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        冰凍切片出現(xiàn)“瑞士奶酪”現(xiàn)象的因果與規(guī)避

        2019-11-07 09:04:06祝鑒知
        醫(yī)藥前沿 2019年28期

        祝鑒知

        (安徽省馬鞍山市人民醫(yī)院 安徽 馬鞍山 243000)

        為了制備術中快速診斷組織學切片,需要采用冷凍方法促使生物樣本硬化,而冷凍卻會損傷細胞膜,破壞生物樣本組織細胞形態(tài)(見圖1)。鑒于此,我們要做的是分析冷凍損傷的成因和后果,以使這種損傷最小化,盡可能地規(guī)避這種損傷。

        1.資料與方法

        1.1 一般資料

        恒溫冷凍制片機型號:Thermo A7890103,設定工作室溫度:-20℃,設定冷凍臺溫度-40℃。實驗分析所用樣本均來自于本院病理科術中快速,80例樣本均采用乳腺上皮惡性腫瘤標本[1]。

        1.2 方法

        為了揭示出樣本凍結速度與冰凍損壞率之間的關系,進而標識出臨床適用的、可撐控的凍結速度,本文依照不同的冰凍條件,即通過不同的操作程式來實現(xiàn)。將80例標本分成4組,每組20例。取材規(guī)格統(tǒng)一為2×1×0.2cm,制片完成后鏡下觀察。取材規(guī)格依照病理取材技術操作規(guī)范[2-3]。

        第1組:20例樣本,取樣后,均直接放置在未開啟的冷凍臺上,即在工作室溫度-20℃條件下完成凍結。

        第2組:20例樣本,在工作室溫度-20℃條件下,先將樣本放置在冷凍臺上,而后再開啟冷凍臺,冷凍臺在開啟后溫度逐漸降至-40℃,并完成凍結。

        圖1 受損傷與未受損傷切片的對比

        第3組:20例樣本,是首先開啟冷凍臺,再取材,約5分鐘左右,這時冷凍臺溫度已達-40℃,再將樣本放置冷凍臺冷凍,并完成凍結。

        第4組:20例樣本,首先開啟冷凍臺(同第3組),再開啟“冷凍加速”,取材約5分鐘后,冷凍臺溫度達-40℃,再將樣本放置冷凍臺,并完成凍結。

        2.結果

        實驗結果列于表1,其表明,第1組樣本凍結完成時間在2’21”至2’39”之間,平均為2’28”,20例標本組織細胞全部出現(xiàn)損傷現(xiàn)象,損傷率為100%。第兩組樣本凍結完成時間在1‘25“至1’45”之間,平均為1‘33”,其中有6例都出現(xiàn)了多孔及組織形態(tài)攺變,損傷率為30%。第3組樣本凍結完成時間在1’15”~1‘30”之間,平均為1’21”,有1例受損,損傷率為5%。第4組樣本凍結完成時間在1‘02“~46”之間,平均為53”。鏡下觀察20例組織切片,無1例損壞。

        可以看出,即使是同種病組織、組織取材尺寸亦相同的同一組20例樣本,在同一冷凍臺上,以相同的冷凍條件下測試,它們的凍結速度也不是相同的,足可見樣本個體差異性的影響。

        表 實驗結果一覽表

        圖2表示出冰凍切片損傷率隨冷凍速度(以平均表示)的變化,在冷凍速度53”~2’28”區(qū)間(1’35”),冰凍損傷率近乎呈直線從0%急劇上升到100%,損傷率對冷凍速度的敏感可見一斑。而在冷凍速度53”以下區(qū)間,即在第4組冷凍條件下,冰凍損傷率穩(wěn)定地保持0損傷,因此適合于術中冰凍制片使用。

        圖2 損傷率隨凍結時間的變化

        3.討論

        生物材料的導熱性能差,凍結時會出現(xiàn)溫度梯度,使樣本在緩慢冰凍時逐漸形成大量晶體,特別是在遠離凍結表面的部分,切片后大的晶體在組織切片上呈現(xiàn)出“瑞士奶酪”的形態(tài)。所以取材尺寸不應過厚過大,取材規(guī)格應依照病理取材技術操作規(guī)范[6],面積大小一般為2×1厘米,厚度為0.2~0.4厘米。如果組織取材過厚,會由于生物材料導熱性差而導致組織內(nèi)局部凍結速度慢而產(chǎn)生冰晶,損傷組織,影響診斷。

        然而在樣本被成功冷凍成玻璃體后并不能一直保持玻璃形態(tài)。固體水的玻璃體形態(tài)是不穩(wěn)定的,當溫度高于-121℃時無定形水即開始逐漸重組為立方冰并膨脹,但重要的是這是一個緩慢的轉換過程,這使得冰凍快速制片有足夠的時間能夠完成。

        通過探索,逐步加快組織冰凍速度,縮短組織冰凍時間,有效地減少甚至消除了冰凍制片中出現(xiàn)的“瑞士奶酪”現(xiàn)象。使術中冰凍快速制片中的組織損害得到非常大的改善,提高了病理診斷準確性。

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