王敏

天津紅日藥業(yè)股份有限公司 天津 301700

基因毒性雜質是在藥物中以痕量水平存在的雜質，其能夠與DNA反應以誘導DNA損傷，導致基因突變和誘發(fā)癌癥的可能性。與藥物中的其他類型雜質相比，基因毒性雜質極端極性。低暴露水平會導致嚴重的毒性，對藥物的安全性構成嚴重威脅?；撬狨ナ且活悵撛诘幕蚨拘噪s質，通常來自磺酸或其衍生物，如磺酰氯，磺酸酐和低級醇溶劑（如甲醇，乙醇，異丙醇等）之間的副反應。由于磺酸鹽類藥物被廣泛使用，不可避免地在合成中使用低級醇，使得藥物中磺酸酯的殘留風險更為普遍，這引起了很多關注。本文將首先闡述與基因毒性雜質有關的重大事件，再進一步剖析基因毒性雜質的部分檢測方法及控制策略。最后闡述磺酸酯類雜質的研究進展。

1 三起毒素門事件給制藥行業(yè)帶來的警醒和反思

2007年6月6日，歐洲藥品管理局（EMA）發(fā)現(xiàn)，一些批次的抗艾滋病藥物Viracept，奈非那韋甲磺酸鹽含有高劑量的基因毒性雜質（genotoxicimpurities，GTI）甲磺酸乙酯（含量超過1．1×10-3），決定召回羅氏制藥公司生產的奈非那韋甲磺酸鹽。．甲磺酸乙酯是潛在的致癌物質，劑量為2．5g/d，患者會攝取高達2．75mg的甲磺酸乙酯，這會嚴重影響患者的健康[1]。而在2018年7月14日，華海制藥的治療高血壓藥物纈沙坦（valsartan）被發(fā)現(xiàn)含有痕量N，N- 亞硝基二甲胺（NDMA）。并且從歐洲，美國和中國市場召回了纈沙坦及其相關的制劑產品。隨后，在2018年8月20日，在印度Torrent制藥公司生產的纈沙坦片中也發(fā)現(xiàn)了NDMA。這個公司還心甘情愿的從美國的市場上大量的召回了一些藥品。毒素門事件，給眾多的患者的生命健康都帶來了極大的隱患，不僅如此，還給很多的制藥企業(yè)也帶來了很大的經(jīng)濟損失，這個事件也算是對整個藥品生產行業(yè)的警示。

2 來源于反應物的基因毒性雜質的檢測方法

假如物質中能引起基因毒性和致癌性的結構部分在化學合成中是不可避免的，那么應該采用技術手段盡可能的減少基因毒性雜質在產品中的含量，使其符合安全需求或使其降低到一個合理的范圍內。對于活性反應物、中間體及其他化合物的化學穩(wěn)定性均應評估，并有合理的檢測方法去分析這些雜質并對其進行量化[2]。

2.1 分析方法和難點

揮發(fā)性的烷基鹵化物包括的種類很多，就像鹵代丙烷、鹵代甲烷、鹵代乙烷。要進行對于這些鹵化物的檢測，一般選用的檢測方法就是液相色譜法。而且為了能夠更好的將分析物進行有效分離，還要確保檢測的特異性以及靈敏度，還要選用適合的檢測器來進行檢測。

2.2 前處理方法

烷基鹵化物的前處理方法有頂空分析法、固相微萃取法及衍生化法。

（1）頂空分析法：埃里森等人報道了使用頂空氣相色譜（HSGC）分析23種烷基或芳基鹵化物，表明HS-GC具有良好的適用性，可用于檢測揮發(fā)性化合物，具有碘化物的反應性最好，但溴化物反應性最差，23種分析物的檢測下限為2．5～290ng·mL-1。他們將離子液體引入HS-GC方法并測定了8種高沸點烷基鹵化物，增強了HS-GC方法的應用范圍，大大提高了靈敏度（10至1000倍）和較低的檢測限（5至500ng·g-1），提供了比復雜分析更經(jīng)濟可行的方法。

（2）固相微萃取法：固相微萃?。⊿PME）是一種基于萃取涂層和樣品之間的吸附，溶解和解吸平衡，集成收集，萃取和濃縮功能的技術。弗羅斯特等人使用SPME結合HS-GC方法。分析芐基氯和氯乙基甲基醚的靈敏度分別為0．3和4．0ng·mL-1。他們使用聚合離子液體作為SPME的吸附涂層，并分析了幾種烷基鹵化物。

（3）衍生化法：衍生化法是指通過化學反應取代掉極性化合物他們的活性氫原子，從而減少檢測樣品的揮發(fā)，改善樣品的熱穩(wěn)定性以及極性。從而分離和檢測樣品。依據(jù)發(fā)生的各種反應以及所使用的各種試劑，衍生化法把他們分為五類，分別是烷基化、?；?、縮合、硅烷化以及酯化。衍生化在儀器分析中進行，廣泛用于分離和萃取等。對于非揮發(fā)性烷基鹵化物，通過化學衍生化可以提高揮發(fā)性或電離效率，然后通過GC或MS方法測定。Bai等人采取衍生二甲胺溶液，通過LC-MS結合電噴霧電離分析藥物中的三種烷基氯，靈敏度為1-5ng·mL-1。

3 磺酸酯類基因毒性雜質研究進展

由于藥物與磺酸形成鹽，因此具有溶解度增加，溶解速度加快，穩(wěn)定性增強，引濕性降低，晶體形態(tài)更穩(wěn)定的優(yōu)點，磺酸鹽藥物改善了有機弱堿性藥物的機械性能，如流動性。它在粘附性，可壓縮性等方面也具有獨特的優(yōu)點。因此，與磺酸形成鹽是改善有機弱堿藥物的成藥性質的重要手段。據(jù)統(tǒng)計，磺酸鹽相關藥物目前正處于臨床研發(fā)和上市階段的有很多。其涉及治療的病癥包括嘔吐，哮喘，血栓，細菌感染，中風，癌癥，艾滋病，抑郁癥等類型?？梢钥闯?，磺酸鹽藥物的開發(fā)和市場應用是普遍和廣泛的?；撬猁}藥物通過磺酸和藥物游離堿形成鹽反應獲得[3]。當在合成中使用低級醇溶劑（甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇等）時，使得磺酸與這些低級醇溶劑引起副反應產生磺酸酯類雜質。早在2000年，歐洲藥品質量管理局（EDQM）就需要密切關注在磺酸鹽類藥物的鹽形成過程中形成基因毒性雜質磺酸酯的潛在風險，并要求除此要檢查甲磺酸鹽中的烷基磺酸酯的限度外，還要有其他相關研究內容。隨后發(fā)生的奈非那韋甲磺酸鹽中過量的甲磺酸乙酯超標已經(jīng)成為觸發(fā)歐洲藥品監(jiān)管機構和制藥公司密切關注磺酸酯類毒性的標志性事件。羅氏仔細研究了生產過程，發(fā)現(xiàn)甲磺酸乙酯的殘留量超過了標準，因為用于清潔甲磺酸儲罐的乙醇沒有完全除去，而是以更高的濃度水平保留在儲罐中。當將甲磺酸存儲在里面的時候，就會生成一種新的物質甲磺酸乙酯。而在羅氏把這種物質的污染問題進行了相關的處理以及對這種物質的毒性進行了相關的分析之后，歐洲藥品評估機構恢復了奈非那韋甲磺酸鹽在歐洲市場的授權。這一問題的出現(xiàn)，給眾多的患者的生命健康都帶來了極大的隱患，不僅如此，還給羅氏也帶來了很大的經(jīng)濟損失。近年來，藥物監(jiān)管機構和藥物研發(fā)機構高度重視對藥物中基因毒性雜質的控制。基于風險管理的“分階段TTC”控制策略使得對基因毒性雜質的控制更加科學合理。酯類是在藥品的污染雜質中，比較常見的一種，而且他還是屬于基因毒性雜質，所以可以通過優(yōu)化以及完善相關的工藝，從而實現(xiàn)對其有效的控制。在充分保障藥品安全的基礎上，盡可能減少公司的研發(fā)投入和相應的政府監(jiān)管費用。

4 結語

雖然進行對于藥物當中的基因毒性雜質的相關檢測工作，在本質上還是屬于藥物有機雜質的檢測的范圍，但是進行基因毒性檢測，是有著一定的靈敏度，選擇性，分析物穩(wěn)定性，基質復雜性等特點，所以，是和一般的藥物檢測有著一定的區(qū)別的，基因毒性的檢測有著對相關分析方法的選擇以及開發(fā)要求較苛刻的特點。許多基因毒性雜質具有強烈或不穩(wěn)定的反應性，不能直接測量。一般都是進行利用衍生化法將這些雜質轉化成較為穩(wěn)定一些的化合物，再進行相關的檢測工作。此外，藥物的復雜成分可能引起基質效應并影響測定結果的準確性。通常通過各種提取技術對樣品進行分離，純化和富集，然后進行分析測量不僅可以提高檢測靈敏度，還可以降低基質效應并獲得更好的測量結果。