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        羊肚菌對體力疲勞小鼠生理學功效恢復(fù)方法

        2019-11-08 12:18:02徐景鋒
        中國食用菌 2019年10期
        關(guān)鍵詞:破膜羊肚糖原

        徐景鋒

        (東華理工大學 體育學院,江西 南昌 330017)

        軀體性疲勞又稱體力疲勞,當機體勞動時間較長、體力勞動過程較復(fù)雜時,體內(nèi)積累大量代謝物質(zhì),使機體組織細胞和神經(jīng)系統(tǒng)受到刺激,出現(xiàn)疲憊感。從生理學功效角度恢復(fù)機體體力疲勞,就要減少感覺疲勞[1]。

        野生食用菌是一種藥食兼用真菌,其中羊肚菌具有較為豐富的營養(yǎng)和藥用價值,包括抗輻射、抗衰老、抗菌、抗病毒和增強機體免疫力等,被廣泛應(yīng)用在現(xiàn)代醫(yī)學中[2]?,F(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn),羊肚菌中具有較多功能成分,例如糖類、核苷類、生物堿類和呋喃衍生物等成分,這些成分能夠改善機體免疫力,促進機體健康[3]。通過研究羊肚菌對體力疲勞小鼠生理學功效恢復(fù)方法,為野生食用菌的進一步開發(fā)利用提供物質(zhì)保障。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 原料

        在貴州偏遠山區(qū)中采取少量羊肚菌,烘干粉碎,經(jīng)過熱水抽提,在羊肚菌含量2000 mg·kg-1、時間15 min的環(huán)境下進行離心操作。收集羊肚菌上清液,繼續(xù)熬煮剩余羊肚菌液體,不斷提取羊肚菌上清液,合并一起,冷卻。4倍體積預(yù)冷處理95%乙醇,加入羊肚菌上清液中,經(jīng)過24 h離心處理,除去羊肚菌液體中乙醇,對羊肚菌液體進行干燥處理。配制不同劑量的羊肚菌液體,將獲取的羊肚菌液體消毒殺菌、備用[4]。

        1.1.2 試驗動物

        在上海斯萊克實驗動物有限公司購買雄性健康小鼠,身體重量在15 g~17 g,可自由攝食飲水,將購買的小鼠分成試驗組和對照組,試驗組按照羊肚菌劑量大小分為多組,包括400 mg·kg-1、800 mg·kg-1等,每組小鼠數(shù)量為10只。

        1.2 方法

        1.2.1 試驗前準備

        先訓練小鼠2次,使小鼠處于疲憊狀態(tài),讓小鼠正式游泳,最后1次訓練時喂給小鼠羊肚菌液體,小鼠尾部放置5%體重鉛皮,30 min后,將小鼠放置到購買的游泳箱中,此時游泳箱的水溫應(yīng)在25℃左右,上下浮動不超過0.5℃,游泳箱的水深為30 cm,觀察記錄小鼠游泳狀態(tài)[5]。

        1.2.2 肝糖原和肌糖原測定

        主要采用蒽酮法測定小鼠體內(nèi)肝糖原、肌糖原含量,如上文所說訓練后,將小鼠解剖取出肝臟,用生理鹽水漂洗干凈,通過濾紙吸取小鼠肝臟表面水分,吸干后,稱量250 mg肝組織,將肝臟搗碎勻漿處理[6],倒入離心管里,以3500 r·min-1的速度離心處理15 min后,提取450 μ L上清液,采用濃度為95%的乙醇5 mL加入到上清液中,充分混合均勻兩種液體,直至兩種液體間沒有明顯分層,將無明顯分層的液體放置到冰箱中,在5℃的環(huán)境下靜置1 d,第2天將液體以3500 r·min-1的速度離心處理15 min,濾去上清液,將試管倒置晾干,靜置約10 min,肝糖原中加入1 mL純化水。選用另一個試管,加入100μL純化水,將該試管當成試劑空白,在兩個試管中分別添加10 mL蒽酮試劑,將加入蒽酮試劑后的試管煮沸,大約為15 min,煮沸后將試管取出,冷卻試管中液體溫度到室溫。通過分光光度計采用640 nm波長比色測定試驗的小鼠肝糖原和肌糖原。重復(fù)上述步驟,從小鼠肌肉中獲取肌糖原,肝糖原和肌糖原計算公式為:

        式中:YG0為肝糖原樣品管吸光度;BG0為肝糖原標準管吸光度;H為肝組織樣品重量;D為葡萄糖標準液濃度;V1為肝糖原提取液體積;V2為肝糖原測定液體積;V3為葡萄糖標準液體積。YG1為肌糖原樣品管吸光度;BG1為肌糖原標準管吸光度;h為肌肉組織樣品重量;v1為肌糖原提取液體積;v2為原測定液體積。

        1.2.3 血乳酸測定

        如上文所說訓練后,在小鼠眼眶處采血20 μ L放入試管中,在試管中滴入破膜液45μ L,振蕩試管,使血液和破膜液混合均勻。將小鼠放置到游泳箱中,讓小鼠在游泳箱中游泳10 min,游泳箱溫度選取為30℃,溫度上下波動范圍不超過0.5℃,對小鼠進行采血,采血容量為20 μ L,在試管中滴入破膜液45 μ L,震蕩試管,使血液和破膜液混合均勻。讓小鼠休息20 min后,對小鼠進行采血,采血容量為20 μ L,在試管中滴入破膜液45 μ L,振蕩試管,使血液和破膜液混合均勻。通過手持式乳酸儀檢測樣品中的乳酸值,血乳酸值是根據(jù)乳酸值乘以3得來的,小鼠內(nèi)血乳酸變化值公式為:

        式中:S為血乳酸曲線面積;AX為安靜血乳酸值;YX0為小鼠無運動狀況下的血乳酸值;YX1為小鼠運動20 min后的血乳酸值。

        統(tǒng)計所測量的數(shù)據(jù),如果試驗組小鼠血乳酸曲線面積比對照組小鼠血乳酸曲線面積小,且數(shù)據(jù)間存在統(tǒng)計學差異,則認為羊肚菌液體能抑制小鼠運動后小鼠體內(nèi)血乳酸生成,羊肚菌具有恢復(fù)體力疲勞小鼠體力的生理學功效。

        2 結(jié)果

        2.1 測定小鼠肝糖原與羊肚菌劑量間的關(guān)系

        運動時機體的重要供能物質(zhì)是肝糖原,通過檢測機體中肝糖原含量可知小鼠疲勞程度。檢測不同劑量羊肚菌對小鼠肝糖原含量的影響。檢測結(jié)果如表1所示。

        表1 不同劑量羊肚菌對小鼠肝糖原、肌糖原含量的影響Tab.1 Effect of different doses of Morchella on hepatic glycogen and muscle glycogen content in mice

        表1看出,對照組的肝糖原含量為(19.21±5.12)mg·g-1,肌糖原含量為 (0.58±0.07) mg·g-1。隨著羊肚菌劑量的增加,肝糖原和肌糖原含量逐漸增加,當羊肚菌劑量為1600 mg·g-1時肝糖原和肌糖原含量最多,為(34.98±9.51) mg·g-1和(0.96±0.23) mg·g-1。當小鼠處于相同運動狀況下,攝入羊肚菌的小鼠體內(nèi)的肝糖原和肌糖原儲備含量增加,可增強小鼠運動能力,降低小鼠疲勞程度。

        2.2 測定小鼠血乳酸與羊肚菌劑量間的關(guān)系

        羊肚菌對小鼠血乳酸測定結(jié)果,見表2。

        表2 不同劑量羊肚菌對小鼠血乳酸影響Tab.2 Effect of different doses of morel on blood lactate in mice

        從表2可以看出,與對照組小鼠血乳酸含量相比,在喂食小鼠不同劑量羊肚菌情況下,小鼠內(nèi)部血乳酸含量明顯降低,且隨著羊肚菌劑量的不斷增加,血乳酸曲線面積逐漸減少,當羊肚菌劑量為1600 mg·kg-1時,小鼠體內(nèi)血乳酸曲線面積最低,為(94.56±21.68) mm2。綜上所述,不同劑量羊肚菌可有效減少機體內(nèi)部能量的分解代謝,肌肉的運動能力得以提升,降低小鼠體力疲勞程度,其中較高劑量的羊肚菌恢復(fù)小鼠體力效果較好。

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