柳海東,李開祥，徐 亮，杜德志

(青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院，青海省春油菜遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家油菜改良中心青海分中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部春油菜科學(xué)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)站，青海省春油菜工程技術(shù)研究中心,西寧 810016)

油菜是世界四大油料作物之一，是中國(guó)主要的油料作物[1]，其菜籽不僅可以作為食用油，加工后的菜餅可以作為蛋白飼料；而且是重要的工業(yè)原材料之一[2]。甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus，AACC,2n=38)是由白菜(B.rapa, 基因組AA,2n=20)和甘藍(lán)(B.oleracea, 基因組CC,2n=18)通過兩兩自然雜交，天然加倍形成的異源四倍體[3]，目前已經(jīng)有7500a的栽種歷史[4]。

菌核病是油菜主要病害之一，是由廣譜性的真菌核盤菌所引發(fā)[5],菌核病會(huì)引起油菜莖稈腐爛，從而影響種子的產(chǎn)量和質(zhì)量，在中國(guó)每年油菜菌核病發(fā)病率為10%～30%，由菌核病引起油菜籽減產(chǎn)10%～80%[6-7]。目前，對(duì)油菜菌核病的防治主要采取化學(xué)方法，防治成本較高，也造成環(huán)境污染，(培)選育抗(耐)菌核病的新品種是經(jīng)濟(jì)、有效、環(huán)保的防治途徑。育種家通過傳統(tǒng)方法已選育出一些菌核病抗性較強(qiáng)甘藍(lán)型油菜品種，如半冬性甘藍(lán)型油菜品種‘中雙2號(hào)’‘中雙11號(hào)’‘中雙9號(hào)’‘湘油15號(hào)’等[8]，春性甘藍(lán)型油菜品種‘青雜5號(hào)’[9]等。杜德志等[10]研究表明，在春性環(huán)境下，春性甘藍(lán)型油菜菌核病抗性比半冬性品種弱。目前，尚未見春性、半冬性、中間型(春性×半冬性)3種生態(tài)型之間有關(guān)菌核病抗性比較的報(bào)道。

油菜由于在生長(zhǎng)過程中對(duì)溫度響應(yīng)的不同而分為冬性、半冬性和春性，在中國(guó)，冬性和半冬性油菜主要種植在長(zhǎng)江流域，春油菜主要分布在甘肅、內(nèi)蒙、青海、新疆、西藏等高海拔冷涼地區(qū)[11-12]，春性甘藍(lán)型油菜的親本資源主要從加拿大、瑞典等春油菜國(guó)家引進(jìn)，數(shù)量較少，遺傳基礎(chǔ)較為狹窄；由于菌核病主要發(fā)生在雨水多、濕度較大的環(huán)境下，在春油菜國(guó)家不是主要病害，所以，經(jīng)受的人工和自然選擇壓都較小，從而導(dǎo)致引進(jìn)的資源抗菌核病性普遍較弱[13]。中國(guó)油菜菌核病在長(zhǎng)江流域和南方地區(qū)經(jīng)常發(fā)生，該地區(qū)培育的半冬性品種(系)經(jīng)過長(zhǎng)期菌核病抗性的自然和人工選擇，抗(耐)性普遍較強(qiáng)。近年來，青海省農(nóng)林科學(xué)院從長(zhǎng)江流域引進(jìn)一些半冬性品種，通過與春性甘藍(lán)型油菜雜交，創(chuàng)建了一批含有半冬性遺傳成分的新型甘藍(lán)型油菜，為了進(jìn)一步探明不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜在菌核病抗性、產(chǎn)量相關(guān)性狀等方面的差異，本研究選取8份半冬性品種，8份春性品種(系)和8份(春性×半冬性)中間型品系，利用AFLP標(biāo)記對(duì)其遺傳差異進(jìn)行分析，通過苗期葉片接菌、花期莖稈牙簽接菌及田間自然發(fā)生3種方法調(diào)查菌核病抗性，考察主要農(nóng)藝性狀和葉綠素含量，以期為半冬性資源在春性環(huán)境下利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

春性甘藍(lán)型油菜品種(系)有‘1235-1’‘青油14號(hào)’‘46號(hào)’‘Ag-5’‘90繁89-265’‘Qu’‘偉杰’‘topars’，主要來源于中國(guó)青海、內(nèi)蒙、加拿大、美國(guó)、瑞典等國(guó)家；8個(gè)半冬性甘藍(lán)型油菜品種有‘滬油15’‘浙油758’‘贛油16’‘黔油12’‘tx65’‘陽光2009’‘華雙5號(hào)’‘中雙7號(hào)’，主要由上海、浙江、江西、貴州、湖南、湖北等地引進(jìn)；春性×半冬性中間型8個(gè)，是通過春性品種與半冬性品種雜交，其中‘D64-2’來自于‘春性46號(hào)’ב中雙9號(hào)’，‘913-2’與‘931-2’來自于春性‘Qu’ב中雙9號(hào)’，‘71-1’與‘77-1’來自春性‘Ag-5’ב中雙7號(hào)’，‘135-1’來自春性‘1235-1’בtx65’，‘934-1’來自‘Qu’ב中雙7號(hào)’，‘988-2’來自‘90繁89-265’ב浙油758’，通過小孢子培養(yǎng)和人工高世代自交獲得的一批純合品系(表1)。對(duì)上述24份材料進(jìn)行菌核病抗性鑒定、農(nóng)藝性狀、苗期葉綠素含量測(cè)定。

表1 供試甘藍(lán)型油菜名稱、類型及來源Table 1 The text materials’ name,ecotype and origin of B.napus

1.2 方法

1.2.1 大田試驗(yàn) 2018年4月初將24份供試材料種植于青海大學(xué)農(nóng)林科學(xué)院試驗(yàn)地，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)3行，行長(zhǎng)1.5 m，行間距0.3 m，每行定苗10株，株距15 cm，田間管理按常規(guī)進(jìn)行。

1.2.2 遺傳差異分析 每個(gè)材料苗期取新鮮嫩葉1～2 cm，采用Doyle改良的CTAB法進(jìn)行基因組DNA提取[14]，利用AFLP標(biāo)記中Po/Mc引物組合對(duì)24份材料進(jìn)行基因組掃描，擴(kuò)增程序參照Vos等[15]方法進(jìn)行，同一位點(diǎn)標(biāo)記記錄，有帶記為“1”，無帶記為“0”，缺失記為“-”。

1.2.3 菌核病抗性鑒定 苗期葉片接菌法[16]：于油菜5葉期，將菌核提前接種在PDA培養(yǎng)基，待菌絲長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基，用打孔器在培養(yǎng)基邊緣取直徑5 mm的菌絲塊，接種于第4片真葉中間，避開主葉脈，每小區(qū)接種6株，接種葉片放置在吸水紙保濕的不銹鋼盤內(nèi)，用保鮮膜封住盤口保濕，在15～22 ℃環(huán)境下培養(yǎng)，分別測(cè)定培養(yǎng)5 d和 10 d之后菌斑直徑大小，并計(jì)算擴(kuò)展速度。病斑擴(kuò)展速度(cm/d) =(D10-D5)/5，式中 D10和 D5分別代表培養(yǎng) 10 d 和 5 d 的病斑長(zhǎng)度。

牙簽介導(dǎo)活體莖稈接菌：參考任莉等[17]方法并有所改進(jìn)，于油菜花期，將菌核提前接種在PDA培養(yǎng)基,同時(shí)放置牙簽10～20個(gè)，待牙簽長(zhǎng)滿菌絲，用滅菌鋼釘在油菜主莖離地面20 cm的地方打孔，再將帶菌的牙簽插入孔內(nèi)，貫穿整個(gè)孔徑，折斷伸出主莖部分牙簽，再用封口膜包住接種部位，每個(gè)小區(qū)接種10株，分別測(cè)定接種12 d和 32 d之后莖稈菌斑長(zhǎng)度，并計(jì)算擴(kuò)展速度。病斑擴(kuò)展速度(cm/d) =( D32-D12) /20，式中 D32和 D12分別代表培養(yǎng)32 d和 12 d的病斑長(zhǎng)度。

大田自然鑒定：于油菜成熟期，調(diào)查自然發(fā)病株數(shù)及等級(jí)，分為5級(jí)，0 級(jí)為全株莖、枝、果軸無癥狀；1 級(jí)為全株 1/3 以下分枝(含果軸，下同)發(fā)病或主莖有小型病斑，全株受害角果數(shù)(含病害引起的非生理性早熟或不結(jié)實(shí)，下同)在 1/4以上；2 級(jí)為 1/3-2/3 分枝數(shù)發(fā)病，或分枝發(fā)病在 1/3 以下而主莖中上部有大型病斑，全株受害角果數(shù)達(dá) 1/4-2/4；3 級(jí)為全株 2/3 以上分枝數(shù)發(fā)病，或分枝發(fā)病數(shù)在 1/3-2/3 而主莖中下部有大型病斑，全株受害角果數(shù)達(dá) 2/4-3/4；4 級(jí)為全株發(fā)病[11]。發(fā)病率和病情指數(shù)的計(jì)算公式為：

發(fā)病率=發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%；病情指數(shù)=∑(病級(jí)株數(shù)×代表病級(jí))/(株數(shù)總和×4)×100。

1.2.4 苗期葉綠素含量測(cè)定 利用SPAD502進(jìn)行葉片葉綠素測(cè)定[18]，葉綠素含量為SPAD值，單位為“1”。測(cè)定每個(gè)單株五葉期相同位置葉片的葉綠素含量，測(cè)量時(shí)避開主葉脈，每小區(qū)測(cè)3個(gè)單株，每個(gè)單株測(cè)3次。

1.2.5 產(chǎn)量相關(guān)性狀 材料成熟時(shí)，每小區(qū)在中間1行隨機(jī)取樣 8 株進(jìn)行考種，考察性狀為:角果粒數(shù)、單株角果數(shù)、千粒質(zhì)量和單株產(chǎn)量等主要農(nóng)藝性狀。角果粒數(shù)：在主軸及上、中、下分枝花序上隨機(jī)取10個(gè)正常角果，計(jì)算其平均每果飽滿和略欠飽滿的種子數(shù)；單株角果數(shù)：全株具有一粒以上飽滿或略欠飽滿種子的角果總數(shù)；千粒質(zhì)量:將整個(gè)小區(qū)完熟種子混勻稱千粒質(zhì)量；單株產(chǎn)量：整株所有種子稱量結(jié)果。分別對(duì)每個(gè)小區(qū)的初花期進(jìn)行記載，花期記錄以小區(qū)內(nèi)每個(gè)植株第一朵花開為標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)小區(qū)中25%的植株達(dá)到開花標(biāo)準(zhǔn)后則認(rèn)為是該小區(qū)的初花期，初花期=25%開花時(shí)間-播種期。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

聚類分析采用Ntsys-pc軟件中非加權(quán)類平均法(unweighted pair group method arithmetic averages, UPGMA)進(jìn)行分析[19-20]。利用Excel進(jìn)行方差分析、多重比較和t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜遺傳差異分析

利用AFLP標(biāo)記Po/Mc組合，選取擴(kuò)增效果清晰易讀(圖1)，多態(tài)性豐富的引物37對(duì)，共產(chǎn)生152個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，利用這些多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行聚類分析。結(jié)果表明，在遺傳相似系數(shù)0.54處將24份不同生態(tài)類型甘藍(lán)型油菜品種劃分為兩大類，第Ⅰ類包括8個(gè)半冬性品種和兩個(gè)(春性×半冬性)中間型品系‘77-1’和‘135-1’，第Ⅱ類包括8份春性品種和6份(春性×半冬性)品系；在遺傳相似系數(shù)0.58處將所有材料分為4個(gè)亞群，第Ⅰ亞群包括8個(gè)半冬性品種和1個(gè)(春性×半冬性)品系‘77-1’，第Ⅱ亞群只含有1個(gè)(春性×半冬性)品系‘135-1’，第Ⅲ亞群包括8份春性品種和2份(春性×半冬性)品系‘934-1’‘988-2’，第Ⅳ亞群包括4份(春性×半冬性)品系‘D64-2’‘931-2’‘71-2’和‘913-2’。結(jié)果說明，半冬性品種與春性品種之間具有較大的遺傳差異，且不同生態(tài)類型甘藍(lán)型油菜品種(系)之間遺傳差異大于相同類型品種(系)之間遺傳差異(圖2)。

1～24泳道分別代表24個(gè)不同品種(系)，與表1中24個(gè)材料編號(hào)對(duì)應(yīng) Electric lanes 1-24 represent 24 different varieties(lines), corresponding to the 24 materials’ numbers in table 1, respectively

圖1 AFLP引物Po1/Mc3擴(kuò)增結(jié)果
Fig.1 Amplified profile by AFLP primer Po1/Mc3

圖2 不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜基于AFLP 標(biāo)記的聚類圖Fig.2 Dendrogram ofdifferent ecotypes of B. napus based on AFLP markers

2.2 不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菌核病抗性分析

離體葉片接種鑒定結(jié)果表明，接菌5 d后，8個(gè)春性品種葉片菌斑顯著大于春性×半冬性品系和半冬性品種，春性品種病斑直徑為2.38～3.72 cm，春性×半冬性品種(系)病斑直徑為1.04～ 2.37 cm，半冬性品種病斑直徑為0.59～2.21 cm；接菌10 d后，春性品種病斑直徑為6.60～ 7.49 cm，春性×半冬性品種(系)病斑直徑為 4.11～6.58 cm，半冬性品種病斑直徑為2.40～ 6.30 cm，大多數(shù)春性品種、春性×半冬性品種(系)和半冬性之間病斑直徑兩兩差異達(dá)到顯著(P<0.05)或極顯著水平(P<0.01)；多數(shù)春性品種病斑擴(kuò)展速度與半冬性品種、春性×半冬性品種(系)之間差異顯著(P<0.05)，但半冬性品種與春性×半冬性品種(系)之間差異不顯著，半冬性品種中‘黔油12’較之其他同類型品種，病斑直徑及擴(kuò)展速度較快，表現(xiàn)較為感病，春性×半冬性品種(系)中‘D64-2’和‘988-2’菌斑直徑較小，擴(kuò)展速度較慢，說明抗性較強(qiáng)(表2)。

牙簽介導(dǎo)活體莖稈接種發(fā)展速度較慢，約一周后形成病斑，12 d后，春性品種病斑發(fā)展到 4.70～7.81 cm，經(jīng)過20 d，擴(kuò)展到14.95～54.86 cm，擴(kuò)展速度較之其他兩種生態(tài)型品種(系)最快；春性×半冬性品種(系)病斑長(zhǎng)度由12 d時(shí)的2.53～5.68 cm擴(kuò)展到32 d時(shí)的12.20～20.02 cm，其中擴(kuò)展最快的品系是‘135-1’，病斑長(zhǎng)度和擴(kuò)展速度較慢的品系是‘988-2’和‘934-1’，說明這兩品系抗性較強(qiáng)；半冬性品種12 d時(shí)病斑長(zhǎng)度為1.13～3.52 cm，32 d后，擴(kuò)展到9.10～14.16 cm，病斑長(zhǎng)度和擴(kuò)展速度都顯著小于前面兩種類型，半冬性品種中，‘黔油12’病斑長(zhǎng)度及擴(kuò)展速度較快，表現(xiàn)較為感病(表3)。

田間自然鑒定結(jié)果顯示(表4)，春性品種發(fā)病率在22.17%～41.98%，病情指數(shù)為12.63～31.36，發(fā)病率最高的為‘1235-1’，最低的為‘偉杰’；春性×半冬性品種(系)發(fā)病率在16.15%～23.57%，病情指數(shù)為7.1～14.29，發(fā)病率最高的為‘135-1’，發(fā)病率最低的為‘934-1’；半冬性品種發(fā)病率在23.78%～6.93%，病情指數(shù)為3.02～16.37，發(fā)病率最高的為‘黔油12’，最低的為‘浙油758’。春性品種發(fā)病率和病情指數(shù)顯著高于中間型和半冬性的大多數(shù)品種(P<0.05)。不同生態(tài)型之間發(fā)病率和病情指數(shù)以春性品種最高，中間型次之，半冬性品種最低，說明半冬性品種最抗病，中間型次之，春性品種抗病性最差。

對(duì)大多數(shù)品種而言，3種不同方法鑒定結(jié)果表現(xiàn)一致，半冬性品種‘黔油12’在3種方法中較之同類型其他品種表現(xiàn)為感病，抗性較弱，‘浙油758’無論在葉片染菌，牙簽染菌還是自然發(fā)病都表現(xiàn)出極強(qiáng)的抗性，春性×半冬性品系‘934-1’‘988-2’和‘D64-2’表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗性。3種生態(tài)型品種在3種方法之下都表現(xiàn)出春性抗病性最弱，春性×半冬性次之，半冬性最強(qiáng)，三者之間兩兩都達(dá)到顯著或極顯著水平(圖3)。

表2 離體葉片接種法測(cè)定不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜菌核病抗性Table 2 S.sclerotiorum resistance of different B.napus accessions detected with in vitro leaf inoculation method

注：數(shù)值后不同小寫和大寫字母表示在 0.05 和 0.01 的水平上達(dá)顯著或極顯著差異。下同。

Note:Values followed by different letters are significantly different at the 0.05(small letter) or 0.01(capital letter) probability levels. The same below.

以上結(jié)果說明不同和相同生態(tài)類型甘藍(lán)型油菜品種之間菌核病抗性存在差異，半冬性品種抗性最強(qiáng)，不易感病，而春性×半冬性品種(系)次之，春性品種最弱，易感病，說明利用半冬性品種可以有效提高甘藍(lán)型春油菜菌核病抗病能力。

2.3 不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜葉綠素含量分析

對(duì)24份不同生態(tài)類型的甘藍(lán)型油菜品種(系)進(jìn)行葉綠素含量測(cè)定，并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析。從表5可以看出，在青海生長(zhǎng)條件下，春性品種葉綠素含量高于半冬性品種，并達(dá)到極顯著水平(P<0.01)，春性×半冬性品種(系)的葉綠素含量顯著高于半冬性品種(P<0.05)，春性品種與春性×半冬性品種(系)之間葉綠素含量沒有差異。

2.4 甘藍(lán)型油菜品種(系)產(chǎn)量相關(guān)因子及初花期分析

對(duì)同一生態(tài)型內(nèi)不同甘藍(lán)型油菜品種(系)的產(chǎn)量相關(guān)因子及初花期進(jìn)行多重比較，從表6可以看出，在半冬性品種中，‘中雙7號(hào)’單株產(chǎn)量和每角粒數(shù)最高，分別為21.93 g和27.29個(gè)，單株產(chǎn)量最低的為‘贛油16’(8.68 g)，該品種全株有效角果數(shù)也在8個(gè)品種中最少，為169.86個(gè)，千粒質(zhì)量大于3.9 g的品種有‘tx65’‘華雙5號(hào)’‘滬油15’和‘中雙7號(hào)’，其余差異不明顯，初花期在半冬性環(huán)境下最長(zhǎng)的為‘滬油15’，達(dá)到 92 d，最短的為‘黔油12’(78 d)；8個(gè)中間型品種(系)中單株產(chǎn)量和全株有效角果數(shù)排前兩位的分別為‘934-1’(25.77 g，406個(gè))和‘931-2’(23.97 g，347個(gè))，每角粒數(shù)多的品系千粒質(zhì)量較小，如‘D64-2’‘135-1’，中間型品種(系)花期差異不大，最早和最晚只相差4 d；春性品種中單株產(chǎn)量排前4位的分別為‘Qu’‘偉杰’‘青油14’和‘46號(hào)’，排后兩位的為‘90繁89-265’和‘1235-1’，每角粒數(shù)、千粒質(zhì)量和全株角果數(shù)也是呈現(xiàn)不同程度的差異，初花期在不同品種之間存在差異，‘青油14’初花期在所有品種中最短，為68 d，而‘偉杰’初花期最長(zhǎng)，為82 d，兩者相差14 d。綜上所述，同一生態(tài)型內(nèi)不同甘藍(lán)型油菜品種(系)產(chǎn)量相關(guān)因子存在不同程度差異，說明相同生態(tài)型不同品種各有特性。

為了明確上述5個(gè)農(nóng)藝性狀在不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜品種(系)之間是否存在差異，進(jìn)一步對(duì)初花期、每角粒數(shù)、千粒質(zhì)量、單株產(chǎn)量、全株角果數(shù)等農(nóng)藝性狀進(jìn)行綜合分析。結(jié)果表明，春性品種和中間型品種(系)在初花期上顯著短于半冬性品種；在每角粒數(shù)性狀上，春性品種顯著多于半冬性品種，而中間型品種(系)與其他兩種生態(tài)型甘藍(lán)型油菜品種之間沒有差異；春性品種和中間型品種(系)的單株產(chǎn)量分別顯著高于半冬性品種；3個(gè)不同生態(tài)類型的品種在千粒質(zhì)量和全株角果數(shù)上并沒有表現(xiàn)出差異(表7)。

表3 牙簽介導(dǎo)活體莖稈接種測(cè)定油菜對(duì)菌核病的抗性Table 3 Responses to S.sclerotiorum resistance of 24 genotypes inoculated stem in vivowith toothpick on 12 d and 32 d

表4 不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜田間菌核病抗性比較Table 4 Comparison of resistance to S.sclerotiorum in the farmer field by natural infection of different ecotypes

左圖為大田自然發(fā)病鑒定結(jié)果，右圖為不同接種方法鑒定結(jié)果 The left plate shows the natural infection result ofS.sclerotiorum, and right one is the artificial infection result ofS.sclerotiorum；*表示差異達(dá)到顯著水平(P<0.05) Significant difference atP<0.05 probability level，**表示差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01) Significant difference atP<0.01 probability level

圖3 不同生態(tài)類型甘藍(lán)型油菜菌核病抗性比較Fig.3 Comparison of resistance to S.sclerotiorum among different ecotypes B.napus

注：*差異顯著(P<0.05)； **差異極顯著(P<0.01)。

Note:Asterisk are significantly different(P<0.05)(single asterisk) or(P<0.01)(double asterisk) probability levels byttest.

表6 同一生態(tài)型甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量相關(guān)因子比較Table 6 Comparion of yield components within same ecotype B.napus

表7 不同生態(tài)類型甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量相關(guān)因子t檢驗(yàn)Table 7 T text for yield components indifferent ecotypes B. napus

注：數(shù)據(jù)右上角1、2、3分別表示春性與春性×半冬性之間t值，春性與半冬性之間t值，春性×半冬性與半冬性之間t值；*差異顯著 (P<0.05)。

Note:the number 1, 2 and 3 in the top right corner departerment of thetvalue between the spring varieties and the middle type varieties, between the spring varieties and the semi-winter varieties and between the middle type varieties and the semi-winter varieties, respectively.

3 討論與結(jié)論

為了進(jìn)一步探明半冬性甘藍(lán)型油菜在春油菜環(huán)境下的利用價(jià)值，本研究選取8份半冬性品種作為半冬性甘藍(lán)型油菜的代表，主要是由于這8份材料在春油菜環(huán)境下能夠正常成熟，雖然花期與春油菜有差異，但大多數(shù)花期與春性品種相差不大，不影響其利用，這些半冬性品種來自長(zhǎng)江流域不同地區(qū)，其中有7份來自長(zhǎng)江中下游的5個(gè)地區(qū)，‘黔油12’來自貴州；8份春性品種一部分選自早期從加拿大、美國(guó)、瑞典、中國(guó)內(nèi)蒙古等國(guó)家和地區(qū)引進(jìn)的品種，如‘Ag-5’‘Qu’‘偉杰’等，這些品種是春油菜種質(zhì)資源創(chuàng)建的原始親本，還有一些春油菜本地品種，如‘1235-1’‘90繁89-256’等；8個(gè)中間型品種(系)的原始親本至少有一個(gè)或兩個(gè)都來源于本研究所選用的春性品種和半冬性品種，如‘D64-2’來自于‘春性46’ב中雙9號(hào)’‘71-1’與‘77-1’來自春性‘Ag-5’ב中雙7號(hào)’。本研究對(duì)24份不同生態(tài)類型的甘藍(lán)型油菜品種(系)進(jìn)行遺傳差異分析，結(jié)果表明，在遺傳相似系數(shù)0.54處將春性和半冬性品種區(qū)分開來，但春性×半冬性品種(系)跟春性品種聚在一起，說明不同生態(tài)類型品種在基因交流過程中只發(fā)生少量有效片段的滲入，大部分基因片段還是以春性為主。在遺傳相似系數(shù)0.58處將全部的春性品種、半冬性品種和部分春性×半冬性品種(系)區(qū)分開來，中間型部分跟半冬性聚在一起，部分跟春性品種聚在一起，主要原因是導(dǎo)入半冬性遺傳成分有多有少。說明不同生態(tài)類型品種間遺傳差異較大，通過導(dǎo)入半冬性遺傳成分可以有效擴(kuò)大不同生態(tài)類型品種間遺傳差異，這些研究結(jié)論與前人研究結(jié)論一致[21-22]。

油菜菌核病的鑒定主要分為人工接種和大田自然鑒定兩類，人工接種方法包括苗期葉片接菌[16]、花期莖稈牙簽接菌、葉柄接種[17]。大量研究表明，苗期葉片離體接種不能客觀反映材料抗性，花期接菌方法可有效反映不同材料抗性差異[16-17,23]。本研究采用苗期離體葉片接菌、花期活體莖稈牙簽接菌和大田自然鑒定3種方法對(duì)不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜菌核病抗性進(jìn)行鑒定分析，3種鑒定結(jié)果顯示不同生態(tài)型品種之間抗性趨勢(shì)基本一致，3種生態(tài)型品種在3種方法之下都表現(xiàn)出春性抗病性最弱，春性×半冬性次之，半冬性最強(qiáng)，三者之間兩兩都達(dá)到顯著或極顯著水平，在各生態(tài)型內(nèi)部不同品種之間，3種方法鑒定結(jié)果表現(xiàn)一致性較差，但個(gè)別品種如‘黔油12’，在3種方法中較之同類型其他品種抗性較弱，浙油758無論在葉片染菌，牙簽染菌還是自然發(fā)病都表現(xiàn)出極強(qiáng)的抗性。春性×半冬性品系‘934-1’‘988-2’和‘D64-2’表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗性,主要原因可能是這3個(gè)中間型品系的半冬性親本‘中雙9號(hào)’‘中雙7號(hào)’和‘浙油758’菌核病抗性較強(qiáng)。前期眾多的研究結(jié)果表明：在春性環(huán)境下，半冬性甘藍(lán)型油菜菌核病抗性強(qiáng)于春性甘藍(lán)型油菜[10-11,22,24]，中國(guó)春油菜親本資源主要從加拿大、瑞典等國(guó)家引進(jìn)，而這些國(guó)家菌核病不是主要病害，所以自然選擇和人工選擇壓較小，導(dǎo)致這些引進(jìn)資源菌核病抗性普遍較弱[13]，在油菜的抗菌核病育種上,現(xiàn)在尚無較好的抗源，加之菌核病抗性表現(xiàn)為部分顯性[25]，所以，在現(xiàn)有甘藍(lán)型油菜種質(zhì)資源中通過聚合有效抗源可以提高油菜的抗耐病性[10-11,24，26]。本研究中，中間型材料通過在春性資源中導(dǎo)入半冬性遺傳成分，其菌核病抗性顯著高于春性品種，這說明通過不同生態(tài)型資源之間有效基因交流，可改良其性狀。

本研究對(duì)不同生態(tài)型甘藍(lán)型油菜產(chǎn)量相關(guān)性狀進(jìn)行分析，中間型品種(系)和春性品種的單株產(chǎn)量、春性品種的每角粒數(shù)分別高于半冬性品種。研究表明，油菜每角粒數(shù)與每個(gè)角果中胚珠發(fā)生數(shù)、胚珠發(fā)育和蜜蜂傳粉等因素有關(guān)[27-29]，春性品種每角粒數(shù)顯著高于半冬性品種，原因可能是春性品種在春性環(huán)境下選育，對(duì)環(huán)境適應(yīng)性較強(qiáng)，自身發(fā)育也比較完善，而半冬性品種在春性環(huán)境中由于其生育期較長(zhǎng)，花期較晚，可能會(huì)導(dǎo)致胚珠發(fā)育遲緩或部分胚珠敗育，從而不能有效完成受精。在單株產(chǎn)量方面，每角粒數(shù)也是影響單株產(chǎn)量的因素之一，春性品種每角粒數(shù)顯著高于半冬性品種，所以造成春性品種單株產(chǎn)量顯著高于半冬性品種；另一方面，由于半冬性品種成熟其較晚，春性條件下會(huì)造成成熟度不好，因而對(duì)單株產(chǎn)量產(chǎn)生一定的影響。前期研究結(jié)果表明春性甘藍(lán)型油菜苗期葉綠素含量顯著高于半冬性甘藍(lán)型油菜品種[30]，本研究結(jié)果也證明該結(jié)論，另外，通過中間型與其他兩種類型比較，中間型品種(系)的葉綠素含量顯著高于半冬性品種(表5)，葉綠素含量的高低會(huì)影響光合速率[31]，這也可能是春性品種單株產(chǎn)量高于半冬性品種的原因之一。

本研究首次證明中間型(春性×半冬性)品種(系)在菌核病抗性顯著強(qiáng)于春性品種，在春油菜菌核病抗性育種中，可以通過導(dǎo)入半冬性遺傳成分來選育高抗菌核病的油菜資源，半冬性油菜也可以通過導(dǎo)入春性甘藍(lán)型油菜基因片段來改良葉綠素含量及產(chǎn)量等性狀。