聶秀美，趙桂琴，蘭曉君，柴繼寬，劉 歡，金小雯，吳文斌, 藺豆豆

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅省草業(yè)工程實(shí)驗(yàn)室，中-美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州730070)

燕麥(Avenasativa)是禾本科(Gramineae)燕麥屬(Avena)一年生糧飼兼用作物，主要分布在我國(guó)內(nèi)蒙古、河北、甘肅和山西等地[1]。燕麥種子中淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量都比較高，是家畜的優(yōu)質(zhì)精飼料[2-3]，還富含可溶性膳食纖維、維生素、亞油酸、葡聚糖等多種營(yíng)養(yǎng)成分，具有調(diào)節(jié)血脂、延緩衰老、降低膽固醇以及促進(jìn)傷口愈合等功效，具有較高的保健價(jià)值[4-5]。

作為植物的繁殖器官和農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)的基礎(chǔ)資料，種子健康是提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)的前提，也是種質(zhì)安全保存的首要條件[6]，但田間收獲貯藏的種子通常攜帶大量的真菌，這些真菌吸附于種子表面或侵入組織內(nèi)部，是許多病害的初侵染源，是病害遠(yuǎn)距離傳播的主要媒介和攜帶者[7]。種子帶菌不僅會(huì)影響種子的萌發(fā)、幼苗的健康生長(zhǎng)，還會(huì)降低種子品質(zhì)、縮短種子壽命，最終導(dǎo)致作物質(zhì)量和產(chǎn)量降低，造成經(jīng)濟(jì)損失[8]。此外，種子在貯藏過(guò)程中某些產(chǎn)毒病原真菌還會(huì)分泌真菌毒素，嚴(yán)重影響產(chǎn)品安全，對(duì)人畜健康造成極大威脅[9-10]。

近年來(lái)，隨著我國(guó)草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，燕麥的種植面積不斷擴(kuò)大，種子的需求量逐漸增加，異地調(diào)種日益頻繁，增大了病原菌傳播的風(fēng)險(xiǎn)。燕麥種帶真菌是病害在時(shí)間和空間上傳播的主要途徑之一，也是其種子安全保存的重大隱患之一。目前，我國(guó)對(duì)種帶真菌的研究主要集中在水稻(Oryzasativa)[11-12]、玉米(Zeamay)[13]、小麥(Triticumaestivum)[14-15]等經(jīng)濟(jì)作物方面，對(duì)燕麥種子帶菌情況的報(bào)道較少，僅見(jiàn)荊卓瓊等[16]采用平板培養(yǎng)法對(duì)甘肅省4個(gè)燕麥種子樣本的種帶真菌進(jìn)行檢測(cè)，依據(jù)真菌形態(tài)特征鑒定出19個(gè)屬，其中鏈格孢屬(Alternariasp.)為優(yōu)勢(shì)菌，檢出率達(dá)38%～98%；馬從[17]通過(guò)平板培養(yǎng)法和形態(tài)學(xué)鑒定從燕麥種子中分離鑒定出6屬21種真菌，主要為青霉菌屬(Penicilliumsp.)和鐮刀菌屬(Fusariumsp.)。由于不同生產(chǎn)區(qū)域的環(huán)境因子(主要是氣候條件和栽培制度)不同，因此，真菌種類(lèi)和數(shù)量有很大差異，種子帶菌情況也會(huì)隨之變化。如劉志勇[18]對(duì)黑龍江省10個(gè)不同地區(qū)大豆(Glycinemax)品種的帶菌情況進(jìn)行研究表明，不同地區(qū)大豆品種間的帶菌率為2%～26%，且不同地區(qū)的優(yōu)勢(shì)菌和分離率差異較大。高晨軒[19]表明垂穗披堿草(Elymusnutans)種子的帶菌率和種帶真菌的多樣性與環(huán)境因子(主要是海拔、年均氣溫、年降雨量和經(jīng)緯度等)相關(guān)性較大，優(yōu)勢(shì)屬為鐮刀菌屬和鏈格孢屬，在各采樣點(diǎn)均檢出，分離率較高；其它屬為常見(jiàn)屬或稀有屬，分離率較低。而目前有關(guān)產(chǎn)地對(duì)燕麥種子種帶真菌影響方面還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究擬對(duì)我國(guó)河北省張北縣張北鎮(zhèn)和甘肅省通渭縣華家?guī)X鎮(zhèn)兩大燕麥主栽培區(qū)的相同燕麥品種的種帶真菌進(jìn)行分離和鑒定，旨在明確其攜帶真菌所屬種類(lèi)以及產(chǎn)地對(duì)燕麥種子帶菌情況的影響，為燕麥種子的健康保存提供理論依據(jù)，為燕麥種傳病害的防治奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)于2017年10月在甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，供試材料為2015年9月在甘肅省通渭縣華家?guī)X鎮(zhèn)和河北省張北縣張北鎮(zhèn)收獲后保存于當(dāng)?shù)匮帑湻N子庫(kù)的裸燕麥‘壩莜3號(hào)’和‘壩莜9號(hào)’，種子貯藏期間的概況見(jiàn)表1。

表1 供試燕麥種子及其產(chǎn)地概況

1.2 種帶真菌的分離培養(yǎng)

每份種子樣品隨機(jī)取200粒種子，其中100粒等距離放置于90 mm的馬鈴薯葡萄糖瓊脂(Potato dextrose agar，PDA) 培養(yǎng)基(馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉15 g，蒸餾水1000 mL，含硫酸鏈霉素、卡那霉素各100 mg·L-1)上，每皿5粒，5皿為1重復(fù)，共4次重復(fù)，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)。另100粒種子經(jīng)75%酒精浸泡消毒1 min，再用1%次氯酸鈉消毒2 min，用無(wú)菌水充分洗滌3～5次，用滅菌濾紙吸干種子表面的水分后按上述條件培養(yǎng)。每天進(jìn)行觀察，及時(shí)挑取菌絲至新鮮PDA培養(yǎng)基上分離純化。待不再有新的菌落出現(xiàn)時(shí)，統(tǒng)計(jì)帶菌種子數(shù)和帶某種真菌種子數(shù)，并參照徐秀蘭等[20]的方法計(jì)算種子帶菌率和某菌分離率：

帶菌率(%)=(帶菌種子數(shù)/檢測(cè)種子總數(shù))×100；

某菌分離率(%)=(帶某種菌的種子數(shù)/帶菌種子總數(shù))×100。

1.3 種帶真菌的形態(tài)鑒定

將純化后的真菌在新鮮PDA平板上25℃黑暗培養(yǎng)7 d后，參照《植物病原真菌學(xué)》[21]和《真菌分類(lèi)學(xué)》[22]，在顯微鏡下觀察菌落和分生孢子的形狀、顏色和大小等形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行初步鑒定。

1.4 種帶真菌的分子生物學(xué)鑒定

1.4.1種帶真菌的DNA提取 分離純化的真菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)7 d左右，采用真菌基因組Omega試劑盒提取菌株DNA。具體步驟為：取約0.1 g新鮮菌絲加入液氮充分碾磨后迅速轉(zhuǎn)移到2 mL離心管中，并立即加入500 μL裂解液CPL和10 μL 2-巰基乙醇，經(jīng)渦旋振蕩混勻后65℃下水浴15 min；加入500 μL氯仿/異戊醇(24∶1)充分混勻后在12000 r·min-1下離心5 min；取上清液300 μL于新的離心管中，加入150 μL洗脫緩沖液CXD和300 μL無(wú)水乙醇，混勻后轉(zhuǎn)入帶有吸附柱的收集管中，在12000 r·min-1下離心1 min，棄廢液；向吸附柱中加入650 μL漂洗液SPW于12 000 r·min-1離心1 min，棄廢液；重復(fù)上次步驟后于1 2000 r·min-1離心2 min，棄廢液；將吸附柱置于新的離心管中室溫靜置10 min至晾干；向吸附柱中間部位懸空滴加70 μL洗脫緩沖液Elution buffer，室溫靜置5 min后于12 000 r·min-1下離心2 min，收集到的提取液于—20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2種帶真菌的PCR擴(kuò)增和測(cè)序 利用真菌特異性引物對(duì)ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)進(jìn)行擴(kuò)增，其中PCR反應(yīng)體系為50 μL：2×Taq PCR Master Mix溶液25 μL，10 μmol· L-1引物各1 μL，模板5 μL，補(bǔ)充ddH2O至50 μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min；94℃變性30 s，52℃退火30 s，72℃延伸1 min，34個(gè)循環(huán)；72℃下延伸7 min。反應(yīng)完成后，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，點(diǎn)樣5 μL，用1×TAE電泳緩沖液在100 V的電場(chǎng)下電泳20 min左右，利用紫外凝膠成像儀觀察照相并分析，擴(kuò)增產(chǎn)物送至北京奧科鼎盛生物科技有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.4.3種帶真菌的序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建 測(cè)序結(jié)果經(jīng)DNASTAR軟件包中的SeqMan進(jìn)行校對(duì)拼接，BioEdit軟件對(duì)每個(gè)堿基進(jìn)行人工校對(duì)后，登錄NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast同源序列比對(duì)，并用Mega 7.0軟件中的鄰接法(Neighbor Joining，NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，進(jìn)行1000次重抽樣計(jì)算系統(tǒng)樹(shù)中節(jié)點(diǎn)的置信度。

2 結(jié)果與分析

2.1 產(chǎn)地對(duì)燕麥種子帶菌率的影響

通過(guò)對(duì)來(lái)自甘肅省通渭縣華家?guī)X鎮(zhèn)和河北省張北縣張北鎮(zhèn)的燕麥種子進(jìn)行真菌培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，兩地供試種樣的帶菌率存在明顯差異(表2)。不經(jīng)表面消毒的樣品帶菌率為85%～100%，甘肅華家?guī)X的樣品帶菌率相對(duì)較高，平均為98.50%；河北張北鎮(zhèn)的平均帶菌率為87.50%，兩者相差11%。經(jīng)表面消毒的種子帶菌率為7%～19%，其中甘肅華家?guī)X的平均帶菌率為16%，河北張北的為8%。另外，品種間差異也比較明顯，甘肅華家?guī)X的‘壩莜3號(hào)’消毒前后的帶菌率分別為97%和13%；河北張北的‘壩莜3號(hào)’消毒前帶菌率為85%，消毒后僅為7%?！畨屋?號(hào)’在甘肅華家?guī)X消毒前帶菌率高達(dá)100%，消毒后為19%；在河北張北消毒前后帶菌率分別為90%和9%。

2.2 燕麥種帶真菌的形態(tài)學(xué)觀察

分離純化的種帶真菌在PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d后，觀察和描述菌落形態(tài)和分生孢子形態(tài)特征，部分菌落和孢子形態(tài)如圖1所示。

表2 供試燕麥材料的帶菌率

蕓薹鏈格孢(Alternariabrassicae，圖1 A～C)菌落生長(zhǎng)速度較快，稍隆起，近似圓形，直徑約61 mm，表面絨狀，中間顏色較深，呈深褐色，邊緣整齊，呈淺褐色，具白色氣生菌絲，生長(zhǎng)稀疏，背面具有同心圓，中間黑褐色，邊緣黃褐色。分生孢子單生，倒梨形或倒棒狀，黃褐色，大小為(13.31～24.53)μm ×(3.43～10.65)μm，具橫膈膜3～10個(gè)，縱斜隔膜0～5個(gè)。

蘆竹節(jié)菱孢(Arthriniumarundinis，圖1 D～F)菌落生長(zhǎng)快速，平鋪，圓形，直徑約90 mm，表面絨毛狀或棉絮狀，呈白色，邊緣整齊，氣生菌絲濃密，背面白色。分生孢子單生或串生，球形或橢球形，黑褐色，大小為1.12～2.58 μm，無(wú)隔膜。

塔兵曲霉(Aspergillustubingensis，圖1 G～I(xiàn))菌落生長(zhǎng)速度較快，平鋪，近似圓形，直徑約65 mm，表面粉狀，邊緣整齊，整體呈黑褐色，邊緣具白色氣生菌絲，生長(zhǎng)稀疏，有放射狀紋理，背面米白色。分生孢子球形，黃褐色至黑褐色，大小為2.37～3.24 μm，無(wú)隔膜。

湯姆青霉(Penicilliumthomii，圖1 J～L)菌落生長(zhǎng)速度緩慢，均勻隆起，近似圓形，直徑約32 mm，表面粉狀，藍(lán)綠色，可泌出無(wú)色水滴，邊緣整齊，背面米白色。分生孢子球形，黃綠色或淺綠色，大小為2.42～3.02 μm，無(wú)隔膜。

2.3 燕麥種帶真菌的分子生物學(xué)鑒定

采用真菌rDNA通用擴(kuò)增引物ITS1和ITS4，對(duì)從燕麥種子分離獲得的具有形態(tài)差異的代表性菌株的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)圖譜(圖2)中可看到擴(kuò)增條帶清晰明亮、無(wú)拖尾和雜帶現(xiàn)象，各真菌擴(kuò)增出的目的片段長(zhǎng)度在500～750 bp，整體擴(kuò)增效果良好，符合測(cè)序要求。將測(cè)序結(jié)果在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST同源性比對(duì)表明，各被鑒定菌株與其對(duì)應(yīng)的比對(duì)菌株相似度均在98%以上。進(jìn)一步通過(guò)Clustal W軟件進(jìn)行堿基序列比對(duì)，并通過(guò)Mega 7.0軟件以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，如圖3所示，不同種的菌株位于不同的分支末端，單獨(dú)形成一支；除鏈格孢屬的細(xì)極鏈格孢(Alternariatenuissima)和鏈格二孢(Alternariarosae)未能與其它鏈格孢屬的菌株明顯聚為一支，其它同一個(gè)屬的菌株都聚在一個(gè)較大的分支。這些菌株被鑒定為13屬30種，其中鏈格孢屬8種，青霉菌屬6種，節(jié)凌孢屬(Arthriniumsp.)2種，曲霉菌屬(Aspergillussp.)3種，枝孢菌屬(Cladosporiumsp.)3種，德氏霉屬(Drechslerasp.)2種，附球菌屬(Epicoccumsp.)、根霉屬(Rhizopussp.)、毛霉屬(Mucorsp.)、棒囊殼菌屬(Corynascussp.)、鐮刀菌屬和色串孢屬(Torulasp.)各1種。

圖2 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)結(jié)果

2.4 產(chǎn)地對(duì)燕麥種子帶菌種類(lèi)和分離率的影響

不同來(lái)源的種子樣本所帶真菌的種類(lèi)和分離率差異較大(表3)，分離率介于0.15%～59.85%之間。從甘肅華家?guī)X和河北張北的種子樣本中分別檢測(cè)到11屬22種和11屬23種真菌，其中蔥鏈格孢菌(Alternariaporri，分離率8.05%)、蘆竹節(jié)菱孢(分離率4.02%)、凍土毛霉(Mucorhiemalis，分離率4.02%)、離生青霉(Penicilliumsolitum，分離率3.76%)、黑曲霉(Aspergillusniger，分離率1.15%)、多孢枝孢(Cladosporiumpseudocladosporioides，分離率0.75%)和枝孢菌(Cladosporiummichoacanense，分離率0.15%)7種真菌僅在甘肅華家?guī)X燕麥樣本中檢出。赤曲霉(Aspergillusruber，分離率11.11%)、鏈格孢菌(Alternariaslovaca，分離率6.06%)、藜生鏈格孢(Alternariachenopodiicola，分離率5.26%)、橘灰青霉(Penicillumaurantiogriseum，分離率3.97%)、棒囊殼菌(Corynascusverrucosus，分離率3.03%)、鏈格二孢(Alternariarosae，分離率1.59%)和昏暗色串孢(Torulacaligans，分離率0.79%)7種真菌僅在河北張北燕麥種子中檢出。兩個(gè)產(chǎn)地均能分離到的真菌有細(xì)交鏈孢(Alternariaalternate)、蕓薹鏈格孢、細(xì)極鏈格孢、蘋(píng)果鏈格孢(Alternariamali)、塔賓曲霉、芽枝狀枝孢(Cladosporiumcladosporioides)、燕麥內(nèi)臍蠕孢(Drechsleraavenae)、黑附球菌(Epicoccumnigum)、梨孢鐮刀菌(Fusariumpoae)、燕麥核腔菌(Pyrenophoraavenae)、金青霉(Penicilliumaurantiocandidum)、產(chǎn)黃青霉(Penicilliumchrysogenum)、波蘭青霉(Penicilliumpolonicum)、湯姆青霉和米根霉(Rhizopusoryzae)，其中甘肅華家?guī)X樣品中細(xì)交鏈孢的平均分離率最大，為40.05%；其次是芽枝狀枝孢(分離率21.36%)；枝孢菌的平均分離率最小，僅有0.04%。河北張北樣品中細(xì)交鏈孢的平均分離率也最高，為37.11%；其次是產(chǎn)黃青霉，分離率為13.45%；波蘭青霉的分離率最低為0.19%。

圖3 基于rDNA-ITS序列構(gòu)建的燕麥種帶真菌系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

另外，不經(jīng)表面消毒的樣品所攜帶的真菌共有12屬28種，分離率為0.15%～59.85%。其中細(xì)交鏈孢的平均分離率最大，為53.73%；其次是黑附球菌(分離率8.73%)、蕓薹鏈格孢菌(分離率7.54%)和芽枝狀枝孢(分離率5.09%)。與未經(jīng)表面消毒的材料相比，消毒處理后真菌的種類(lèi)和分離率存在明顯差異，共檢測(cè)出8屬12種，分離率為5.26%～38.46%，4份樣品中共同攜帶的真菌只有細(xì)交鏈孢，分離率最高為38.46%。經(jīng)表面消毒的種子攜帶的真菌除節(jié)菱孢菌(Arthriniumrasikravindrae，分離率15.79%)和藜生鏈格孢(分離率5.26%)外，均可以在未消毒種子上檢測(cè)到；而赤曲霉(分離率11.11%)、蔥鏈格孢菌(分離率8.05%)、鏈格孢菌(分離率6.06%)、蘆竹節(jié)菱孢(分離率4.02%)、凍土毛霉(分離率4.02%)、橘灰青霉(分離率3.97%)、離生青霉(分離率3.76%)、鏈格二孢(分離率1.59%)、黑曲霉(分離率1.15%)、昏暗色串孢(分離率0.79%)、多孢枝孢(分離率0.75%)和枝孢菌(分離率0.15%)僅存在于未消毒的種子中。

表3 燕麥種帶真菌種類(lèi)和分離率

注：B3G,B9G分別表示甘肅華家?guī)X的‘壩莜3號(hào)’、‘壩莜9號(hào)’，B3H、B9H分別表示河北張北的‘壩莜3號(hào)’、‘壩莜9號(hào)’

Note:B3G and B9G represent ‘Bayou No.3’ and ‘Bayou No.9’ from Huajialing Town of Gansu Province,B3H and B9H represent ‘Bayou No.3’ and ‘Bayou No.9’ from Zhangbei Town of Hebei Province,respectively

3 討論

本研究通過(guò)對(duì)來(lái)自甘肅省通渭縣華家?guī)X鎮(zhèn)和河北省張北縣張北鎮(zhèn)產(chǎn)區(qū)的燕麥品種進(jìn)行真菌培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地來(lái)源的燕麥種子帶菌率差異較大。甘肅華家?guī)X樣品消毒前后的帶菌率都高于相同處理下河北張北樣品的帶菌率，‘壩莜3號(hào)’在甘肅消毒前后的帶菌率分別高出河北11%和6%，‘壩莜9號(hào)’在甘肅消毒前后的帶菌率較河北均高出10%，這說(shuō)明不同真菌對(duì)燕麥種子的侵染能力不同，產(chǎn)地環(huán)境的差異可能是引起燕麥種子帶菌差異的關(guān)鍵因子。李春杰等[23]研究指出，不同產(chǎn)地種子收獲和貯藏期間的氣候條件是影響種子帶菌率高低的關(guān)鍵因素，濕潤(rùn)度越高，種子帶菌率越大。本研究中，種子貯藏期間甘肅通渭縣華家?guī)X鎮(zhèn)的年均降雨量(465 mm)和平均濕度(75.6%)明顯高于河北張北縣張北鎮(zhèn)(降雨量341 mm，濕度58.1%)，這為霉菌的滋生提供了有利條件，使得甘肅省燕麥種樣的帶菌率高于河北省。種子帶菌率高，不僅會(huì)致使種子生活力和貯藏壽命下降，還會(huì)對(duì)幼苗的萌發(fā)生長(zhǎng)等產(chǎn)生不同程度的影響[17]。因此，為降低真菌在種子貯藏期間的侵染和增殖，應(yīng)選擇在晴朗干燥的天氣快速收獲種子，及時(shí)進(jìn)行晾曬，在貯藏時(shí)注意通風(fēng)透氣，以保證種子的安全貯藏。

采用經(jīng)典形態(tài)學(xué)分類(lèi)法和rDNA-ITS序列分析法鑒定真菌種類(lèi)，不僅可以克服傳統(tǒng)分類(lèi)方法中真菌數(shù)量大、形態(tài)特征復(fù)雜和易受外界環(huán)境條件影響等不穩(wěn)定因素，還能避免因基因庫(kù)完善程度低、已知物種相似性序列數(shù)量少而得出假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，從而提高真菌分類(lèi)鑒定的準(zhǔn)確性[24-25]。因此，本研究對(duì)從燕麥種子中分離獲得的菌株通過(guò)形態(tài)學(xué)初步鑒定后，進(jìn)一步利用了rDNA-ITS序列分析法進(jìn)行分子鑒定，從參試材料中共檢測(cè)到13屬30種真菌，其中鏈格孢屬8種，青霉菌屬6種，曲霉屬和枝孢菌屬各3種，其它真菌屬1～2種，這說(shuō)明鏈格孢菌和青霉菌是燕麥種子貯藏期間的主要侵染菌，對(duì)當(dāng)?shù)刭A藏環(huán)境的生存能力較強(qiáng)。這跟已有的研究[26-27]結(jié)果相符，鏈格孢屬、青霉菌屬和曲霉屬等真菌是種子攜帶的主要真菌類(lèi)群，這些真菌在適宜的環(huán)境條件下，具有較強(qiáng)的孢子萌發(fā)能力和菌絲生長(zhǎng)能力。羅光明等[28]對(duì)不同產(chǎn)地來(lái)源的蔓荊子(Vitextrifoli)種子進(jìn)行帶菌研究表明，不同產(chǎn)地間種子攜帶的真菌種類(lèi)差異較大，曲霉屬在大多數(shù)產(chǎn)地的種子均可檢測(cè)到，鐮刀菌屬僅在山東省榮城市和威海市檢出，毛霉屬僅在江西省南昌市檢出。南志標(biāo)等[29]研究表明，沙打旺(Astragalusadsurgens)種子攜帶的優(yōu)勢(shì)菌為多主枝孢(Cladosporiumherbarum)，在7個(gè)產(chǎn)地的種子上均有發(fā)現(xiàn)；其次是細(xì)交鏈孢和匍柄霉(Stemphyliumbotryosum)，在大多數(shù)產(chǎn)地中均有檢出，而鐮刀菌、長(zhǎng)蠕孢(Helminthosporiumsp.)和莖點(diǎn)霉(Phomasp.)真菌僅能在某一地發(fā)現(xiàn)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地來(lái)源的燕麥帶菌種類(lèi)存在明顯差異，細(xì)交鏈孢、塔賓曲霉、黑附球菌和產(chǎn)黃青霉等真菌在2個(gè)產(chǎn)地均能分離到，而蔥鏈格孢菌、蘆竹節(jié)菱孢和黑曲霉等僅存在于甘肅燕麥樣本中；赤曲霉、棒囊殼菌和昏暗色串孢等僅在河北的燕麥樣本中檢出，這可能是因?yàn)椴煌婢鷮?duì)燕麥種子的侵染能力不同，而且不同產(chǎn)地間氣候因子間的差異也會(huì)影響真菌的存活力和繁殖率，進(jìn)而影響對(duì)種子的侵染。

先米西努爾·肉孜等[30]研究發(fā)現(xiàn)，苜蓿(Medicagosativa)種子未經(jīng)表面消毒時(shí)的帶菌率為13.50%～87.50%，而經(jīng)消毒后為3.50%～46.50%，且經(jīng)消毒處理后各種真菌的檢出率較未經(jīng)處理的種子顯著降低。趙輝等[31]研究表明，芝麻(Sesamumindicum)種子消毒前后的帶菌率和真菌檢出率也存在顯著差異，種子消毒前的帶菌率最高為40.70%，真菌分離率最高為87.50%；消毒后帶菌率最高為10.70%；真菌分離率最高是25%。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不進(jìn)行表面消毒處理的燕麥種子帶菌率可高達(dá)100%，而經(jīng)過(guò)表面消毒后種子帶菌率顯著降低(最高為19%)，這說(shuō)明表面消毒處理能夠抑制某些真菌的生長(zhǎng)，顯著減少種子的帶菌率。有研究[32-33]表明，未消毒的干種子含水量通常很低，不能滿(mǎn)足某些真菌的生長(zhǎng)條件，會(huì)影響某些真菌的檢出，本研究也證實(shí)了這一點(diǎn)，不經(jīng)表面消毒樣品攜帶的真菌有12屬28種，消毒樣品攜帶的真菌有8屬12種，其中消毒種子中攜帶的節(jié)菱孢菌和藜生鏈格孢沒(méi)有在未消毒種子上檢測(cè)到，這很可能跟這2種菌需要較多的水分才能生長(zhǎng)有關(guān)，因?qū)Σ幌镜难帑湼煞N子直接進(jìn)行帶菌檢測(cè)，會(huì)使一些對(duì)濕度要求較高的真菌不能很好地生長(zhǎng)。先米西努爾·肉孜等[34]研究表明，枝孢霉(Cladosporiumsp.)、粘鞭霉(Gliomastixmurorum)和簇孢匐柄霉(Atemphyliumbotryosum)等真菌僅在消毒種子上檢測(cè)到，而桃色擬青霉(Paecilomycespersicinus)、根腐離蠕孢(Bipolarissorokiniana)和高大毛殼(Chaetomiumelatum)等真菌在消毒處理的種子中未檢測(cè)。本研究中蔥鏈格孢、凍土毛霉和蘆竹節(jié)菱孢等菌種僅在未消毒的種子中分離到，推測(cè)可能與該類(lèi)菌對(duì)表面消毒劑次氯酸鈉比較敏感而失去活性有關(guān)。這與垂穗披堿草[19]種子和三葉草(Trifoliumsubterraneum)[35]種子的帶菌研究結(jié)果類(lèi)似，認(rèn)為種子經(jīng)次氯酸鈉表面消毒后會(huì)影響某些真菌的分離效果，降低分離真菌的多樣性。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，燕麥種子攜帶的真菌多為鏈格孢屬和青霉菌屬等腐生真菌。多數(shù)情況下，這些腐生菌可在潮濕的環(huán)境中迅速繁殖，甚至侵入種子內(nèi)部使種胚死亡，降低發(fā)芽率或造成出苗前的爛種和爛根[36-38]，而且大多數(shù)腐生菌的寄主范圍都非常廣泛，可以通過(guò)侵染田間雜草完成其生活史或者越冬，在適宜條件下發(fā)生病原菌的再次傳播，成為病害的初侵染源[39-41]。但種子在貯藏過(guò)程中所產(chǎn)生的腐生真菌并不都是致病菌，本文檢測(cè)到的種帶真菌是否具有致病性，還需要進(jìn)一步根據(jù)柯赫氏法則進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié)論

同一品種在不同產(chǎn)地的帶菌率、帶菌種類(lèi)和分離率差異顯著，不同品種在同一產(chǎn)地的帶菌情況也存在明顯差異，甘肅華家?guī)X燕麥種子消毒前后的帶菌率都較高于河北張北的種子，其中蔥鏈格孢、離生青霉和多孢枝孢等真菌僅在甘肅華家?guī)X種樣中檢出；而赤曲霉、棒囊殼菌和橘灰青霉等僅存在于河北張北的種樣中。種子是否經(jīng)表面消毒對(duì)其帶菌情況也有顯著影響，未消毒種子帶菌率明顯高于消毒種子，消毒處理會(huì)影響某些真菌的檢出。