陳秀麗，李永康，李沛波，彭維，蘇薇薇

(中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東省中藥上市后質(zhì)量與藥效再評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510275)

尿酸(uric acid,UA)是人體內(nèi)嘌呤經(jīng)代謝后的最終產(chǎn)物[1]，80%尿酸是在體內(nèi)合成，或由次黃嘌呤、黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的作用下分解代謝產(chǎn)生，20%尿酸由攝入食物中的核蛋白或嘌呤分解代謝產(chǎn)生[2-4]，主要經(jīng)由腎臟排泄[5-6]。體內(nèi)的尿酸代謝障礙包括尿酸的生成和排泄紊亂均會(huì)使血清中的尿酸含量升高，引發(fā)高尿酸血癥[7-8]。近年來(lái)隨著人們生活水平的提高，高尿酸血癥的發(fā)病率逐年上升，2018年我國(guó)痛風(fēng)的患病率約3%，高尿酸血癥的患病率男性約16.4%，女性約8.1%[9]。研制能抑制尿酸形成，加快尿酸代謝且不造成腎損傷，口味好的安全、有效、經(jīng)濟(jì)的健康產(chǎn)品對(duì)高尿酸血癥的預(yù)防和治療有著重要的意義。

酵素又叫酶，是生物體內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)生的—種生物催化劑，能有效促進(jìn)生物體的新陳代謝[10-12]。微生物酵素是以新鮮蔬菜、水果為原料，經(jīng)益生菌發(fā)酵而形成的微生物制劑，具有獨(dú)特的生物活性和良好醫(yī)療保健功能[13]。研究表明微生物酵素中多種活性物質(zhì)能活化肝細(xì)胞，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，有效預(yù)防改善脂肪肝[14-16]。

本研究所用的水果酵素醋是一種以玫瑰茄與桃金娘為主要原料，經(jīng)自然發(fā)酵及調(diào)配后制成的酵素飲料，口感芳香，酸甜爽口。玫瑰茄(HibiscusSabdariffaL.)，又稱洛神花、美麗納等，為藥食兩用植物，在我國(guó)東南沿海地區(qū)均有大面積栽培，含有豐富的有機(jī)酸、維生素C、類黃酮類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有降血糖、降血脂、改善消化系統(tǒng)等作用[17-22]。研究發(fā)現(xiàn)，玫瑰茄可以促進(jìn)尿酸排泄[23]。桃金娘(Rhodomyrtustomentosa)，別名山稔、崗稔等，為桃金娘科桃金娘屬，分布在我國(guó)廣東、廣西、湖南、云南、貴州、福建、臺(tái)灣等地[24]。桃金娘全株皆可入藥，其成熟果實(shí)顏色呈紫紅色、多籽，富含有機(jī)酸、黃酮類、酚類等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[25]；具有清熱解毒、通經(jīng)活血止血、利濕止瀉等功效[26]。目前，該種類水果酵素醋在降尿酸功能方面的研究尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道，本研究選其進(jìn)行降尿酸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，為評(píng)價(jià)其輔助降尿酸功能提供了依據(jù)，對(duì)其開(kāi)發(fā)利用具有積極意義。

1 材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠，體重約18～22 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(粵)2018-0002。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于中山大學(xué)南校區(qū)時(shí)珍堂，動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK(粵)2014-0020，溫度為(24±2)℃。

1.2 藥物與試劑 水果酵素醋(池露牌)；苯溴馬隆(德國(guó)赫曼大藥廠，批號(hào)：1708594)；氧嗪酸鉀鹽(Aladdin公司，批號(hào)：K1829158)；UA測(cè)試盒(南京建成生物工程有限公司，批號(hào)：20190111)；肌酐(Cr)測(cè)試盒(南京建成生物工程有限公司，批號(hào)20190215)；尿素氮(BUN)測(cè)試盒(南京建成生物工程有限公司，批號(hào)：20190122)；XOD測(cè)試盒(南京建成生物工程有限公司，批號(hào)：20190115)；腺苷脫氨酶(ADA)測(cè)試盒(南京建成生物工程有限公司，批號(hào)：20190215)。

1.3 主要儀器 電熱恒溫水浴鍋(HWS24型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；離心機(jī)(L400，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；Epoch多孔超微量核酸蛋白分析儀(BioTek公司)；紫外分光光度儀(Agilent公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組、造模和給藥 取60只小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、苯溴馬隆組(10 mg·kg-1)及水果酵素醋低(玫瑰茄5.97 g生藥/kg+桃金娘3.62 g生藥/kg)、中(玫瑰茄11.93 g生藥/kg+桃金娘7.23 g生藥/kg)、高劑量(玫瑰茄23.86 g生藥/kg+桃金娘14.46 g生藥/kg)組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)環(huán)境1周，常規(guī)分籠飼養(yǎng)。除正常對(duì)照組外，其余各組每天按250 mg·kg-1的劑量腹腔注射尿酸氧化酶抑制劑氧嗪酸鉀，連續(xù)8 d，以構(gòu)建高尿酸血癥模型。每次造模后2 h，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水，其余各組按相應(yīng)劑量灌胃給藥。灌胃給藥容積均為10 mL·kg-1。末次給藥2 h后，摘眼球采血，分離血清。

2.2 指標(biāo)檢測(cè) 取小鼠血清，按試劑盒說(shuō)明測(cè)定UA、BUN及Cr含量，以及XOD、ADA活性。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 水果酵素醋對(duì)尿酸含量的影響 由表1可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組的尿酸含量顯著升高(P<0.05)，說(shuō)明本造模方法能成功造成小鼠高尿酸血癥模型；與模型對(duì)照組相比，水果酵素醋低、中、高劑量組的血尿酸含量顯著降低(P<0.05)，說(shuō)明低、中、高劑量的水果酵素醋能顯著降低血清中的尿酸含量。

3.2 水果酵素醋對(duì)黃嘌呤氧化酶和腺苷脫氨酶的影響 從表2可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組的XOD和ADA活性明顯上調(diào)(P<0.01)，表明氧嗪酸鉀可以提高小鼠XOD和ADA的活性；與模型對(duì)照組相比，水果酵素醋低、中、高劑量組和苯溴馬隆組顯著降低高尿酸血癥小鼠的XOD和ADA活性(P<0.01)。

表1 水果酵素醋對(duì)小鼠血清尿酸含量的影響

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型對(duì)照組比較，#P<0.05

表2 水果酵素醋對(duì)黃嘌呤氧化酶和腺苷脫氨酶的影響

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型對(duì)照組比較，##P<0.01

3.3 水果酵素醋對(duì)血清肌酐和尿素氮含量的影響 由表3可見(jiàn)，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組、水果酵素醋給藥組及苯溴馬隆組的血清肌酐和尿素氮水平均無(wú)明顯變化(P>0.05)。

表3 水果酵素醋對(duì)血清肌酐的影響

4 討論

氧嗪酸鉀是一種尿酸氧化酶抑制劑，可以抑制體內(nèi)尿酸的分解以提高血清尿酸濃度，給小鼠腹腔注射氧嗪酸鉀溶液是常見(jiàn)的高尿酸血癥造模方法之一[27-29]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，腹腔注射氧嗪酸鉀能使小鼠血清尿酸水平顯著升高，表明高尿酸血癥模型構(gòu)建成功；低、中、高劑量的水果酵素醋能顯著降低小鼠血清尿酸含量，具有顯著的降尿酸效應(yīng)。

黃嘌呤氧化酶是嘌呤核苷代謝途徑的限速酶，是調(diào)控尿酸生成的最終環(huán)節(jié)，在高尿酸血癥的發(fā)病中占主導(dǎo)地位[30]。XOD可以連續(xù)氧化黃嘌呤和次黃嘌呤生成尿酸，直接調(diào)控尿酸的轉(zhuǎn)變，其活性增強(qiáng)可加速尿酸生成[31-33]。ADA可催化腺苷生成肌酐，然后肌酐經(jīng)核苷磷酸化酶轉(zhuǎn)化為次黃嘌呤。最終被XOD轉(zhuǎn)化為尿酸[34]。本實(shí)驗(yàn)以研究血清中XOD和ADA的活性來(lái)探討水果酵素醋降低體內(nèi)血尿酸的機(jī)制。結(jié)果表明，模型組血清中XOD和ADA的酶活性顯著升高。水果酵素醋3個(gè)劑量組的XOD和ADA酶活性均顯著降低，說(shuō)明水果酵素醋可通過(guò)抑制XOD和ADA的酶活性，減少小鼠體內(nèi)尿酸的形成，從而降低血尿酸水平。

臨床上，血肌酐是評(píng)價(jià)腎功能的重要指標(biāo)，其含量升高意味著腎功能的損傷[35-36]。BUN是判斷腎小球?yàn)V過(guò)功能的指標(biāo)，能較為準(zhǔn)確地反映腎實(shí)質(zhì)受損的情況[37]。尿素氮從腎小球?yàn)V過(guò)而排出體外。在腎功能不全失代償時(shí)，BUN將升高。在本實(shí)驗(yàn)中，各試驗(yàn)組小鼠的Cr及BUN含量均無(wú)明顯變化，說(shuō)明氧嗪酸鉀、苯溴馬隆及水果酵素醋不會(huì)造成小鼠腎功能損傷。