杜勝國(guó) 彭學(xué)東

（商河縣人民醫(yī)院 山東商河 251600）

1 前言

橙皮苷等黃酮類化合物對(duì)胃腸平滑肌有較好的松弛作用，可以治療腹痞滿脹痛[1]，本實(shí)驗(yàn)著重研究處方配伍方式對(duì)方中橙皮苷含量的影響。本文建立紫外-可見分光光度法測(cè)定青皮湯中橙皮苷含量的方法，研究配伍對(duì)橙皮苷的影響和引起變化的可能因素，探討方劑的配伍規(guī)律。

2 試藥與儀器

紫外-可見分光光度計(jì)；電子分析天平；超聲波清洗器；超純水器。青皮湯處方：青皮3 g，莪術(shù)、三棱各2.1 g，陳皮、神曲各1.5 g，延胡索1 g。

3 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

3.1 水煎液樣品制備

3.1.1 青皮單煎液

按處方量取青皮單獨(dú)放置于燒杯中，同時(shí)按處方量取處方中其他藥材放入另一燒杯中，加12 倍水浸泡約30min，煮沸30min 后，趁熱濾過(guò)；濾渣加10 倍水煮沸20 min，趁熱濾過(guò)，合并2 次濾液，濃縮干燥得水煎液樣品1（青皮單煎與其他煎液合并溶液）。

3.1.2 陳皮單煎液

按處方量取陳皮單獨(dú)放置于燒杯中，同時(shí)按處方量取處方中其他藥材放入另一燒杯中，加12 倍水浸泡約30 min，煮沸30 min 后趁熱濾過(guò)；濾渣加10倍水煮沸20 min，趁熱濾過(guò)，合并2 次濾液，濃縮干燥得水煎液樣品2（陳皮單煎與其他煎液合并溶液）。

3.1.3 合煎液

按處方量取處方中全部藥材放入另一燒杯中，加12 倍水浸泡約30 min，煮沸30 min 后趁熱濾過(guò)；濾渣加10 倍水煮沸20 min，趁熱濾過(guò)，合并2 次濾液，濃縮干燥得水煎液樣品3。

3.1.4 水煎液樣品浸膏得率

通過(guò)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，樣品1、樣品2 和樣品3 的出膏率分別是11.5%、12.7%和13.9%。

3.2 對(duì)照品溶液制備

稱取橙皮苷對(duì)照品10 mg，精密稱取，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)準(zhǔn)品溶液。

3.3 水煎液樣品溶液制備

稱取水煎液樣品100mg，精密稱取，加甲醇20mL，加熱回流20 min，濾過(guò)，取濾液5 mL，濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

3.4 薄層定性分析

照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述2 種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑a，展至約3 cm，取出，晾干；再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開劑b，展至約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3.5 紫外-可見分光光度法測(cè)定總黃酮含量

3.5.1 對(duì)照品溶液的制備

稱取橙皮苷對(duì)照品約10 mg，精密稱取，用90%堿性甲醇溶解并定容至100mL，作為橙皮苷對(duì)照品溶液。

3.5.2 供試品溶液的制備

稱取水煎液樣品約30 mg，精密稱取，置100 mL錐形瓶中，精密加90%堿性甲醇100 mL，超聲20 min，過(guò)濾，將溶液轉(zhuǎn)移置100 mL 容量瓶中，用堿性90%甲醇定容至刻度，混勻，即得。

3.5.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1.5 mL，分別至25 mL 量瓶中，用90%堿性甲醇定容至刻度，混勻，以90%堿性甲醇溶液為空白，在200～800 nm進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)為285 nm。

3.5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取橙皮苷對(duì)照品溶液0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、6 mL 分別置于10 mL 容量瓶中，用90%堿性甲醇定容，配成系列對(duì)照品溶液，在285 nm 處測(cè)定吸光度。以吸光度對(duì)橙皮苷的濃度做回歸方程?；貧w方程為Y=17.15X-0.001 4，r=0.999，橙皮苷質(zhì)量濃度為0.01～0.06mg/mL 時(shí)，與吸光度呈良好線性關(guān)系。

通過(guò)考察可知，用紫外分光光度法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、簡(jiǎn)便，可用來(lái)測(cè)定青皮湯水煎液中總黃酮的含量。

3.6 總黃酮測(cè)定

精密量取“3.5.2”項(xiàng)方法制備的供試品溶液5 mL，置于10 mL 量瓶中，用90%堿性甲醇定容，在285 nm處分別測(cè)定吸光值，計(jì)算出各供試品中總黃酮的含量，結(jié)果詳見表1。

表1 水煎液樣品總黃酮測(cè)定值（單位：%）

4 討論

4.1 水煎液總黃酮含量測(cè)定

橙皮苷是二氫黃酮類成分，是青皮湯中的主要有效成分之一，其含量可作為評(píng)估含青皮制劑質(zhì)量的客觀指標(biāo)之一[2，3]。本實(shí)驗(yàn)是以橙皮苷作為對(duì)照品，用紫外分光光度法測(cè)定青皮湯拆煎前后水煎液中總黃酮含量，進(jìn)而考察復(fù)方配伍對(duì)水煎液中總黃酮含量的影響，為進(jìn)一步研究青皮湯中藥物配伍與有效成分之間的關(guān)系奠定了一定的基礎(chǔ)。

4.2 研究結(jié)果討論

青皮湯君藥青皮單煎水煎液的浸膏得率為11.5%，君藥青皮為與陳皮共煎水煎液的浸膏得率為12.7%，青皮湯復(fù)方水煎液的浸膏得率為13.9%，即配伍后水煎液的浸膏得率有所升高，成分的溶出增加，說(shuō)明配伍有利于成分的溶出。

青皮湯君藥青皮單煎水煎液中總黃酮含量為15.51%，君藥青皮為與陳皮共煎水煎液中總黃酮含量為14.69%，青皮湯復(fù)方水煎液中總黃酮含量為16.68%。前2 者水煎液中總黃酮含量的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），即青皮與陳皮共煎對(duì)其復(fù)方中總黃酮含量的影響不明顯。但青皮湯復(fù)方水煎液中總黃酮含量較高，與單煎相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。青皮湯復(fù)方水煎液中總黃酮含量最高，與水煎液浸膏含量最高的結(jié)果一致，原因可能與處方中藥物之間的配伍機(jī)制有關(guān)，藥物之間的配伍有利于黃酮類成分的溶出[4，5]，有利于水煎液中黃酮類成分含量的增加。

綜上所述，青皮湯復(fù)方中各藥物的配伍有利于黃酮類成分的溶出，但對(duì)于具體的黃酮類成分的影響，還需要進(jìn)行液相、質(zhì)譜等更深入的相關(guān)研究，可以先進(jìn)行液相的相關(guān)檢測(cè)，研究復(fù)方配伍對(duì)橙皮苷含量的具體影響，再進(jìn)行相關(guān)藥理作用的研究。