唐天龍

（鄭州工程技術(shù)學(xué)院，河南 鄭州 450044）

食用真菌在我國分布廣泛，其栽培和食用歷史長達(dá)數(shù)千年。食用真菌具有較高的食用價(jià)值，不僅可以提供人體所需的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素以及各種礦物質(zhì)以外，其自身的鮮美口感也廣受食用者的好評[1]。此外，近年來食用真菌的藥用價(jià)值也不斷被挖掘，其糖蛋白、萜類物質(zhì)、黃酮、多酚等物質(zhì)對人體抗氧化性能以及免疫功能均具有良好影響[2]。巴楚蘑菇，學(xué)名裂蓋馬鞍菌（Helvella leucopus），屬子囊菌綱（Ascomycetes）馬鞍菌科（Helvella），其菌蓋直徑一般為3 cm ～ 6 cm，常帶有馬鞍狀裂紋，部分黑色表面帶有明顯絨毛，因?yàn)槠淇梢匀斯ゐB(yǎng)殖，所以具有很高的醫(yī)用和食用價(jià)值[3]。巴楚蘑菇的維生素含量極其豐富，尤其是維生素B1含量遠(yuǎn)高于一般的食用菌類。有關(guān)生物學(xué)家對其研究結(jié)果表明，巴楚蘑菇含有較多種類的多糖[4]。多糖的組成形式多樣，結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，目前尚沒有辦法對其性能進(jìn)行完全準(zhǔn)確的概括，已知的多糖成分已經(jīng)被證實(shí)具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、降血糖、抗病毒等作用[5]。巴楚蘑菇內(nèi)的多糖，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究和藥物提取工作中具有研究價(jià)值。通過醫(yī)學(xué)生物體內(nèi)試驗(yàn)研究可以得出結(jié)論，巴楚蘑菇多糖提取物可以有效提高生物中性粒細(xì)胞自身的外界吞噬力以及免疫淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)換率[6]，這說明巴楚蘑菇對生物體內(nèi)的免疫功能有較大影響。為了探究巴楚蘑菇多糖成分的功能，試驗(yàn)以小鼠抗氧化和免疫能力為分析目標(biāo)，進(jìn)行巴楚蘑菇影響性分析。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

二硝基氟苯試劑、甲醇試劑、溶菌酶試劑盒、總抗氧化能力試劑盒、超氧化酶試劑盒和丙二醛測定試劑盒，均購自中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司；試劑盒，購自南京生物工程研究所。試驗(yàn)用巴楚蘑菇2019年購自新疆巴楚縣，在40℃條件下烘干，并用粉碎機(jī)打粉過篩，篩孔為40目。將石油醚按照4∶1的比例填入巴楚蘑菇粉中進(jìn)行脫脂，靜置一天一夜后再次烘干，備用[7]。

1.2 試驗(yàn)對象培育和分組

試驗(yàn)采用單因子隨機(jī)法設(shè)計(jì)，將60只1日齡的試驗(yàn)小鼠隨機(jī)劃分3個(gè)組，即對照組、少劑量組和多劑量組，每組小鼠數(shù)量為20只。其中對照組小鼠喂基礎(chǔ)培育飼料和水，少劑量組和多劑量組在基礎(chǔ)營養(yǎng)飼料和水的基礎(chǔ)上，分別添加上述制備的巴楚蘑菇粉。少劑量組巴楚蘑菇粉添加量為2 g，多劑量組為6 g。3組初始小鼠重量均為1.5 g左右，為了減輕體質(zhì)因素對試驗(yàn)影響性分析的誤差，3組進(jìn)行統(tǒng)一培育。

培育共分為2個(gè)階段，育雛期為1日～ 10日齡，育成期為10日～ 25日齡。培育前需要對小鼠嚴(yán)格消毒，采用4層立體籠式培養(yǎng)。每日保證小鼠生長所需的飲食采水量，舍內(nèi)溫度、濕度光照環(huán)境完全一致且嚴(yán)格按照培養(yǎng)要求進(jìn)行。育雛期需要進(jìn)行人工輔助保溫，分別在3日齡、7日齡和10日齡時(shí)接種新城疫IV系列疫苗。培育飼料成分和含量見表1。

表1 小鼠基礎(chǔ)營養(yǎng)飼料組成及營養(yǎng)成分表Tab.1 Basic nutritional feed composition and nutrient composition of mice

按表1配制的基礎(chǔ)飼料， 含有代謝能11.50 J·mol-1、粗蛋白 24.10 J·mol-1、鈣 0.82 J·mol-1、有效磷 0.57 J·mol-1、氨基酸 0.60 J·mol-1、賴氨酸 0.35 J·mol-1。

1.3 培育試驗(yàn)生產(chǎn)性能

試驗(yàn)前需要將所有試驗(yàn)小鼠單獨(dú)稱重，計(jì)算平均初始體重。培育期間觀測記錄對照組、少劑量組、多劑量組試驗(yàn)小鼠的生理和精神狀況。每天記錄小鼠進(jìn)食前后體重，并記錄固定時(shí)間間隔下的階段采食量、增重變化規(guī)律以及飼料轉(zhuǎn)化規(guī)律（FCR）。

1.4 試驗(yàn)結(jié)果處理

試驗(yàn)結(jié)果采集數(shù)據(jù)采用TPSS 13.54軟件進(jìn)行差異性顯著特征分析。當(dāng)P＜0.05時(shí)差異。最終試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾腺和法氏囊包括肝臟是鼠類重要的免疫器官，也是免疫細(xì)胞形成、分化以及生成的最重要場所，其生長發(fā)育與當(dāng)前基體免疫功能具有直接關(guān)聯(lián)。免疫器官指數(shù)測定選擇第25天，從3個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)抽取12只體重相近的試驗(yàn)小鼠（每組4只），空腹15 h后開始進(jìn)行心臟采血、血清分離。隨后進(jìn)行生物解剖， 摘取小鼠的肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺進(jìn)行稱重， 計(jì)算免疫器官指數(shù)，公式（T）為：

式中：n為小鼠免疫器官重量，g為小鼠解剖前活體重量。

對照組、少劑量組、多劑量組之間的對比結(jié)果，見表2。

由表2可知，劑量組小鼠胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)顯著提高（P＜0.05），且多計(jì)量組的影響程度明顯大于少劑量組。而劑量組與對照組相比，對肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)整體影響不大。因此，添加適量的巴楚蘑菇粉，可以提高小鼠免疫器官胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)，增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答。不同育齡期的小鼠和各自的對照組相比，均可以明顯提高胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)。說明巴楚蘑菇多糖成分對免疫器官的生長和發(fā)育具有明顯的促進(jìn)作用，且對免疫功能具有一定影響。

表2 小鼠免疫器官指數(shù)Tab.2 Index of mice immune organs

2.2 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠新城疫HV抗體效應(yīng)影響

新城疫抗體效應(yīng)的評價(jià)測定，需要在小鼠培育期的25 d，從3個(gè)試驗(yàn)組抽取15只試驗(yàn)小鼠（每組5只）進(jìn)行心臟采血（1 mL）。在常規(guī)室溫下靜置30 min析出血清后，收集血清，用β微量法檢測血清中的新城疫HV抗體。檢測過程中，需要進(jìn)行樣品血凝抑制試驗(yàn)，以驗(yàn)小鼠對新城疫的抗體效應(yīng)。在96孔的微量凝血面板上順次添加無菌生理鹽水，每排首個(gè)凝血孔加入小鼠血清，向后依次按照1∶3的比例稀釋，直到第12孔。向每孔填入抗原，在微量振蕩器上混蕩后，放入溫箱靜置20 min，待對照孔紅細(xì)胞沉淀后判定結(jié)果。結(jié)果判定時(shí)，檢測孔內(nèi)紅細(xì)胞需要呈網(wǎng)狀凝劑，孔底出現(xiàn)圓點(diǎn)狀沉淀物。以100%的凝集抗原處，以最大稀釋孔作為原血凝價(jià)，也就是單位凝集；從該孔前移2孔的抗原稀疏度作為最終4單位的抗原稀釋度，結(jié)果見表3。

表3 多糖成分對新城疫抗體效應(yīng)影響Tab.3 Effect of polysaccharide components on newcastle disease antibody

由表3可知，添加一定量的巴楚蘑菇粉，可以有效提高小鼠新城疫HV抗體效應(yīng)評價(jià)。新城疫HV抗體影響評價(jià)也是反映機(jī)體免疫應(yīng)答的常用評價(jià)指標(biāo)。巴楚蘑菇粉的添加量與小鼠新城疫抗體效應(yīng)存在正相關(guān)，多劑量組的增強(qiáng)幅度明顯高于少劑量組。

2.3 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠PHA有效誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)趾皮膚厚度的影響

通過對巴楚蘑菇多糖成分對小鼠PHA有效誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)趾皮膚厚度的影響的具體研究好分析結(jié)果，見表4。

表4 多糖成分對小鼠趾皮膚厚度影響Tab.4 Effects of polysaccharide components on toe skin thickness in mice

由表4可知，少劑量組和多劑量組對小鼠的PHA誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)明顯更強(qiáng)，其中多劑量組的反應(yīng)差異更為明顯。由此可以推測，巴楚蘑菇的多糖成分是T淋巴細(xì)胞的促增長因子，可以刺激T淋巴細(xì)胞的增殖分化，引起小鼠皮膚外部的腫脹刺激。其腫脹程度與當(dāng)前小鼠的免疫強(qiáng)度成正比例關(guān)系。因此，小鼠PHA有效誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)趾皮膚厚度可以在一定程度上判定小鼠免疫淋巴細(xì)胞功能，代表小鼠當(dāng)前機(jī)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)。試驗(yàn)中添加巴楚蘑菇的小鼠趾皮膚厚度增加，表明其可以通過促進(jìn)小數(shù)據(jù)T淋巴細(xì)胞的生殖速率，提高小數(shù)據(jù)細(xì)胞免疫反應(yīng)，進(jìn)而提高小鼠的免疫功能。

2.4 巴楚蘑菇多糖成分對小鼠抗氧化能力的影響

生物機(jī)體抗氧化能力與身體健康具有重要關(guān)聯(lián)。當(dāng)抗氧化能力降低時(shí)，生物機(jī)體容易引起炎癥、免疫系統(tǒng)疾病。超氧化歧化酶（SOD）對細(xì)胞氧化還原和抗氧化能力具有重要的平衡作用，它能有效殺滅生物機(jī)體中的有氧陰離子，保護(hù)細(xì)胞自由基不會受到損傷。此外，SOD在生物體中還能作為自由基清除酶，提高機(jī)體活力。其活性的實(shí)際值可以間接反映出當(dāng)前機(jī)體對體內(nèi)有氧自由基的清除能力。丙二醛（MDA）是機(jī)體脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一，測定其具體含量可以反映出當(dāng)前機(jī)體脂質(zhì)的過氧化程度，間接評價(jià)當(dāng)前細(xì)胞活力和損傷程度。巴楚蘑菇多糖成分是生物機(jī)體內(nèi)源性抗損傷重要營養(yǎng)元素，可以有效清除機(jī)體有氧自由基和脂質(zhì)過氧化， 因此對于抗氧化能力T-AOC、SOD、MDA指標(biāo)檢測，可以充分反映出當(dāng)前機(jī)體抗氧化能力的整體效應(yīng)增減。

按照2.2中血清培育方法重新提取小鼠血清，利用總抗氧化能力試劑盒、超氧化酶試劑盒和丙二醛測定試劑盒檢測3組小鼠血清樣本的（T-AOC）和（SOD）的活性指數(shù)以及（MDA）的具體含量。 研究在不同項(xiàng)目情況下，3個(gè)試驗(yàn)組的具體數(shù)據(jù)，見表5。

表5 多糖成分對小鼠航氧化能力的影響Tab.5 Effects of polysaccharide components on aero-oxidation ability of mice

由表5可知，添加一定量的巴楚蘑菇粉，可以有效增加不同育齡小鼠血清中SOD活力值。有效降低小鼠體內(nèi)血液中MDA的產(chǎn)生，有效提高其抗氧化能力。此外隨著巴楚蘑菇多糖成分劑量的上升，T-AOC和SOD活性提高幅度明顯加劇，說明該影響性具有遞增效應(yīng)，MDA量也在不斷遞減，證明其脂質(zhì)過氧化作用逐漸衰弱。綜上所述，巴楚蘑菇多糖成分可以有效提高試驗(yàn)小鼠抗氧化能力，對小鼠免疫能力具有間接性的影響。

3 結(jié)語

免疫功能是生物機(jī)體生存發(fā)展的重要保障，經(jīng)過試驗(yàn)，巴楚蘑菇粉對機(jī)體新城疫HV抗體有效性具有正向影響，證明其對生物免疫機(jī)體具有正向調(diào)節(jié)作用。巴楚蘑菇粉可以通過提高淋巴細(xì)胞的繁殖能力，促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞免疫功能，抑制MDA值的擴(kuò)大，提高機(jī)體超氧化歧化酶活性和丙二醛活性，提高機(jī)體抗氧化能力。綜上所述，可以推測巴楚蘑菇中的多糖成分對生物體免疫器官具有重要的促進(jìn)作用。