王菲迪，吳聲敢，蔣金花，徐明飛，柳新菊，安雪花，呂露，趙學(xué)平

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所 省部共建農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(籌)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310021)

氟嘧菌酯是一種新型的甲氧基丙烯酸酯類農(nóng)藥，作為一種新型的內(nèi)吸性殺菌劑主要用于莖葉處理。氟嘧菌酯具有快速高效殺菌和持效期長的特性，殺菌原理是通過阻斷細(xì)胞色素間的電子傳遞，抑制線粒體呼吸，破壞能量生成從而抑制真菌生長，在禾谷類、蔬菜等作物上有廣泛的應(yīng)用[1-2]。氟嘧菌酯已于2017年過新農(nóng)藥登記資料保護(hù)期，已引起國內(nèi)農(nóng)藥企業(yè)的登記熱潮，在我國具有廣闊的市場前景[3]。

目前，有關(guān)氟嘧菌酯殘留檢測的報(bào)道還較少。俞建忠等[4]報(bào)道了氟嘧菌酯原藥的分析方法，采用高效液相色譜對其進(jìn)行分離分析；雒麗麗等[5]采用超高效液相色譜法對水果和飲料中氟嘧菌酯進(jìn)行檢測；王云鳳等[6]基于液相色譜-質(zhì)譜建立了果蔬中包括氟嘧菌酯在內(nèi)的8種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑殘留檢測方法；Wang等[7]采用固相萃取結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了黃瓜及土壤中氟嘧菌酯和戊唑醇同時(shí)檢測的方法。目前氟嘧菌酯在我國的登記產(chǎn)品還很少，除原藥外僅有2種產(chǎn)品登記用于黃瓜和番茄。氟嘧菌酯對水稻紋枯病和稻曲病有較好的防治效果，且同類產(chǎn)品嘧菌酯已被多次登記用于防治水稻紋枯病、稻瘟病和稻曲病，因此，氟嘧菌酯在水稻病害防治上有較好的應(yīng)用前景，未來有可能被頻繁登記用于水稻紋枯病和稻曲病等病害防治。目前水稻植株上氟嘧菌酯的檢測分析還未見報(bào)道，而水稻在我國農(nóng)產(chǎn)品中占據(jù)重要地位，因此，有必要建立氟嘧菌酯在水稻中的殘留檢測方法。

QuEChERs方法是近年來在農(nóng)藥殘留分析領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的一種前處理技術(shù)，具有簡單、快速、高效、成本低、試劑用量少、檢測范圍廣的特點(diǎn)。QuEChERs方法通常采用N-丙基乙二胺(PSA)、C18和石墨化碳黑(PC)等填料作為吸附劑。PSA用于除去提取液中影響檢測的脂肪酸、有機(jī)酸、部分色素等干擾物，從而降低液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測過程中的基質(zhì)干擾。PC主要用于除去色素對檢測結(jié)果的干擾。C18主要用于除去脂類、甾醇和維生素的干擾。因此，本研究采用QuEChERs前處理技術(shù)，并結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)，檢測水稻植株上氟嘧菌酯的殘留量，為水稻中氟嘧菌酯的殘留動(dòng)態(tài)及分布研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ABSciex液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(Exion LCAD-Triple QuadTM 5500，美國ABSciex公司)；Luna Omega Polar C18色譜柱(2.1 mm×50 mm×3 μm，Phenomenex公司)；BSA224S 電子天平(感量0.000 1 g，德國賽多利斯集團(tuán))；OHAUS SPS202F型電子天平(感量0.01 g，奧豪斯儀器常州有限公司)；TYZD-IIA振蕩器(姜堰市天儀電子儀器有限公司)；Eppendorf Centrifuge 5430R 高速冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf公司)；MX-S可調(diào)式混勻儀(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；SK1200H超聲清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

氟嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(純度99.9%，Dr. Ehrenstorfer GmbH公司)；色譜純乙腈(德國Merck公司)；色譜純甲酸(Anaqua Chemicals Supply公司)；分析純氯化鈉和分析純MgSO4(天津大茂化學(xué)試劑廠)；飲用純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)；凈化填料石墨化碳黑(PC)和Cleanert MAS-QuEChERS凈化管(MS-9PP0250，C18 50 mg，PSA 50 mg，PC 50 mg，MgSO4150 mg)均購自天津博納艾杰爾科技有限公司。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取氟嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)0.010 1 g(純度為99.9%)，用乙腈定容至10.00 mL，得到濃度為1.01×103mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用乙腈逐級稀釋氟嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液得到的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

稱取水稻植株樣品5.00 g(樣品制備：用剪刀或其他工具將水稻植株樣品剪成1 cm以下的小段)，置于50.0 mL PPTE離心管中，加入飲用純凈水5.000 mL，渦旋30 s后，加入20.00 mL色譜純乙腈，振蕩30 min，加入3.00 g 氯化鈉，渦旋30 s，在7 500 r·min-1轉(zhuǎn)速下離心10 min，取上清液置于Cleanert MAS-QuEChERS凈化管中，渦旋30 s，在4 000 r·min-1轉(zhuǎn)速下離心10 min，取上清液0.500 mL置于刻度管中，再加入0.500 mL色譜純乙腈，混勻后過0.22 μm濾膜，待檢測。

1.3.2 檢測條件

液相條件。色譜柱：Omega Polar C18(2.1 mm×50 mm×3 μm，Phenomenex公司)；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液和乙腈梯度洗脫(表1)；流速為0.25 mL·min-1；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣體積2.00 μL；峰面積外標(biāo)法定量。

表1 高效液相色譜梯度洗脫參數(shù)

質(zhì)譜條件。毛細(xì)管電壓5.5 kV，氣簾氣35 psi，噴撞氣7 psi，噴霧氣50 psi，輔助加熱氣50 psi，離子源溫度550 ℃，Q0入口電壓10 V，碰撞池出口電壓16 V。定性、定量模式均為MRM多反應(yīng)監(jiān)測模式，電離方式為ESI+。氟嘧菌酯的其余質(zhì)譜檢測參數(shù)見表2。

表2 氟嘧菌酯質(zhì)譜檢測參數(shù)

1.3.3 添加回收試驗(yàn)

在水稻植株空白樣品中添加氟嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平為0.01、0.50、2.00和10.10 mg·kg-1，每個(gè)水平重復(fù)5次，按本研究建立的方法進(jìn)行樣品前處理和儀器分析，分別計(jì)算平均添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

考察乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸+2 mmol·L-1乙酸銨水溶液、乙腈-2 mmol·L-1乙酸銨水溶液以及甲醇-0.1%甲酸水等流動(dòng)相對氟嘧菌酯的色譜峰形和響應(yīng)值的影響。最終確定流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，在該流動(dòng)相體系下，色譜峰形相對較好且穩(wěn)定，并優(yōu)化了流動(dòng)相梯度。

2.2 凈化方法的確定

因水稻植株的提取液中色素含量較多，故選擇包含MgSO4、PSA、PC、C18填料的凈化管對提取液進(jìn)行凈化。主要對比在C18、PSA和無水MgSO4用量分別為50、50、150 mg的條件下不同用量的PC對添加回收率的影響發(fā)現(xiàn)，PC對氟嘧菌酯的添加回收率影響不大，因此，選擇Cleanert MAS-QuEChERS凈化管(MS-9PP0250，C18 50 mg，PSA 50 mg，PC 50 mg，MgSO4150 mg)用于樣品前處理，色素去除效果較好。

2.3 方法的線性范圍

將0.000 5、0.001 0、0.005 0、0.010 0和0.050 0 mg·L-1的氟嘧菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述儀器測定條件測定并以峰面積-質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)最小二乘法擬合得到回歸方程為y=31 968 438x-5 118(R2=0.999 9)，表明氟嘧菌酯在此濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.4 方法的準(zhǔn)確度、精密度和定量限

在不含氟嘧菌酯的空白水稻植株樣品中，通過添加回收試驗(yàn)，考察了方法的準(zhǔn)確度和精密度(n=5)。

表3表明，氟嘧菌酯在0.01、0.50、2.00和10.10 mg·kg-1添加水平下，平均回收率在93.2%～120.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.59%～2.67%，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。根據(jù)添加回收確定氟嘧菌酯的定量限(LOQ)為0.010 0 mg·kg-1。

表3 氟嘧菌酯的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.5 樣品檢測

為保證評價(jià)方法的可行性，本試驗(yàn)抽取水稻農(nóng)藥田間試驗(yàn)采集的29個(gè)樣品進(jìn)行檢測。共有25個(gè)樣品檢出氟嘧菌酯，含量在0.02～6.91 mg·kg-1。該結(jié)果表明，本研究所建立的QuEChERs-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測技術(shù)適合水稻植株中氟嘧菌酯殘留量的測定。

3 小結(jié)

建立了水稻植株中氟嘧菌酯的QuEChERs-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，樣品用乙腈提取，Cleanert MAS-QuEChERS凈化管凈化，該方法簡單、快速、高效、靈敏，檢出限最低達(dá)0.010 0 mg·kg-1，能夠滿足氟嘧菌酯殘留量的檢測要求，能夠?yàn)樗局蟹拙サ臍埩魟?dòng)態(tài)及分布研究提供參考依據(jù)，同時(shí)也能為氟嘧菌酯在其他農(nóng)產(chǎn)品中的殘留量檢測提供一定的參考。