李靜

（天津市生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心，天津 300191）

石油類污染物可通過生物鏈的傳遞，影響水產(chǎn)品質(zhì)量，進(jìn)而危害人體健康[1]。近年來，石油污染造成污染物生物體內(nèi)的富集和積累，使得海洋生物體內(nèi)石油烴的監(jiān)測具有十分重要的意義[2]。熒光分光光度法是測定海洋生物體中石油烴的經(jīng)典方法，也是海洋監(jiān)測規(guī)范中規(guī)定的仲裁方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

石油醚、氯化鈉飽和溶液、無水乙醇、氫氧化鈉溶液（6 mol/L）、二氯甲烷；油標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（1000 μg/mL）；油標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（100 μg/mL）。

熒光分光光度計(jì)、容量瓶（10 mL、50 mL、1000 mL）、移液管（容量10 mL、20 mL）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、皂化瓶（容量100 mL碘量瓶）、錐形分液漏斗（容量500 mL）、實(shí)驗(yàn)室常備儀器和設(shè)備。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的制備

分別選用鱈魚和三文魚的凍干樣作為實(shí)驗(yàn)樣品。準(zhǔn)確稱取2～5 g樣品于100 mL皂化瓶中，加入20 mL氫氧化鈉溶液，在室內(nèi)下避光皂化8～12 h，期間每隔1 h搖動(dòng)皂化瓶數(shù)次，加入20 mL無水乙醇溶液，充分搖勻，4 h后進(jìn)行萃取，制得樣品消化液。

1.2.2 工作曲線的繪制

分別量取0.0 mL、0.1 mL、0.3 mL、0.5 mL、0.7 mL和0.9 mL油標(biāo)準(zhǔn)使用液于6個(gè)100 mL皂化瓶中，加入20 mL氫氧化鈉溶液，在室溫下避光皂化8～12 h。加入20 mL無水乙醇溶液，充分搖勻，4 h后，將皂化液全部轉(zhuǎn)入500 mL分液漏斗中，用10 mL二氯甲烷洗滌皂化瓶，洗滌液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加30 mL氯化鈉溶液和100 mL水振蕩3 min，靜置分層，將有機(jī)相收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，用10 mL二氯甲烷再萃取一次，將有機(jī)相合并收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中。將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器連接，在50 ℃水浴中將二氯甲烷萃取液蒸發(fā)至近干，取下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，用氮?dú)鈱埩舳燃淄檩腿∫捍蹈?，?zhǔn)確加入10.0 mL石油醚溶解殘留物，將石油醚溶液移入1 cm石英比色池內(nèi)，于激發(fā)波長310 nm，發(fā)射波長360 nm處進(jìn)行熒光分光光度測定，以減空白后的相對(duì)熒光強(qiáng)度（Ii-Ib）為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的石油烴含量為橫坐標(biāo)，繪制工作曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 工作曲線繪制

工作曲線繪制結(jié)果見表1，由表1可知，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在0.0～9.0 μg/mL范圍內(nèi)，曲線方程為y=-4.65x+65.1，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，表明線性關(guān)系良好。

2.2 檢出限

根據(jù)《環(huán)境監(jiān)測 分析方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂技術(shù)導(dǎo)則》（HJ 168-2010）附錄A中有關(guān)方法檢出限的規(guī)定，按照樣品分析的全部步驟，重復(fù)7次空白試驗(yàn)，將測定結(jié)果換算為樣品中的含量（當(dāng)稱樣量為2.000 0 g時(shí)），計(jì)算7次平行測定的空白樣品含量的標(biāo)準(zhǔn)偏差，按公式（1）計(jì)算方法檢出限。

其中，t(n-1，0.99)為置信度為99%、自由度為n-1時(shí)的t值；n為重復(fù)分析的樣品數(shù)，連續(xù)分析7個(gè)樣品，在99%的置信區(qū)間，t(6，0.99)= 3.143；S為7次平行測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，測定結(jié)果見表2。

由表2結(jié)果可知，熒光分光光度法測定海洋生物體石油烴的檢出限為0.19（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，10-6），測定下限為0.76（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，10-6）。

表1 工作曲線繪制結(jié)果

表2 海洋生物體中石油烴的空白測定結(jié)果和檢出限

2.3 精密度

選取1.2.1中兩種海洋生物體實(shí)際樣品，分別平行測定6次，檢驗(yàn)精密度，測定結(jié)果見表3。

由表3結(jié)果可知，本次實(shí)驗(yàn)選擇的兩種實(shí)際樣品，平行測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為10.0%和11.4%，重復(fù)性較好，能夠滿足海洋監(jiān)測規(guī)范生物體分析要求。

2.4 準(zhǔn)確度

按照測定步驟，對(duì)兩種實(shí)際樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4。

由表4可見，對(duì)兩種實(shí)際樣品進(jìn)行的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)回收率分別為72.0%和74.0%，表明本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度良好。

實(shí)驗(yàn)過程中皂化是生物體樣品前處理的關(guān)鍵步驟，對(duì)測定結(jié)果存在較大影響。稱好的生物樣品應(yīng)用藥匙送入皂化瓶底，避免沾到瓶口，影響皂化效果。氫氧化鈉溶液加入后，應(yīng)充分搖勻。由于NaOH不能溶解于石油烴中,而可以溶解于乙醇,且乙醇在烴或油脂中有一定的溶解度,因此，在皂化液中加入適量乙醇以促進(jìn)生物體樣品中脂肪的水解。

由于生物樣品的特殊性，因此在萃取過程中極易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，在加入氯化鈉無法達(dá)到破乳效果時(shí)，可將萃取液放入離心機(jī)，2000 r/min離心3 min乳化層即可明顯分離。

表3 石油烴精密度測定結(jié)果

表4 準(zhǔn)確度測定結(jié)果

3 結(jié)論

綜上，本文根據(jù)熒光分光光度法測定海洋生物體中石油烴測定步驟，以鱈魚和三文魚為樣品，對(duì)方法的工作曲線、精密度和準(zhǔn)確度分別進(jìn)行了驗(yàn)證分析工作，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該方法檢出限低，具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室的分析質(zhì)量要求，對(duì)我國常見海洋生物體中石油烴的監(jiān)測工作具有重要意義。