唐首杰，劉辛宇，吳太淳，趙金良

( 上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，水產(chǎn)科學(xué)國(guó)家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心，上海 201306 )

“新吉富”羅非魚(Oreochromisniloticus)是上海海洋大學(xué)以1994年引入的尼羅羅非魚“GIFT”品系第3代為基礎(chǔ)群體(F0)，歷經(jīng)10年系統(tǒng)選育而成的羅非魚新品種(登記號(hào)GS01-001-2005)[12]，至2016年已選育至第20代(F20)。目前，該品種已成為我國(guó)羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的主養(yǎng)品種之一。但隨著羅非魚集約化養(yǎng)殖密度的提高，養(yǎng)殖水體中殘餌、糞便等不斷累積，致使部分地區(qū)羅非魚長(zhǎng)期處于較高含量氨氮的養(yǎng)殖環(huán)境中，從而導(dǎo)致其生長(zhǎng)性能下降，影響了羅非魚養(yǎng)殖效益[13]。鑒于此，在選育系F20的基礎(chǔ)上，研究氨氮對(duì)“新吉富”羅非魚的慢性毒性效應(yīng)，探索氨氮的慢性脅迫機(jī)制已成當(dāng)務(wù)之急。目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在尼羅羅非魚慢性氨氮脅迫方面的研究主要集中在氨氮對(duì)尼羅羅非魚幼魚生長(zhǎng)[8,14-16]、血清及肝臟生理功能影響[14-17]等領(lǐng)域，但慢性氨氮脅迫對(duì)“新吉富”羅非魚生長(zhǎng)及生理功能的影響尚未見報(bào)道。本研究根據(jù)氨氮對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度(待發(fā)表資料)，采用實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)方法研究不同質(zhì)量濃度氨氮脅迫對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚生長(zhǎng)性能及血清生化指標(biāo)的影響，以期為“新吉富”羅非魚的健康養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)魚為“新吉富”羅非魚選育系F20幼魚，初始體質(zhì)量為(38.6±0.2) g，取自上海海洋大學(xué)魚類種質(zhì)研究試驗(yàn)站。試驗(yàn)魚用3%氯化鈉和2%碳酸氫鈉消毒，然后放入水族箱暫養(yǎng)14 d以適應(yīng)環(huán)境。投喂寧波天邦公司生產(chǎn)的羅非魚浮性顆粒飼料，含粗蛋白32%。日飽食投喂2次(9:00，16:00)。氯化銨(純度大于99.5%)購(gòu)自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

根據(jù)氨氮對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚的急性毒性試驗(yàn)的結(jié)果(待發(fā)表)設(shè)定試驗(yàn)的氨氮質(zhì)量濃度梯度。以96 h半致死質(zhì)量濃度(144.287 mg/L)的10%為慢性脅迫試驗(yàn)的中間質(zhì)量濃度，將慢性脅迫試驗(yàn)設(shè)4個(gè)氨氮質(zhì)量濃度組，其總氨氮質(zhì)量濃度分別為7.22、14.43、28.86、57.72 mg/L，同時(shí)以未添加氯化銨的正常飼養(yǎng)用水作為對(duì)照組。每組試驗(yàn)魚15尾，設(shè)3個(gè)平行組。

試驗(yàn)于0.60 m×0.45 m×0.40 m的玻璃水族箱(試驗(yàn)實(shí)際水體為64.8 L)中進(jìn)行。以氯化銨準(zhǔn)確配置母液，再按試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別稀釋成各組試驗(yàn)液。試驗(yàn)用水為充分曝氣處理的自來(lái)水，連續(xù)24 h充氣，溶解氧6.5～7.2 mg/L，水溫(28.0±1.0) ℃，pH 7.7±0.2，定時(shí)用納氏試劑法[18]測(cè)定各組總氨氮質(zhì)量濃度，并用母液及時(shí)調(diào)整至試驗(yàn)設(shè)定的表觀質(zhì)量濃度。在試驗(yàn)過(guò)程中，每日飽食投喂2次(9：00，16：00)，早晚定時(shí)用虹吸管清除糞便，每晚(18：00)定時(shí)更換預(yù)先配置成相應(yīng)質(zhì)量濃度、等溫的氯化銨溶液，用飽和碳酸鈉溶液使水的pH維持相對(duì)穩(wěn)定。

分別于氨氮暴露的第10、20 d和30 d時(shí)自各箱中分別取5尾試驗(yàn)魚進(jìn)行生長(zhǎng)性狀、血清生化指標(biāo)分析。測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)前，將試驗(yàn)魚迅速撈起并投入200 mg/L的間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽(Sigma，美國(guó))溶液中進(jìn)行深度麻醉。

1.2.1 生長(zhǎng)性狀測(cè)定

分別測(cè)定試驗(yàn)魚的體質(zhì)量、體長(zhǎng)、體高等數(shù)據(jù)，按下式計(jì)算特定生長(zhǎng)率[19]：

特定生長(zhǎng)率/%·d-1=[(lnm2-lnm1)/(t2-t1)]×100%

式中，m1、m2分別為時(shí)間t1、t2時(shí)的體質(zhì)量。

1.2.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定

尾靜脈采血后，不加抗凝劑在室溫放置30～40 min，然后3000 r/min，離心10 min，收集上清液。采用南京建成生物工程研究所研發(fā)的試劑盒測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、酸性磷酸酶和堿性磷酸酶的活性，組織蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用SPSS 19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組間差異用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)，并進(jìn)行Duncan′s多重比較分析，P<0.05為差異顯著。

本試驗(yàn)中所提及的氨氮是指水環(huán)境中的總氨氮質(zhì)量濃度，由離子銨和非離子氨組成。通常在計(jì)算氨氮的半致死質(zhì)量濃度時(shí)還要考慮非離子氨的半致死質(zhì)量濃度。水體中非離子氨在總氨氮中所占的比例與溫度和pH有關(guān)，換算公式如下[20]：

非離子氨質(zhì)量濃度=A/[10(pKa-pH)+1]

pKa=0.09018+2729.92/T

式中，A為總氨氮質(zhì)量濃度，pKa為離解常數(shù)，T為熱力學(xué)溫度(T=273+T℃)。

2 結(jié) 果

2.1 生長(zhǎng)性能分析

30 d的慢性氨氮脅迫期間，各組別試驗(yàn)魚均未出現(xiàn)死亡情況。在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，隨著氨氮質(zhì)量濃度的升高，各組別試驗(yàn)魚攝食量呈下降趨勢(shì)，其中，低質(zhì)量濃度組(7.22 mg/L)與對(duì)照組間攝食量差異不明顯，高質(zhì)量濃度組(28.86、57.72 mg/L)攝食量顯著減少，試驗(yàn)后期出現(xiàn)停止攝食的情況。各組別試驗(yàn)魚在整個(gè)試驗(yàn)期間的生長(zhǎng)性能見表1。5組試驗(yàn)魚的初始體質(zhì)量為38.28～38.68 g，30 d時(shí)的試驗(yàn)?zāi)w質(zhì)量為32.13～62.07 g，特定生長(zhǎng)率為-0.60%/d～1.58%/d。28.86、57.72 mg/L組試驗(yàn)?zāi)w質(zhì)量均低于其初始體質(zhì)量，因此，這2個(gè)試驗(yàn)組的特定生長(zhǎng)率均為負(fù)值，表明高質(zhì)量濃度氨氮對(duì)試驗(yàn)魚的生長(zhǎng)產(chǎn)生了明顯的抑制。組間試驗(yàn)?zāi)w質(zhì)量、特定生長(zhǎng)率呈現(xiàn)隨氨氮質(zhì)量濃度升高而遞減的趨勢(shì)，即對(duì)照組>7.22 mg/L組>14.43 mg/L組>28.86 mg/L組>57.72 mg/L組，Duncan′s多重比較結(jié)果均顯示，對(duì)照組和7.22 mg/L組間差異不顯著，并且這2組的生長(zhǎng)性能顯著高于其他3個(gè)試驗(yàn)組(P<0.05)；14.43、28.86 mg/L和57.72 mg/L組兩兩間均存在顯著差異。

表1 慢性氨氮脅迫下“新吉富”羅非魚幼魚的生長(zhǎng)性能

注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同表示差異不顯著(P>0.05).

5組試驗(yàn)魚在不同時(shí)段內(nèi)的特定生長(zhǎng)率變化趨勢(shì)見圖1。在0～10 d、10～20 d和20～30 d時(shí)段，28.86、57.72 mg/L組的特定生長(zhǎng)率均為負(fù)值，且57.72 mg/L組的特定生長(zhǎng)率最低；在0～10 d和10～20 d時(shí)段，對(duì)照組特定生長(zhǎng)率最高；在20～30 d時(shí)段，7.22 mg/L組特定生長(zhǎng)率最高。Duncan′s多重比較結(jié)果顯示，在所有3個(gè)時(shí)段內(nèi)，28.86、57.72 mg/L組的特定生長(zhǎng)率均顯著低于其余3個(gè)組(P<0.05)；在0～10 d時(shí)段，對(duì)照組、7.22 mg/L組的特定生長(zhǎng)率顯著高于14.43 mg/L組(P<0.05)；在10～20 d時(shí)段，對(duì)照組的特定生長(zhǎng)率顯著高于7.22、14.43 mg/L組(P<0.05)；在20～30 d時(shí)段，7.22 mg/L組的特定生長(zhǎng)率顯著高于對(duì)照組和14.43 mg/L組(P<0.05)。

圖1 不同質(zhì)量濃度氨氮脅迫下“新吉富”羅非魚幼魚特定生長(zhǎng)率的動(dòng)態(tài)變化同一時(shí)間段內(nèi)，上標(biāo)字母不同表示差異顯著(P<0.05)，字母相同表示差異不顯著(P>0.05).

2.2 血清生化指標(biāo)分析

5組試驗(yàn)魚血清中酸性磷酸酶活性的動(dòng)態(tài)變化見圖2。在10 d時(shí)，7.22 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性最高，57.72 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性最低，7.22 mg/L組和對(duì)照組間血清酸性磷酸酶活性差異不顯著，14.43、28.86、57.72 mg/L組間血清酸性磷酸酶活性差異也不顯著，7.22 mg/L組、對(duì)照組的血清酸性磷酸酶活性均顯著高于其他3個(gè)組(P<0.05)；在20 d時(shí)，14.43 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性顯著高于其他4個(gè)組(P<0.05)，7.22 mg/L組、對(duì)照組的血清酸性磷酸酶活性均顯著高于28.86、57.72 mg/L組(P<0.05)，7.22 mg/L組和對(duì)照組間血清酸性磷酸酶活性差異不顯著，28.86、57.72 mg/L組間血清酸性磷酸酶活性差異也不顯著，57.72 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性最低；在30 d時(shí)，7.22 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性顯著高于其他4組(P<0.05)，57.72 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性最低，14.43 mg/L組和對(duì)照組間血清酸性磷酸酶活性差異不顯著，28.86、57.72 mg/L組間血清酸性磷酸酶活性差異也不顯著，14.43 mg/L組、對(duì)照組血清酸性磷酸酶活性均顯著高于28.86、57.72 mg/L組(P<0.05)。綜上，7.22、14.43 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性分別在30 d和20 d時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。在高質(zhì)量濃度氨氮作用下，28.86、57.72 mg/L組的血清酸性磷酸酶活性在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，表明這兩個(gè)組的血清酸性磷酸酶活性受到了明顯的抑制，氨氮對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚血清產(chǎn)生了明顯的毒性作用。

5組試驗(yàn)魚血清中堿性磷酸酶活性的動(dòng)態(tài)變化見圖3。在10 d時(shí)，對(duì)照組的血清堿性磷酸酶活性顯著高于其他4個(gè)組(P<0.05)，7.22、14.43、28.86 mg/L間血清堿性磷酸酶活性差異不顯著，且這3組的血清堿性磷酸酶活性均顯著高于57.72 mg/L組(P<0.05)；在20 d時(shí)，14.43 mg/L組的血清堿性磷酸酶活性顯著高于其他4個(gè)組(P<0.05)，對(duì)照組和7.22 mg/L組間血清堿性磷酸酶活性差異不顯著，并且這2組血清堿性磷酸酶活性均顯著高于28.86、57.72 mg/L組(P<0.05)，57.72 mg/L組的血清堿性磷酸酶活性最低；在30 d時(shí)，7.22 mg/L組的血清堿性磷酸酶活性最高，對(duì)照組和7.22 mg/L組間血清堿性磷酸酶活性差異不顯著，并且這2組血清堿性磷酸酶活性均顯著高于其他3組(P<0.05)，14.43、28.86 mg/L的血清堿性磷酸酶活性均顯著高于57.72 mg/L組(P<0.05)。綜上，7.22、14.43 mg/L組的血清堿性磷酸酶活性分別在30 d和20 d時(shí)高于對(duì)照組。在高質(zhì)量濃度氨氮作用下，28.86、57.72 mg/L組的血清堿性磷酸酶活性在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，表明這2組的血清堿性磷酸酶活性受到了明顯的抑制，氨氮對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚血清產(chǎn)生了明顯的毒性作用。

圖2 不同質(zhì)量濃度氨氮脅迫下“新吉富”羅非魚幼魚血清酸性磷酸酶活性動(dòng)態(tài)變化同一時(shí)間內(nèi)，同列字母相同表示差異不顯著(P>0.05)，字母不同表示差異顯著(P<0.05).下同.

圖3 不同質(zhì)量濃度氨氮脅迫下“新吉富”羅非魚幼魚血清堿性磷酸酶活性動(dòng)態(tài)變化

5組試驗(yàn)魚血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的動(dòng)態(tài)變化見圖4。在10 d時(shí)，57.72 mg/L組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性最高，對(duì)照組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性最低，各組間血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性差異不顯著；血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性在20 d時(shí)和30 d時(shí)具有相同的變化趨勢(shì)，即57.72 mg/L組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于其他4組(P<0.05)，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性呈現(xiàn)出隨氨氮質(zhì)量濃度升高而顯著升高的趨勢(shì)，57.72 mg/L組>28.86 mg/L>14.43 mg/L組>7.22 mg/L組>對(duì)照組，57.72、28.86、14.43 mg/L組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，7.22 mg/L組和對(duì)照組間血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性差異不顯著。綜上，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨氨氮質(zhì)量濃度升高和脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著升高。

圖4 不同質(zhì)量濃度氨氮脅迫下“新吉富”羅非魚幼魚血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性動(dòng)態(tài)變化

3 討 論

3.1 慢性氨氮脅迫對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚生長(zhǎng)性能的影響

大量研究表明，長(zhǎng)期的氨氮脅迫可使魚類生長(zhǎng)速度降低，隨著水體中非離子氨含量的升高和脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，魚類攝食量下降，大部分能量用于機(jī)體的消耗，從而導(dǎo)致魚類生長(zhǎng)率下降甚至生長(zhǎng)停滯[8,21-24]。因此，在集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)中，將水體中非離子氨含量控制在不影響魚類生長(zhǎng)的安全范圍內(nèi)顯得尤為重要。所謂安全限制含量，是指對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)、繁殖和生存沒有明顯影響的非離子氨含量[8]。許多學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)方法研究了非離子氨對(duì)養(yǎng)殖魚類的安全限制含量。Alderson[25]曾報(bào)道，非離子氨對(duì)歐洲鰨(Soleasolea)和大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼魚的安全限制質(zhì)量濃度分別為0.066 mg/L和0.11 mg/L。而Szumski等[26]認(rèn)為，非離子氨對(duì)暖水性魚類的安全限制質(zhì)量濃度為0.08 mg/L。Person-Le Ruyet等[27]報(bào)道，非離子氨對(duì)大菱鲆幼魚的安全限制質(zhì)量濃度為0.18～0.33 mg/L。Foss等[21]的研究表明，當(dāng)非離子氨質(zhì)量濃度大于0.06 mg/L時(shí)，大西洋鱈(Gadusmorhua)幼魚的日攝食量減少，特定生長(zhǎng)率顯著低于對(duì)照組，大西洋鱈幼魚養(yǎng)殖水體中非離子氨的安全限制質(zhì)量濃度為0.06 mg/L。Lemarie等[22]研究發(fā)現(xiàn)，舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)幼魚質(zhì)量增加率與非離子氨質(zhì)量濃度成負(fù)相關(guān)，養(yǎng)殖水體中非離子氨的安全限制質(zhì)量濃度為0.26 mg/L。El-Shafai等[8]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)水體中非離子氨質(zhì)量濃度高于0.068 mg/L時(shí)，尼羅羅非魚幼魚特定生長(zhǎng)率顯著低于對(duì)照組，由此提出尼羅羅非魚幼魚養(yǎng)殖水體中非離子氨的安全限制質(zhì)量濃度為0.068 mg/L。本研究中，當(dāng)非離子氨質(zhì)量濃度為0.24 mg/L時(shí)，試驗(yàn)魚的特定生長(zhǎng)率與對(duì)照組間差異不顯著；當(dāng)非離子氨質(zhì)量濃度為0.48 mg/L時(shí)，試驗(yàn)魚的生長(zhǎng)率顯著低于對(duì)照組，與已有研究結(jié)果相比，本研究中的“新吉富”羅非魚幼魚能耐受的非離子氨質(zhì)量濃度相對(duì)較高，究其原因，可能是因?yàn)轸~類對(duì)非離子氨的耐受性存在種間差異，也可能與試驗(yàn)魚規(guī)格、養(yǎng)殖密度及試驗(yàn)條件(如pH、溫度、溶解氧及鹽度等)等不同有關(guān)。

此外，在本研究中，當(dāng)水體中非離子氨質(zhì)量濃度為0.24 mg/L時(shí)，試驗(yàn)魚在初始階段(0～10 d)、中間階段(10～20 d)和最后階段(20～30 d)的特定生長(zhǎng)率分別為1.10%/d、1.23%/d和2.00%/d，呈逐漸升高的趨勢(shì)。這一結(jié)果與Foss等[21]對(duì)大西洋鱈慢性氨氮耐受性的研究結(jié)果類似，F(xiàn)oss等[21]研究表明，在整個(gè)96 d試驗(yàn)的初始階段(0～28 d)，非離子氨質(zhì)量濃度為0.11 mg/L和0.17 mg/L試驗(yàn)組的特定生長(zhǎng)率分別比對(duì)照組降低11%和23%，而在試驗(yàn)最后階段(57～96 d)，這兩個(gè)試驗(yàn)組的特定生長(zhǎng)率分別比對(duì)照組降低7%和9%，且與對(duì)照組間無(wú)顯著差異，試驗(yàn)組的特定生長(zhǎng)率呈緩慢升高的趨勢(shì)。在對(duì)花狼鳚(Anarhichasminor)[28]和舌齒鱸[22]的慢性氨氮脅迫研究中，也觀察到了類似的現(xiàn)象。產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因，可能是魚類對(duì)環(huán)境脅迫具有適應(yīng)和自我調(diào)節(jié)能力，在慢性氨氮脅迫過(guò)程中，魚類機(jī)體能逐漸適應(yīng)非離子氨的毒性，并通過(guò)多種方式阻止非離子氨在體內(nèi)的積累，如減少體內(nèi)氨的合成、加速氨的排泄、或?qū)鞭D(zhuǎn)化為無(wú)毒的物質(zhì)[29]。Randall等[30]研究發(fā)現(xiàn)，魚類通過(guò)減少體內(nèi)蛋白質(zhì)水解和氨基酸的代謝可以阻止氨氮在體內(nèi)的累積。許多魚類通過(guò)增加體內(nèi)谷氨酰胺合成酶的活性使氨氮快速轉(zhuǎn)化為谷氨酰胺，或者通過(guò)鳥氨酸尿素循環(huán)將氨氮轉(zhuǎn)化為尿素[29,31]。

3.2 慢性氨氮脅迫對(duì)“新吉富”羅非魚幼魚血清生化指標(biāo)的影響

血液生化參數(shù)是反映魚體健康狀況和生理狀態(tài)的主要指標(biāo)，也是魚類疾病診斷的依據(jù)之一，在慢性氨氮脅迫下，水體中的非離子氨通過(guò)魚鰓的吸收，進(jìn)入血液，會(huì)對(duì)血細(xì)胞及血清中的酶類產(chǎn)生影響。酸性磷酸酶是一種對(duì)魚類的生理代謝有著重要影響的酶[32]，在魚類各組織器官中廣泛分布；堿性磷酸酶主要參與生物體對(duì)物質(zhì)的消化、吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)，調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)鈣、磷的吸收，維持鈣、磷的平衡，是魚類生長(zhǎng)發(fā)育的重要酶類之一[33]。酸性磷酸酶和堿性磷酸酶均參與了生物在環(huán)境毒物脅迫下產(chǎn)生的適應(yīng)性反應(yīng)，常用于評(píng)估環(huán)境毒物的毒性程度[34]。本研究中，血清中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶的活性在慢性氨氮脅迫下的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)基本一致，即7.22、14.43 mg/L組的血清酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性分別在30 d和20 d時(shí)高于對(duì)照組，28.86、57.72 mg/L組的血清酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。究其原因，可能是血清中的酸性磷酸酶、堿性磷酸酶主要來(lái)源于血細(xì)胞[35]，在低質(zhì)量濃度氨氮(7.22 mg/L)長(zhǎng)時(shí)間(30 d)脅迫下，或在較高質(zhì)量濃度氨氮(14.43 mg/L)較長(zhǎng)時(shí)間(20 d)脅迫下，魚體血細(xì)胞受損，其中的酸性磷酸酶、堿性磷酸酶進(jìn)入血漿；同時(shí)，魚體在氨氮脅迫下，可能產(chǎn)生了毒物興奮作用[36]，導(dǎo)致酸性磷酸酶、堿性磷酸酶誘導(dǎo)合成，從而引起血清中酸性磷酸酶、堿性磷酸酶活性顯著上升。而在高質(zhì)量濃度氨氮(28.86、57.72 mg/L)脅迫下，血清的電解質(zhì)平衡遭到破壞，酸性磷酸酶、堿性磷酸酶誘導(dǎo)作用受到抑制，導(dǎo)致酸性磷酸酶、堿性磷酸酶活性顯著下降，這與Jee等[37]的研究結(jié)果類似。本研究表明，“新吉富”羅非魚幼魚血清中酸性磷酸酶、堿性磷酸酶對(duì)氨氮具有一定耐受性，但超出生理耐受閾值后，其活性會(huì)受到顯著影響。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶是廣泛存在于動(dòng)物組織細(xì)胞內(nèi)參與氨基酸合成與分解代謝的重要氨基轉(zhuǎn)移酶，催化谷氨酸與丙氨酸之間的氨基轉(zhuǎn)換，正常血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性不高，但當(dāng)組織細(xì)胞，特別是肝臟和心臟等器官的細(xì)胞發(fā)生病變時(shí)，能引起血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性明顯升高。因此，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞受損最靈敏的指標(biāo)之一[38]，其活性的增減可以反映機(jī)體中毒或病理變化。本研究中，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性隨氨氮質(zhì)量濃度升高和脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著升高。這與鯉魚(Cyprinuscarpio)[39]、青魚(Mylopharyngodonpiceus)[40]受氨氮脅迫后的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性變化趨勢(shì)相似。這可能是由于高質(zhì)量濃度氨氮脅迫導(dǎo)致機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物增多，肝細(xì)胞腫脹、壞死，管壁細(xì)胞與基膜分離、管壁破裂等，影響肝胰腺正常生理功能所致[40-41]。