趙姍姍,李玉婉,史 柯,寧曉冬,李 丹,崔艷艷,閆亞群,菅復(fù)春,張龍現(xiàn),王榮軍,寧長申*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 牧醫(yī)工程學(xué)院,河南 鄭州 450002;2.河南省洛陽市洛龍區(qū)科學(xué)技術(shù)協(xié)會,河南 洛陽 471000;3.河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院,河南 鄭州 450042;4.海關(guān)總署風(fēng)險防控中心(黃埔),廣東 廣州 510730;5.商丘師范學(xué)院,河南 商丘 476000)

羊球蟲病是由艾美爾屬球蟲寄生于羊腸粘膜上皮細胞造成腸道損傷的原蟲病,2～4周齡的哺乳羔羊易發(fā)病,一般多為亞臨床癥狀,如腹瀉、消瘦、生長受阻等,嚴重時動物發(fā)生急性腸炎而死亡[1-2]。病理切片可見腸上皮粘膜充血且有出血點,炎癥細胞浸潤明顯,彌漫性回腸粘膜增厚和折疊,空腸遠端區(qū)域淋巴結(jié)腫大,纖維組織增生等[3]。目前,羊感染的艾美爾球蟲物種共有15個,潛伏期為2～3周[4]。由于球蟲卵囊在高溫、高濕的條件下易發(fā)生孢子化,所以該病一般在夏、秋季多發(fā),導(dǎo)致幼畜死亡率升高、畜品質(zhì)下降,給牧民造成嚴重的經(jīng)濟損失,因此亟需科學(xué)的防控技術(shù)以降低該病對養(yǎng)殖業(yè)的危害[5]。藥物治療是養(yǎng)殖場最常用的球蟲病防控方法之一,建立最佳的用藥程序進而有效防控羊球蟲病對于畜牧業(yè)的發(fā)展至關(guān)重要[6]。

地克珠利(Diclazuril)作為低毒、高效廣譜抗球蟲藥,已被廣泛應(yīng)用于球蟲病的防治[7-9]。濫用Diclazuril易導(dǎo)致動物產(chǎn)生耐藥性、延誤病情和增加養(yǎng)殖成本[10]。因此,制定科學(xué)的用藥方案,嚴格掌握Diclazuril應(yīng)用的劑量和次數(shù)對于抗球蟲病十分關(guān)鍵。本研究應(yīng)用Diclazuril對自然感染球蟲的妊娠母羊及其哺乳羔羊進行分組試驗,根據(jù)球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率、減少率、抗不同種球蟲效果及增重效益進行Diclazuril藥效評估,從而選擇最佳的用藥程序,以期為防控妊娠母羊及其羔羊球蟲病提供技術(shù)依據(jù)和方法。

1 材料與方法

1.1 供試藥物及用法、用量

球畢特,100 g/瓶,含Diclazuril 1 g,購自河南新正好生物工程有限公司。用時,取本品1 g,加水10 mL,溶解混勻,按每千克體重1 mL的劑量經(jīng)口灌服。

1.2 試驗動物

24只妊娠母羊及51只哺乳羔羊，均由河南某農(nóng)牧公司羊場提供。

1.3 糞便樣品采集

對供試的妊娠母羊及其哺乳羔羊的直腸采集糞便,每只羊10～20 g,分別置于潔凈塑料袋中，并記錄羊只的耳號、放牧方式、用藥情況、精神狀態(tài)等信息；將采集的糞便樣品帶回河南農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲學(xué)實驗室,置4 ℃冰箱內(nèi)待檢。

1.4 球蟲卵囊檢查、計數(shù)及蟲種鑒定

檢查糞便中的卵囊采用飽和鹽水漂浮法;每克糞便中的卵囊數(shù)(oocysts per gram of feces, OPG)采用麥克馬斯特計數(shù)法計數(shù);依據(jù)相關(guān)文獻[11-13]所描述的方法對球蟲卵囊進行收集、培養(yǎng)和種類鑒定,用Motic顯微圖像分析處理系統(tǒng)測量并顯微拍照。

1.5 試驗設(shè)計

選擇經(jīng)糞檢確診自然感染球蟲、生產(chǎn)期相近的24只妊娠母羊，將它們隨機分為4組,每組6只;第1～3組為藥物試驗組,按照表1設(shè)計的用藥程序進行投喂,第4組為不用藥對照組。每間隔1周對供試羊進行糞便采集,應(yīng)用飽和鹽水漂浮法檢查糞便中有無球蟲卵囊并進行OPG計數(shù)。在試驗過程中羊只的飼養(yǎng)管理條件均相同；詳細記錄試驗羊的精神狀態(tài)及不良反應(yīng)；在試驗結(jié)束后對動物進行驅(qū)蟲。

表1 不同試驗組的Diclazuril的用藥程序

1.6 療效考核

1.6.1 觀察臨床癥狀 在試驗期間詳細記錄供試羊每日的飲食狀況、精神狀態(tài)、不良反應(yīng)等。

1.6.2 評定球蟲卵囊的方法 根據(jù)卵囊轉(zhuǎn)陰率、減少率考核用藥前和用藥后第7、14、21、28、35天的藥物抗球蟲效果;分別收集用藥前和用藥后糞便樣品中的球蟲卵囊并進行孢子化培養(yǎng),根據(jù)孢子化卵囊鑒定蟲種，評定藥物對不同球蟲種類的防控效果。相關(guān)指標(biāo)的計算公式如下：

1.6.3 增重效益的評判 分別對各組哺乳羔羊的初生齡、2周齡、4周齡進行稱重,計算各組在4周齡時的平均增重率，評判羊的增重效益。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

對試驗數(shù)據(jù)進行Pearson卡方檢驗,當(dāng)P<0.01時數(shù)據(jù)間差異極顯著,P<0.05時數(shù)據(jù)間差異顯著,P≥0.05時數(shù)據(jù)間無統(tǒng)計學(xué)意義,即數(shù)據(jù)間差異不顯著[14]。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試羊健康狀態(tài)的評估結(jié)果

供試母羊及其羔羊在用藥期間未出現(xiàn)不良反應(yīng),飲食狀況和精神狀態(tài)正常，表明本試驗所用藥物及用藥程序?qū)ρ虿划a(chǎn)生副作用。

2.2 用藥后球蟲卵囊評定結(jié)果

2.2.1 卵囊轉(zhuǎn)陰率 根據(jù)本試驗設(shè)計的用藥程序?qū)┰嚹秆蜻M行投喂,根據(jù)母羊用藥后球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率評定Diclazuril的藥效。結(jié)果(表2)顯示, Diclazuril 1～3組母羊的球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率均高于對照組,差異極顯著(P<0.01)，表明在本試驗中Diclazuril可有效降低球蟲卵囊數(shù)量,具有明顯的驅(qū)蟲效果。

表2 供試母羊的球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率

注：“a”表示與不用藥對照組差異極顯著(P<0.01)。

2.2.2 卵囊減少率 根據(jù)母羊用藥前后的OPG值計算各組母羊的卵囊減少率,評定Diclazuril的藥效。結(jié)果(表3)顯示:各用藥組母羊在用藥后7 d、14 d的卵囊減少率均明顯高于對照組,差異極顯著(P﹤0.01);用藥后35 d,地克珠利1組與不用藥對照組相比,差異顯著(P<0.05),地克珠利2組和地克珠利3組與不用藥對照組相比差異極顯著(P<0.01);用藥后49 d,地克珠利2組與不用藥對照組相比差異不顯著(P>0.05),地克珠利3組與不用藥對照組相比差異極顯著(P<0.01)。上述結(jié)果表明Diclazuril 3組對卵囊減少率的效果最為顯著。

表3 供試母羊球蟲卵囊減少率

2.2.3 Diclazuril抗不同種球蟲的效果 通過培養(yǎng)和鑒定各組羊用藥前和用藥后14 d的球蟲卵囊,檢測各組母羊給藥前后不同種球蟲卵囊感染情況。結(jié)果(表4)顯示：用藥前共檢測到5種艾美爾球蟲(如圖1所示),分別為Eimeriamarsica(感染率34.33%，下同)、E.granulose(46.50%)、E.parva(9.00%)、E.ahsata(7.50%)、E.pallida(2.67%)；在用藥后第14天,1～3組僅檢測到2種艾美爾球蟲卵囊,分別為E.marsica(62.67%)、E.granulose(37.33%)；不用藥對照組在用藥前和用藥后14 d均檢測到4種球蟲卵囊。表明Diclazuril可有效防控E.parva、E.ahsata和E.pallida。

表4 供試母羊受不同種球蟲卵囊的感染率%

2.3 增重效益評判結(jié)果

通過對各組哺乳羔羊進行稱重計算平均增重率,評價不同用藥程序?qū)Σ溉楦嵫蛟鲋匦Ч挠绊?。結(jié)果(表5)顯示：Diclazuril 3組的哺乳羔羊在4周齡的平均增重率高于不用藥對照組,差異顯著(P<0.05);各用藥組哺乳羔羊的平均增重率與對照組差異不顯著(P>0.05)。表明在Diclazuril 3組的用藥對哺乳羔羊增重效果最顯著。

1:馬爾西卡艾美爾球蟲(E.marsica);2:顆粒艾美爾球蟲(E.granulose);3:小型艾美爾球蟲(E.parva); 4:阿撒他艾美爾球蟲(E.ahsata);5:蒼白艾美爾球蟲(E.pallida)。

圖1 湖羊孢子化艾美爾球蟲卵囊圖(400×)表5 不同用藥組哺乳羔羊增重效果

注：“b”表示與不給藥對照組比較差異顯著(P<0.05)。

3 討論

球蟲病作為危害羊最嚴重的腸道寄生蟲病之一,在養(yǎng)殖戶或集約化養(yǎng)殖場均普遍發(fā)生,其防控形勢依然嚴峻。采取提供充足的營養(yǎng)、加強飼養(yǎng)管理、減少應(yīng)激反應(yīng)等措施對于降低球蟲病的危害有一定作用,但不能完全控制球蟲病的發(fā)生[15-16]。目前,藥物是防治球蟲病的主要途徑,但藥物使用不當(dāng)易導(dǎo)致耐藥性的發(fā)生,造成嚴重的經(jīng)濟損失[17]。因此,制定科學(xué)的用藥方案,提前使用抗球蟲藥物對妊娠母羊進行防控,不僅可有效降低球蟲病對母羊的危害,同時還可以保證幼齡羊的正常生長[18]。

本試驗選擇Diclazuril作為抗球蟲藥,根據(jù)設(shè)計的Diclazuril用藥程序分別對24只經(jīng)糞檢確診的自然感染球蟲的妊娠母羊及其羔羊進行藥效試驗。在試驗期間,供試羊無不良癥狀;通過應(yīng)用卵囊轉(zhuǎn)陰率、減少率評定Diclazuril對用藥后供試羊球蟲的防治效果,結(jié)果表明,用藥后在1～3試驗組母羊卵囊轉(zhuǎn)陰率、卵囊減少率均高于不用藥對照組,說明Diclazuril防控羊球蟲的效果比較顯著，且在母羊產(chǎn)前1周和產(chǎn)后1周,按1 mg/kg劑量投服Diclazuril,每天1次,連用2 d,對母羊及其哺乳羔羊的自然感染球蟲的防控效果最好;通過鑒定各組羊用藥前和用藥后14 d的球蟲卵囊評定藥物對不同種球蟲的效果,表明Diclazuril可有效防控E.pallida、E.parva和E.ahsata，且能保持較長時間的藥效,這與周變?nèi)A等[19]報道的“Diclazuril對各階段球蟲的防控效果不同”一致;Wang等[20]指出Diclazuril可顯著提高雞的增重效益。在本研究中Diclazuril 3組用藥程序?qū)Σ溉楦嵫虻脑鲋匦б孀詈?。綜上所述,Diclazuril 3組用藥程序?qū)δ秆蚣捌洳溉楦嵫虻淖匀桓腥厩蛳x的防控效果最好，且對哺乳羔羊的增重效果最顯著。本試驗研究結(jié)果可為防控妊娠母羊及其羔羊的球蟲病提供技術(shù)支撐。