黃 斌，陳 婷，金 岸

(1.湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南 懷化 418000；2.貴州健康職業(yè)學(xué)院，貴州 銅仁 554300)

楊梅(Myrica rubra Sieb. et Zucc)是亞熱帶果樹,為楊梅科(Myricaceae)、楊梅屬(Myrica)的常綠喬木[1]，主產(chǎn)于浙江、湖南、云南等地，《本草綱目》記載其具有"生津，止渴，調(diào)五臟，滌腸胃，除煩饋惡氣"之功效[2]。楊梅中主要含有黃酮類化合物，研究表明,它們能抗炎、清除自由基以及降低心腦血管疾病的發(fā)病率[3]，另外還具有抗凝、降血壓、抗氧化、抗腫瘤[4]等作用。但楊梅中部分黃酮類成分性質(zhì)不太穩(wěn)定，遇空氣容易氧化變色，服用時(shí)會(huì)產(chǎn)生苦味和異味[5]，將其制成微囊后可有效解決這些問(wèn)題。本研究以靖州楊梅為研究對(duì)象，選用高分子化合物羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(hydroxypropyl methyl cellulose phthalate，HPMCP)為囊材，楊梅黃酮為囊芯物，通過(guò)噴霧干燥法制備出微囊，從而提高藥物的穩(wěn)定性，為楊梅黃酮類藥物新劑型開發(fā)以及當(dāng)?shù)貤蠲樊a(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)升級(jí)有著重要意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SD-BASIC噴霧干燥儀：Lab-plant UK Ltd；LC-350A 超聲波中藥處理機(jī)：上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；UV-2800紫外可見分光光度計(jì)：上海尤尼柯有限公司；S-3400N 掃描電子顯微鏡：日本日立公司；H-1650高速臺(tái)式離心機(jī)：長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公公司；RE-D2AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；AUW120D 電子分析天平：日本島津公司。

1.2 試劑

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)201508)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；十二烷基硫酸鈉為化學(xué)純(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；乙醇分析純；蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 正交設(shè)計(jì)確定制備工藝

噴霧干燥法制備楊梅黃酮微囊的過(guò)程中，存在多種因素影響。通過(guò)預(yù)試驗(yàn)及文獻(xiàn)查閱[6-9]，選擇了進(jìn)風(fēng)溫度(A)、進(jìn)料速度(B)、囊芯囊材質(zhì)量比(C)作為考察因素，以包封率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行 L9(34)正交試驗(yàn)。正交試驗(yàn)因素與水平見表 1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平Tab.1 Factors and levels

2.2 微囊的制備

稱取一定量的囊材HPMCP溶于80%的乙醇水溶液中(配置成3%溶度)，加入楊梅黃酮提取液混勻，按囊芯和囊材總量的4%加入十二烷基硫酸鈉，混和均勻，進(jìn)行噴霧干燥，冷卻，制得微囊。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve

精密量取蘆丁對(duì)照溶液2，4，6，8，10mL于25mL的容量瓶中，加入 5%NaNO2溶液1mL，搖勻；6min后加入10%Al(NO)3溶液1mL，搖勻；6min后再加入4%NaOH溶液5mL，搖勻靜置10min后精密加入70%乙醇至刻度線，于 510nm處測(cè)定吸光度。以樣品濃度x為橫坐標(biāo)，吸光度y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為：Y=24.31X+0.109，R2=0.9993。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn)

精密量取蘆丁對(duì)照品溶液于25mL容量瓶中，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，測(cè)定其吸光度，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果RSD=1.72%。

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取6份同一份供試品，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，測(cè)定其吸光度，結(jié)果RSD=1.35%。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密量取同一供試品溶液，分別于0、2、6、12、24、36、48、72h時(shí)按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，測(cè)定其吸光度，結(jié)果RSD=2.14%，表明樣品在72h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 微囊包封率的測(cè)定

2.5.1 微囊表面楊梅黃酮含量的測(cè)定

精確稱取楊梅黃酮微囊1.00g 溶于適量的水中，定容至100mL后以 3000r/min 的速度離心10min，然后吸取上清液 1mL置于25mL容量瓶中，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，測(cè)定其吸光度再由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度，從而得到微囊表面的楊梅黃酮的含量。

2.5.2 干粉中總楊梅黃酮含量的測(cè)定

精確稱取楊梅黃酮微囊1.00g，用30mL的無(wú)水乙醇充分溶解囊壁，再加蒸餾水定容至100mL 容量瓶中，超聲處理 30min 后吸取溶液1mL置于至 25mL 容量瓶中，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，測(cè)定其吸光度再由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度，從而得到干粉中總楊梅黃酮的含量。

2.5.3 計(jì)算包封率

包封率/%= (1-微囊表面楊梅黃酮含量/干粉中總楊梅黃酮含量)/100，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of orthogonal design

方差分析結(jié)果表明，各因素影響微囊包封率的順序是B>A>C，即進(jìn)樣速度>進(jìn)風(fēng)口溫度>囊芯囊材質(zhì)量比，得到最佳工藝條件為A2B3C3，即進(jìn)風(fēng)口溫度140℃，進(jìn)樣速度7mL/min，囊芯囊材質(zhì)量比2∶1。

表3 方差分析Tab.3 Results of variance analysis

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

選定正交試驗(yàn)結(jié)果最優(yōu)工藝參數(shù)進(jìn)行3批樣品的噴霧干燥驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of verification test

由驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果可知，用最佳工藝生產(chǎn)出的三批樣品包封率較高，RSD符合要求，表明該工藝可行性好，重現(xiàn)性高。

2.7 楊梅黃酮微囊的表面顯微形態(tài)

用掃描電子顯微在放大20倍的條件下觀察到楊梅黃酮微囊的表面結(jié)構(gòu)，微囊分布均勻，成囊性較好。結(jié)果見圖2。

圖2 楊梅黃酮微囊電鏡圖(20×)Fig.2 Myricetin microcapsules figures of SEM(20 ×)

3 討論

在噴霧干燥法制備楊梅黃酮微囊的工藝考察中，發(fā)現(xiàn)出風(fēng)溫度由進(jìn)風(fēng)溫度和進(jìn)料速度所決定，因此，未對(duì)出風(fēng)溫度進(jìn)行考察。

在文獻(xiàn)[10-11]及預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上確定了羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯囊材的最佳濃度為3%，而且選用 HPMCP 作為囊材對(duì)內(nèi)部囊芯物的保護(hù)效果也比較理想。制備工藝中加入乳化劑十二烷基硫酸鈉，能降低界面的表面張力，使囊材更輕松的包裹囊芯物，同時(shí)也能有效地減少微囊黏壁及靜電吸附作用[12]。

本實(shí)驗(yàn)采用噴霧干燥法制備楊梅黃酮微囊，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝，以微囊包封率為指標(biāo)，并進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)，證實(shí)了工藝的可行性和穩(wěn)定性，為日后楊梅黃酮類藥物新劑型的開發(fā)以及當(dāng)?shù)貤蠲樊a(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)升級(jí)有著深遠(yuǎn)的意義。