尤娟

卵巢癌是婦科常見生殖系統(tǒng)腫瘤，惡性程度高、治療難度大，嚴重威脅女性身體健康［1］。卵巢癌發(fā)病隱匿，早期癥狀不典型，臨床也缺乏明確診斷方法，導(dǎo)致60%～70%卵巢癌患者確診時已發(fā)展至晚期，錯失最佳治療時機［2］。病理活檢是診斷卵巢癌的金標準，但其屬于有創(chuàng)操作，部分患者依從性較差。血清腫瘤標志物在腫瘤篩查和診斷方面的應(yīng)用日益廣泛，成為目前臨床研究的熱點，糖類抗原 125（Carbohydrate antigen 125，CA125）是一種常用婦科腫瘤標記物，具有較高敏感性［3］。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類小分子非編碼RNA，參與細胞生長、凋亡以及能量代謝等生理過程。近年研究［4-5］發(fā)現(xiàn)，微小 RNA-21（microRNA-21，miR-21）與多種腫瘤疾病的發(fā)生密切相關(guān)，但其在卵巢癌發(fā)病過程中的作用尚不清楚。本研究分析了80例卵巢癌患者血清miR-21及CA125水平變化，探討兩者對卵巢癌的診斷價值及其與病例特征的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2016年1月至2018年1月本院接受手術(shù)治療的80例卵巢癌患者為惡性組，患者年齡37～65歲，平均（53.68±6.32）歲；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期35例；分化程度：低分化33例，中高分化47例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例。選取同期卵巢良性腫瘤患者50例為良性組，患者年齡 35～65歲，平均（54.22±6.29）歲；卵巢囊腫 29例，卵巢纖維瘤11例，卵巢包塊4例，畸形瘤6例。另選取同期50例健康女性為健康組，年齡32～65歲，平均（53.85±6.41）歲。3組研究對象基線資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入與排除標準

納入標準［6］：（1）臨床資料完整，病理診斷報告證實疾??；（2）初診治，尚未接受治療；（3）所有患者均知情同意；（4）研究方案經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過。

排除標準：排除肝腎功能不全、血液系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)疾病患者；排除其他部位惡性疾病患者；排除近半年使用過激素和免疫調(diào)節(jié)類藥物者；剔除病理資料不全，中途隨訪失聯(lián)者。

1.3 研究方法

1.3.1 標本采集

惡性組患者于入院次日和術(shù)后1個月采集空腹外周靜脈血樣10 mL，良性組和健康組分別于初診治或體檢時采集空腹靜脈血標本4 mL。將外周血以1 000 g離心15 min，分離血漿分裝后置于-80℃保存?zhèn)錂z。

1.3.2 試劑與儀器

Trizol試劑購于美國Invitrogen公司，RNA提取試劑購于Miltenyi Biotec公司，引物由上海生工公司設(shè)計合成（見表1），反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于美國Invitrogen公司，實驗儀器為ABI7300熒光PCR儀。CA125檢測試劑購于羅氏公司，檢測儀器為羅氏Conbase601分析儀。

表1 miR-21及內(nèi)參引物序列Table 1 miR-21 and internal primer sequences

1.3.3 檢測方法

①使用Trizol試劑提取外周血總RNA，然后采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進行cDNA合成。通過RT-PCR實驗擴增mRNA，反應(yīng)體系共10 μL，擴增條件：95℃15 min，94℃ 15 s，55℃ 30 s，70℃ 30 s，循環(huán) 50次。測定 mRNA 的 Ct值，通過 2-△△Ct計算 miR-21相對含量。②采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測血清CA125水平，實驗操作由專人根據(jù)說明書執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件分析，所有計量資料以（）進行描述，多組比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法檢驗；計數(shù)資料以率（%）描述，組間比較采用χ2檢驗；根據(jù)受試者工作特征曲線（Receiver operator characteristic curve，ROC）分析血清miR-21及CA125在卵巢癌診斷中的價值，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清miR-21及CA125表達情況比較

惡性組血清miR-21及CA125表達水平均高于良性組和健康組，良性組患者血清miR-21及CA125表達又高于健康組（P＜0.05）。見表2。

2.2 血清miR-21及CA125檢測對卵巢癌的診斷價值

以惡性組為陽性組，健康組與良性組合并為陰性組。繪制ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，血清miR-21和CA125單獨檢測診斷卵巢癌的AUC分別為0.925、0.872，兩者最佳診斷臨界值分別為miR-21＜2.13、CA125＜35.50 U/mL；在此診斷標準下 miR-21和CA125的診斷靈敏度分別為78.8%、62.5%，特異度為92.0%、98.0%。聯(lián)合檢測的AUC為0.959，診斷靈敏度為91.3%，顯著高于miR-21和CA125單獨檢測（P＜0.05）；診斷特異度為92.0%，與單獨檢測差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表3、圖1。

表2 各組血清miR-21及CA125表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of expression levels of serum miR-21 and CA125 in each group（±s）

表2 各組血清miR-21及CA125表達水平比較（±s）Table 2 Comparison of expression levels of serum miR-21 and CA125 in each group（±s）

組別健康組良性組惡性組F值P值n 50 50 80 miR-21 1.02±0.36 1.55±0.42 2.39±0.72 87.123 0.000 CA125（U/mL）19.34±4.85 29.91±6.23 52.66±18.83 107.454 0.000

表3 血清miR-21及CA125檢測對卵巢癌的診斷價值（U/mL，%）Table 3 Diagnostic value of serum miR-21 and CA125 in ovarian cancer（U/mL，%）

圖1 血清miR-21及CA125檢測對卵巢癌診斷的ROC曲線Figure 1 ROC curve of serum miR-21 and CA125 detection for the diagnosis of ovarian cancer

2.3 不同臨床病理特征患者血清miR-21及CA125表達情況

根據(jù)ROC分析所得血清miR-21及CA125表達臨界值為界定標準，超出臨界值表示表達陽性，低于臨界值者表示表達陰性。臨床分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化程度以及存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者血清miR-21及CA125陽性率分別高于Ⅰ～Ⅱ期、中高分化和未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

2.4 惡性組手術(shù)前后血清miR-21及CA125表達情況

惡性組患者手術(shù)1個月后血清miR-21及CA125表達水平較術(shù)前明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表5。

3 討論

近年來，隨著生活方式的改變和環(huán)境污染的加劇，卵巢癌的發(fā)生率逐年升高且呈年輕化趨勢［7］。早期卵巢癌患者生存率較高，經(jīng)系統(tǒng)治療后五年生存率可達90%以上；但由于早期癥狀不明顯且缺乏敏感的篩查指標，多數(shù)患者確診時已處于晚期，導(dǎo)致預(yù)后較差，五年生存率低于40%［8-9］。因此，早期診斷和篩查對卵巢癌患者的臨床治療和遠期預(yù)后尤為重要。

多種細胞因子參與腫瘤疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，能夠輔助臨床醫(yī)生監(jiān)測治療效果和判斷預(yù)后［10］。CA125屬于糖蛋白類腫瘤抗原，是目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的腫瘤標志物，在肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤患者血清中均顯著提高，并對患者的預(yù)后有一定指示作用［11］。本研究結(jié)果顯示，與卵巢良性腫瘤及健康女性相比，卵巢癌患者血清CA125水平顯著升高，提示CA125對卵巢癌的診斷同樣具有重要參考價值。另外，CA125在不同臨床分期、組織分化程度以及是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清中也存在明顯差異，且卵巢癌患者術(shù)后1個月時血清CA125水平也明顯降低，說明CA125在卵巢癌病理過程中發(fā)揮重要作用，可作為評估患者病情的輔助指標。

癌癥的發(fā)生和發(fā)展是多基因共同參與的過程，miRNA是一類單鏈非編碼RNA，通過與3′端配對而干擾正常mRNA的合成，實現(xiàn)對靶基因表達的調(diào)控作用［12］。研究［13-14］發(fā)現(xiàn)，miRNA通過對原癌基因或抑癌基因的調(diào)控作用，介導(dǎo)腫瘤細胞的免疫逃逸、新血管生成等途徑，參與腫瘤疾病的病理過程。miR-21是一種具有類似癌基因的miRNA，通過負調(diào)控腫瘤抑制基因TPM1、PTEN、SPRY2等靶向位點，促進腫瘤細胞的生長、分裂和侵襲，從而在血液系統(tǒng)以及實體器官腫瘤中發(fā)揮作用［15-17］。本研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清miR-21相對表達量較卵巢良性腫瘤和健康女性顯著升高，且不同臨床分期、組織分化程度以及是否存淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清miR-21表達也存在顯著差異，提示miR-21在卵巢癌發(fā)病過程中可能發(fā)揮促癌作用，其相關(guān)作用機制還需進一步研究。

表4 不同臨床病理特征患者血清miR-21及CA125表達情況比較［n（%）］Table 4 comparison of serum miR-21 and CA125 expression in patients with different clinical and pathological characteristics［n（%）］

表5 卵巢癌患者手術(shù)前后血清miR-21及CA125表達水平比較（±s）Table 5 Comparison of serum mir-21 and CA125 expression levels in ovarian cancer patients before and after surgery（±s）

表5 卵巢癌患者手術(shù)前后血清miR-21及CA125表達水平比較（±s）Table 5 Comparison of serum mir-21 and CA125 expression levels in ovarian cancer patients before and after surgery（±s）

組別術(shù)前術(shù)后1個月t值P值n 80 80 miR-21 2.39±0.72 1.87±0.53 5.465 0.000 CA125（U/mL）52.66±18.83 38.52±9.57 5.787 0.000

繪制ROC曲線分析miR-21及CA125對卵巢癌的診斷價值，結(jié)果顯示，血清miR-21和CA125單獨檢測診斷卵巢癌的AUC均大于0.8，提示兩者對卵巢癌的診斷均具有良好效果；其中miR-21對卵巢癌診斷的AUC和靈敏度均大于CA125，提示miR-21對卵巢癌診斷效能較高。卵巢癌惡性程度較高，對患者危害嚴重，避免漏診是臨床診治的關(guān)鍵，單項指標檢測必然會存在一定缺陷性，因此推薦多指標聯(lián)合檢測進行疾病篩查。本研究發(fā)現(xiàn)，miR-21和CA125聯(lián)合檢測的AUC大于單獨檢測，且聯(lián)合檢測的診斷靈敏度較單獨檢測也顯著提高，說明miR-21和CA125聯(lián)合檢測可進一步提高靈敏度，降低漏診率。

綜上所述，血清miR-21和CA125表達情況與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可作為卵巢癌早期診斷的參考指標，而miR-21和CA125聯(lián)合檢測更有助于提高卵巢癌篩查診斷的準確性，降低漏診率。