集流產(chǎn)胎兒臟器、胎盤、羊水等病料直接涂片后，用革蘭氏染色法進行顯微鏡檢驗及判定。也可將無污染病料劃線培養(yǎng)，并將可疑菌落與布魯氏菌抗血清做玻片凝集試驗，還可直接采用PCR技術(shù)進行分子生物學(xué)鑒定[18]。

本研究采用虎紅平板凝集方法，對遼寧省某市2018年春季采集的其轄區(qū)內(nèi)12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖區(qū)的牛羊血清樣品進行了布魯氏菌病檢測與調(diào)查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在本次調(diào)查中發(fā)現(xiàn)羊群布魯氏菌病疫情較牛群更為嚴重，該市牛布魯氏菌的檢出率為1.93%，而羊布魯氏菌檢出率達到2.31%，牛和羊的布魯氏菌病的總陽性檢出率為2.18%，其陽性率較高。據(jù)此可知，布魯氏菌病在該地區(qū)的防控形勢絲毫不容懈怠，同時，也對當?shù)卮艘咔榈目刂铺岢隽藝谰奶魬?zhàn)。

在本次調(diào)查的12個鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖區(qū)中，所有鄉(xiāng)鎮(zhèn)均檢出至少一例牛羊布魯氏菌陽性血清，說明該市的布病防控還需進一步強化。其中，K鄉(xiāng)的牛羊布魯氏菌檢出率均呈現(xiàn)最高，這應(yīng)引起相關(guān)部門的重視。針對該市的情況，提出以下防控策略：第一，應(yīng)對檢出疑似病畜進行即刻隔離，再次確診后對患病動物全部撲殺；同時，對受威脅的動物應(yīng)采取有效的隔離措施，有必要時也可酌情進行撲殺。第二，認真做好其他牛羊群的預(yù)防接種工作，免疫接種也是防治布病最有效的方式之一，通過免疫接種提高畜群的免疫力，達到防控的目的。第三，建立健全養(yǎng)殖場檢疫制度，強化生物安全意識，將無害化處理落到實處，積極管理感染源，嚴格處理疑似感染動物的飼養(yǎng)廢棄物及糞污，加強畜群的保護措施，嚴格控制與健康畜群直接或間接接觸，并嚴格執(zhí)行圈舍消毒制度。第四，根據(jù)實際生產(chǎn)需求擴大疫情監(jiān)測范圍、提高監(jiān)測頻率，及時發(fā)布動物疫病流行趨勢和風(fēng)險預(yù)警，完善動物疫病報告機制，做到疫病的及時發(fā)現(xiàn)、及早處置。第五，加強宣傳教育，提高職業(yè)易感人員的個人防護意識，確保從業(yè)人員做好個人防護，任何情況下都應(yīng)避免直接接觸牛、羊及其排泄物、陰道分泌物、胎衣等，以降低人員感染概率。

布魯氏菌病的流行嚴重阻礙了畜牧業(yè)的發(fā)展，也威脅著廣大農(nóng)牧民的健康，要減少此病在該地區(qū)的流行，還需經(jīng)多年連續(xù)檢疫凈化，各級畜牧獸醫(yī)部門應(yīng)采取綜合性防治措施，嚴格進行產(chǎn)地和運輸檢疫，加強傳染源的管理，嚴格防止病原的傳播。應(yīng)將陽性畜群作淘汰和撲殺處理，同時對疫區(qū)和健康畜群加強免疫和消毒工作。本文通過對遼寧某市牛羊布病流行病學(xué)調(diào)查，為本病未來的防控提供依據(jù)，為動物養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供參考。