湯喬雅 宮郡茗 馬艷凌

肺癌（lung cancer）是最常見的癌癥之一，導(dǎo)致約25%的癌癥死亡［1］。研究表明，90%～95%的肺癌來自上皮細(xì)胞，其覆蓋較大和較小的氣道。肺癌傾向于在早期階段擴(kuò)散或轉(zhuǎn)移，身體的任何器官都可能受到肺癌腫瘤的侵襲［2］。為防止肺癌復(fù)發(fā)，建議在手術(shù)后進(jìn)行化療治療［3］。腫瘤標(biāo)志物的精確測量和腫瘤的治療效果監(jiān)測是早期診斷的關(guān)鍵，包括癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）、鱗狀上皮癌細(xì)胞抗原（squamous cell carcinoma antigen，SCCA）［4］。 據(jù) 相 關(guān) 研 究mRNA-21過表達(dá)縮短了人類原發(fā)性鱗狀細(xì)胞肺癌的生存時間，表明miRNA-21可能是這種疾病的診斷和預(yù)后標(biāo)志。目前由于單個腫瘤標(biāo)志物通常不足以用于癌癥診斷，檢測一組腫瘤標(biāo)志物可以顯著提高診斷價值［5］。本文將研究 CEA、NSE、SCCA聯(lián)合miR-21檢測與肺癌患者臨床病理特征、療效及預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇本院自2016年2月至2019年3月期間接受肺癌治療的患者87例，其中男性45例，女性42例，年齡37～83歲，平均年齡（58.46±3.12）歲，其中病理類型鱗癌28例，腺癌59例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者具有明確的細(xì)胞學(xué)或病理學(xué)確診證明；②患者的病灶經(jīng)影像學(xué)檢查認(rèn)為具有研究價值。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者治療前沒有進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE、SCCA血清檢查；②患者患有其他惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病或嚴(yán)重感染性疾病。以上患者及其家屬已知情并簽署同意書，本課題已通過我院倫理委員會。選取87例肺癌患者作為實驗組和同期體檢的87例健康人作為對照組。

1.2 用電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測各組腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)

采用電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（UniCel DxI800）檢測 CEA、NSE、SCCA 的表達(dá)水平，所有受試者與上午空腹抽取靜脈血5 mL，室溫靜置后用離心機(jī)進(jìn)行離心，3 000 r/min，10 min，去沉淀取上清液，使用電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行檢測。

1.3 用實時定量PCR檢測血清中miR-21的表達(dá)

從健康人和肺癌患者靜脈采血約5 mL，離心3 000 rpm十分鐘分離去血清，放于-80℃?zhèn)溆?。從血清中提取總RNA并對其檢測是否完整，用實時定量PCR檢測血清中miR-21的表達(dá)，GAPDH作為內(nèi)部參考。采用2-ΔΔCT方法計算基因的相對表達(dá)水平。

1.4 療效評價標(biāo)準(zhǔn)

肺癌臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn)［6］：①完全治愈（Complete Response，CR），體內(nèi)無腫瘤，完全治愈；②部分治愈（Partial Response，PR），體內(nèi)腫瘤數(shù)量減少和腫瘤體積減少超過原始體積一半；③病情穩(wěn)定（Stable Disease，SD），體內(nèi)腫瘤體積減少小于一半或增加小于原來體積的25%；④病情發(fā)展（Progressive Disease，PD），體內(nèi)腫瘤體積大于原來體積的25%或者出現(xiàn)腫瘤擴(kuò)散。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

以上數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件系統(tǒng)，采用Kruskal-Wallis H檢驗肺癌患者血清中CEA、NSE、SCCA和miR-21的表達(dá)和肺癌患者臨床病理特征的關(guān)系，采用Spearman等級相關(guān)性分析CEA、NSE、SCCA和miR-21和臨床病理特征的關(guān)系，采用Kaplan-Meier生存分析法分析CEA、NSE、SCCA和miR-21表達(dá)高低的生存曲線；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清中CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)對比

根據(jù)實驗結(jié)果顯示，實驗組患者腫瘤標(biāo)志物CEA、NSE、SCCA表達(dá)水平顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；實驗組患者血清中miR-21的表達(dá)顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)（±s）Table 1 Expression of CEA，NSE，SCCA and miR-21 in each group（±s）

表1 各組CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)（±s）Table 1 Expression of CEA，NSE，SCCA and miR-21 in each group（±s）

組別對照組實驗組P值CEA（μg/L）2.35±0.26 11.65±1.75 0.032 NSE（μg/L）6.14±0.79 14.51±1.62 0.027 SCCA（μg/L）1.41±0.11 2.94±0.16 0.029 miR-21 0.92±0.14 2.13±1.13 0.041

2.2 CEA、NSE、SCCA及miR-21與肺癌臨床病理特征的關(guān)系

根據(jù)分析結(jié)果，肺癌患者CEA、SCCA及miR-21的表達(dá)與性別、年齡、病理類型和TNM分期無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。肺癌患者NSE的表達(dá)與性別、年齡、病理類型無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），與臨床分期相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；臨床分期從Ⅰ～Ⅳ逐漸升高，NSE的表達(dá)從12.37、14.98、15.76逐漸增加，與臨床病理呈正相關(guān)。見表2。

2.3 CEA、NSE、SCCA及miR-21與肺癌患者療效的關(guān)系

實驗數(shù)據(jù)顯示，未有完全痊愈的患者。PR患者（26.4%，χ2=5.78）治療后CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)顯著低于治療前，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；SD患者（40.2%，χ2=8.26）治療后CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)顯著低于治療前，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；PD患者（33.3%，χ2=4.91）治療后CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)顯著低于治療前，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表2 實驗組CEA、NSE、SCCA及miR-21與肺癌臨床病理特征的關(guān)系（μg/L）Table 2 Relationship between CEA，NSE，SCCA and miR-21 in experimental group and clinicopathological features of lung cancer（μg/L）

表3 CEA、NSE、SCCA及miR-21與肺癌患者療效的關(guān)系（±s）Table 3 Relationship between CEA，NSE，SCCA and miR-21 and the efficacy of lung cancer patients（±s）

表3 CEA、NSE、SCCA及miR-21與肺癌患者療效的關(guān)系（±s）Table 3 Relationship between CEA，NSE，SCCA and miR-21 and the efficacy of lung cancer patients（±s）

療效（%）PR（26.4%）SD（40.2%）PD（33.3%）P值例數(shù)23 35 29 CEA治療前2.41±1.32 6.17±2.31 5.87±2.69治療后2.13±1.12 5.79±1.89 5.19±2.09 0.039 NSE治療前15.19±5.69 16.37±6.12 15.39±6.34治療后14.54±5.98 16.08±5.59 14.92±6.03 0.028 SCCA治療前2.98±0.18 3.45±0.26 3.28±0.14治療后2.08±0.17 2.45±0.21 2.36±0.11 0.027 miR-21治療前2.45±1.26 2.89±1.21 2.63±1.36治療后1.48±0.95 1.56±0.84 1.76±0.59 0.041

2.4 CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier生存曲線顯示，隨著CEA、NSE及SCCA表達(dá)的陽性率增加，生存曲線越低，患者存活時間越短，表明CEA、NSE及SCCA表達(dá)越高，患者預(yù)后情況越差。miR-21的表達(dá)情況與以上3種腫瘤標(biāo)志物與患者生存情況一致。生存分析結(jié)果顯示：CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)表達(dá)的高低對患者預(yù)后情況有重要意義。見圖1。

圖1 CEA、NSE、SCCA及miR-21的表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系的對比Figure 1 Comparison of CEA，NSE，SCCA and miR-21 expression and patient prognosis

2.5 血清中單個項目及聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度

實驗結(jié)果顯示，CEA、NSE、SCCA及miR-21診斷肺癌的靈敏度分別是51.7%、37.9%、52.9%、63.2%，特異度分別是90.8%、82.7%、85.1%、81.6%，四種指標(biāo)聯(lián)合診斷的靈敏度為85.1%，顯著高于單項指標(biāo)，但特異度為70.1%，顯著低于單項指標(biāo)。見表4。

表4 血清中單個項目及聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度對比［n（%）］Table 4 comparison of sensitivity and specificity of single item and combined detection in serum［n（%）］

3 討論

肺癌是主要癌癥發(fā)病率和死亡率的最常見原因［7］。該癌癥的常見治療方法包括手術(shù)，化學(xué)療法，姑息治療和放射治療［8］。目前，肺癌的診斷常用支氣管鏡檢查、組織病理學(xué)檢查和計算機(jī)斷層掃描，但這些方法均存在侵襲性差、敏感性低、特異性差等缺點；低劑量螺旋CT檢查是篩查肺癌的推薦方法［9］，由于潛在的輻射危險，患者對CT檢查感到不適，這限制了該技術(shù)在常規(guī)篩查中的應(yīng)用。因此，在臨床診斷中檢測腫瘤標(biāo)志物可能是對肺癌早期篩查的補(bǔ)充。然而，由于腫瘤標(biāo)志物的低特異性，通常單一的腫瘤標(biāo)志物不足以診斷癌癥。并且檢測一組腫瘤標(biāo)志物可以顯著提高診斷價值。因此，多生物標(biāo)志物免疫測定法引起了越來越多的關(guān)注。此外，就成本，測定時間，樣品消耗，勞動力和便利性而言，多生物標(biāo)記物免疫測定法比單生物標(biāo)記物免疫測定法具有顯著優(yōu)勢。本文將研究CEA、NSE、SCCA聯(lián)合miR-21檢測與肺癌患者臨床病理特征、療效及預(yù)后的相關(guān)性。

對某些特異miRNAs的研究表明，其可作為治療的靶點。例如，Kim等人指出miR-21具有抑制腫瘤的作用，可以作為肝癌治療的新靶點［10-13］。Yang等人指出miRNA-21可以預(yù)測NSCLC的復(fù)發(fā)和低生存率。mRNA-21過表達(dá)縮短了人類原發(fā)性鱗狀細(xì)胞肺癌的生存時間，表明miRNA-21可能是這種疾病的診斷和預(yù)后標(biāo)志［14］。miRNA在基因表達(dá)調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)［15］。肺癌的高發(fā)病率和高死亡率已成為威脅人類健康的重要因素，故本課題研究miR-21的表達(dá)與肺癌患者臨床病理特征、療效及預(yù)后的相關(guān)性。實驗結(jié)果顯示，肺癌患者miR-21的表達(dá)水平顯著高于正常人，與肺癌患者臨床病理特征無關(guān)，與療效及患者生存預(yù)后相關(guān)。

腫瘤標(biāo)志物的精確測量是早期診斷癌癥和監(jiān)測腫瘤的治療效果的關(guān)鍵，包括癌胚抗原（CEA），神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）；鱗狀上皮癌細(xì)胞抗原（SCCA）［16］。CEA是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，可用于預(yù)測許多癌癥的復(fù)發(fā)率和存活率，例如結(jié)腸癌、胃癌和肺癌等［17-18］。NSE是神經(jīng)元和外周神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的高度特異性標(biāo)記物［19］。SCCA是鱗狀細(xì)胞癌的特異性標(biāo)志物，是宮頸鱗狀細(xì)胞癌的獨立預(yù)后因素［20］。這些標(biāo)志物大多數(shù)研究集中于這些標(biāo)志物對肺癌的預(yù)后和存活率的預(yù)測價值。故本課題研究CEA、NSE、SCCA檢測與肺癌患者臨床病理特征、療效及預(yù)后的相關(guān)性。實驗結(jié)果顯示，實驗組患者CEA、NSE、SCCA的表達(dá)水平顯著高于正常人，CEA和SCCA的表達(dá)水平與肺癌患者臨床病理特征無關(guān)，NSE與肺癌的TNM分期相關(guān)，3者的表達(dá)水平與療效及生存預(yù)后相關(guān)。

靈敏度即用來衡量診斷患有疾病方法的能力，將患者正確判定為真陽性；所謂特異性就是指該指標(biāo)在診斷某疾病時，不誤診的機(jī)會有多大小。故本課題將血清中單個項目及聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度進(jìn)行對比，四種指標(biāo)聯(lián)合診斷肺癌的靈敏度顯著高于CEA、NSE、SCCA及miR-21診斷肺癌的靈敏度，但是四種聯(lián)合診斷肺癌的特異性低于單項指標(biāo)。任何一個診斷指標(biāo)，都有兩個最基本的特征，即靈敏度和特異性，如果提高其診斷的靈敏度，必然降低其診斷的特異性，換句話說，減少漏診必然增加誤診，反之亦然。綜上可知，肺癌患者血清中CEA、NSE、SCCA和miR-21的表達(dá)水平顯著高于正常人，可作為肺癌的診斷、療效及預(yù)后的指標(biāo)，四種指標(biāo)聯(lián)合診斷肺癌的靈敏度顯著提高肺癌的診斷率，為未來診斷和治療肺癌提供了新思路，但提高診斷肺癌的特異度還有待進(jìn)一步研究。