(廣東省梅州市人民醫(yī)院婦科，廣東 梅州 514031)

卵巢癌已成為全球女性死亡的重要疾病之一，其中乳腺癌/卵巢癌易感基因BRCA1/2已被證實是與遺傳性的卵巢癌和乳腺癌關(guān)系密切的基因，其突變與腫瘤組織分級等有密切關(guān)系[1]。隨著基因測試技術(shù)的發(fā)展，可對該類基因進行檢測，并可進一步評估患者罹患腫瘤的風(fēng)險[2]。但除了有明顯的家族史患者之外，對于有其他臨床特征的患者是否需要進行BRCA1/2基因檢測，目前尚無研究報道。雖然BRCA1/2基因檢測費用較昂貴，不能作為常規(guī)的臨床檢查項目，但對于懷疑有高危突變的患者，也應(yīng)進行基因檢測，以輔助臨床進行準(zhǔn)確的治療和判斷預(yù)后[3]，因此，本研究將深入探討卵巢癌患者BRCA1/2基因突變的人群特點及與臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 共納入我院2018年1月—2019年1月48例卵巢癌患者，且均來自梅州市；患者年齡45～80歲，平均(56.69±8.12)歲，均為女性，臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期 20例，Ⅲ期28例。組織學(xué)分級：中-低度分化17例，高度分化31例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。21例已絕經(jīng)，27例未絕經(jīng)。

1.2BRCA1/2基因檢測方法 采用遺傳性卵巢癌基因檢測試劑盒進行檢測，采用多重PCR技術(shù)，擴增BRCA全編碼區(qū)域，并結(jié)合新一代的半導(dǎo)體測序平臺進行檢測。抽取每位患者靜脈血5 ml，常規(guī)制作PCR反應(yīng)體系，充分?jǐn)噭螂x心，運行PCR的反應(yīng)程序，并加入相應(yīng)的反應(yīng)試劑，使用探針與目標(biāo)區(qū)域雜交，捕獲突變區(qū)域，探針與樣本過夜孵育，隨后從低溫冰箱中取出，復(fù)溫30 min，將標(biāo)本震蕩均勻，qPCR對獲得的文庫進行定量，借助新一代的半導(dǎo)體測序平臺進行測序、讀取堿基和序列對比，并與人類基因組對比，獲取突變序列。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。采用χ2檢驗或Fisher確切概率法分析基因突變與患者臨床病理特征的關(guān)系，使用雙側(cè)概率檢驗法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1一般情況 共納入卵巢癌患者48例，女性，平均發(fā)病年齡為(56.69±8.12)歲。根據(jù)BRCA1/2基因是否有致病性突變分為BRCA1/2致病突變組和BRCA1/2良性突變組。在BRCA1/2致病變組中，發(fā)病年齡<50歲的BRCA1/2致病性突變患者占33.33%，左側(cè)卵巢癌占55.56%，右側(cè)占44.44%，大部分類型為卵巢上皮性癌，占88.89%。兩組患者平均發(fā)病年齡、發(fā)病年齡<50歲例數(shù)、發(fā)病部位及病理類型的一般情況比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1、圖1。

2.2BRCA1/2基因突變情況 48例卵巢癌患者中，共發(fā)現(xiàn)BRCA1/2致病性突變9例，其中BRCA1致病性突變7例，BRCA2致病性突變2例，均為雜合錯義雜合突變，總突變率為18.75%，其中BRCA1致病性突變率為14.58%，BRCA2致病性突變率為4.17%。此外，檢測到可能良性或意義不明共8例，其見圖1。

2.3BRCA1/2基因突變與卵巢癌人群特征的關(guān)系 BRCA1/2基因突變與發(fā)病年齡、月經(jīng)狀態(tài)和家族史等差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

2.4BRCA1/2基因突變與臨床病理特征的關(guān)系 BRCA1/2基因致病突變組中的臨床分期多為Ⅲ期和低分化以及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

圖1 卵巢癌患者BRCA2編碼區(qū)c.3109C>T致病性突變

表2 BRCA1/2基因突變與卵巢癌人群特征的關(guān)系

表3 BRCA1/2基因突變與臨床病理特征的關(guān)系

注：“-”表示采用確切概率法

3 討論

BRCA1 和BRCA2是兩個不同類型的癌基因，通過激活DNA的修復(fù)程序，在細胞修復(fù)中發(fā)揮重要的作用，同時也參與調(diào)控細胞的生長周期[4]。BRCA1基因主要定位于人類染色體17號中，在1994年被成功發(fā)現(xiàn)，其有24個外顯子，并且編碼22個蛋白[5]。BRCA1突變與遺傳性卵巢癌和乳腺癌的關(guān)系密切，本研究中檢測到了BRCA1中多為位點突變，并且導(dǎo)致了堿基對的改變，使蛋白的正常翻譯提前終止，BRCA1突變位點后的氨基酸表達缺失，導(dǎo)致了BRCA1蛋白功能喪失，并且導(dǎo)致DNA的修復(fù)功能受損，進而參與了惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[6]。BRCA2基因在1994年被發(fā)現(xiàn)，定位于13號染色體長臂中，共有27個外顯子，同樣是機體重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子之一[7]。研究發(fā)現(xiàn)，BRCA2不但與女性乳腺癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)，還與男性乳腺癌的發(fā)生風(fēng)險有關(guān)[8]。據(jù)研究報道，約有90%的遺傳性乳腺癌均與BRCA2的基因突變有關(guān)[9]。目前，有家族性遺傳乳腺癌的患者被檢測到有BRCA1/2高危突變的不到25%[10]。李圓等[11]研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1/2的突變頻率在不同類型的卵巢癌人群中亦存在有較大的差異，并且具有不同的突變位點和突變類型，但目前國內(nèi)的研究多為特定人群，缺乏大規(guī)模的觀察數(shù)據(jù)，對于卵巢癌的基因突變情況尚未有準(zhǔn)確的定論。

本研究對本客家地區(qū)的卵巢癌患者進行了回顧性分析，對存在BRCA1/2基因突變的患者臨床病理特征進行了統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，在卵巢癌患者中存在有多個位點的疾病性突變，進一步比較致病性突變組的臨床特點，結(jié)果顯示，致病性突變組的患者年齡均較低，但未見統(tǒng)計學(xué)差異，可能與納入的樣本量較少有關(guān)，在今后的研究中將進一步擴大樣本量。目前，BRCA1/2的致病性突變與卵巢癌病特征的關(guān)系尚無明確的研究報道，本研究結(jié)果顯示，BRCA1/2基因致病突變組中的臨床分期多為Ⅲ期和低分化以及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，表明BRCA1/2突變性與腫瘤的侵襲潛能和轉(zhuǎn)移潛能可能存在密切相關(guān)性，這可能與腫瘤錯義突變的特點有關(guān)[12]。 結(jié)合BRCA1/2蛋白的功能特點，有研究認(rèn)為BRCA1/2位點致病性突變可能與抑制轉(zhuǎn)錄因子的表達有關(guān)[13-14]，因此我們假設(shè)：①對于具有上述臨床病理特征的患者，可以進行BRCA1/2的位點突變的篩查。②對于無致病性突變陽性的患者，可以對其家屬進行基因檢測，以評估患者罹患有卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險，并及時給予相應(yīng)的預(yù)防治療。③對于BRCA1/2位點突變的篩查，可以作為評估卵巢癌風(fēng)險的一項指標(biāo)。既往的研究也證實了在具有BRCA1/2致病性突變的卵巢癌患者，其預(yù)后通常較差，腫瘤的惡性行為較強，在卵巢癌中具有BRCA1/2突變的多為卵巢上皮癌，其所占的比例較高[15]。本研究是一項單中心小樣本的研究，研究均為初步的結(jié)果，未能對相關(guān)突變位點與遺傳性卵巢癌的關(guān)系進行直接分析，在今后中繼續(xù)進行選取多中心大樣本高選擇性人群進行進一步研究。