趙溜

作者單位：410007 湖南長(zhǎng)沙，湖南省兒童醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)研究所

隨著抗菌藥物應(yīng)用的普及，隨之出現(xiàn)的抗菌藥物濫用成為呼吸道感染的眾矢之的。呼吸道感染包括上呼吸道感染和下呼吸道感染，前者90%由病毒引起（包括鼻炎和咽喉炎），后者90%由細(xì)菌引起（包括支氣管炎和肺炎等）。隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，耐藥菌株隊(duì)伍逐漸擴(kuò)大，下呼吸道感染成為最常見且最難治療的疾病，重者可伴隨患者終生。據(jù)統(tǒng)計(jì)，下呼吸道感染在世界十大死因中居第3 位，第4 位慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）也是由下呼吸道長(zhǎng)期感染引起［1］。而痰液中病原菌種類的檢測(cè)對(duì)治療下呼吸道感染具有重要意義，傳統(tǒng)痰培養(yǎng)對(duì)病原菌種類的檢測(cè)耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，需3～7 d，往往錯(cuò)過控制感染的最佳時(shí)期；相反，晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)采用的是恒溫?cái)U(kuò)增微流控原理［2］，可快速檢測(cè)出13 種常見下呼吸道病原菌。本研究通過對(duì)比兩者的細(xì)菌檢出率，旨在研究其在臨床應(yīng)用中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 方法

1.1.1 痰標(biāo)本來源與采集 收集2019 年3—4 月在本院住院的208 份下呼吸道感染患兒的痰液標(biāo)本。留取方法：在患兒剛?cè)朐簳r(shí)，由各病區(qū)專業(yè)護(hù)士指導(dǎo)患兒家屬留取患兒痰液。痰液需留取清晨漱口后用力吐出，若唾液較多則重新留取。留取成功后家屬迅速將標(biāo)本送至檢驗(yàn)科，由檢驗(yàn)科專門人員檢查。若痰液標(biāo)本合格，則立即置于-20 ℃冰箱中保存待檢［3］。

1.1.2 檢測(cè)方法 將患兒痰標(biāo)本涂在巧克力平板或血平板上進(jìn)行痰培養(yǎng)，平板均由英國(guó)OXOID 公司提供。痰標(biāo)本固定成功后置于37 ℃恒溫箱孵育，24 h后選出優(yōu)勝菌群進(jìn)一步分析。晶芯等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)采用呼吸道病原菌核酸檢測(cè)試劑盒［4］，原理為具有鏈置換功能的聚合酶在65 ℃恒溫條件下進(jìn)行反應(yīng)，無需考慮變溫引起的包括時(shí)間在內(nèi)的其他任何耗損。因?yàn)檫^程中減少了高溫變性和低溫退火兩個(gè)過程，因此細(xì)菌的擴(kuò)增速度很快，可以在短時(shí)間內(nèi)完成靶向核酸的擴(kuò)增，然后利用熒光染料摻入法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)，達(dá)到擴(kuò)增效果的靶核酸會(huì)以“S 型”曲線擴(kuò)增［5］。

1.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間計(jì)數(shù)資料以例或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患兒一般情況 患兒年齡為1 個(gè)月～12 歲。所有患兒的年齡和既往史等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。見表1。

表1 208 例下呼吸道感染患兒的一般資料比較

2.2 兩種檢測(cè)方法的標(biāo)本陽性檢出率比較 共納入208 份下呼吸道感染標(biāo)本。晶芯呼吸道病原菌檢測(cè)對(duì)標(biāo)本的陽性檢出率明顯高于痰培養(yǎng)（P＜0.05）。見表2。

表2 兩種檢測(cè)方法對(duì)下呼吸道感染患兒痰液標(biāo)本病原菌的檢出情況比較

2.3 兩種檢測(cè)方法的病原菌檢出率比較 晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)對(duì)肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌（金葡菌）、大腸埃希菌、肺炎支原體的檢出率均明顯高于傳統(tǒng)痰培養(yǎng)方法。見表3。

表3 兩種檢測(cè)方法對(duì)各類病原菌的檢出率比較

3 討論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織各項(xiàng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，呼吸道感染仍然是全球范圍內(nèi)威脅人類健康的疾病之一［6］，占所有疾病致死率的首位，而下呼吸道感染又是呼吸道感染中最常見的疾?。?］。目前抗菌藥物的普遍應(yīng)用導(dǎo)致耐藥菌種類增多，下呼吸道感染的病死率增加，特別是幼兒和老年人的免疫系統(tǒng)低下，嚴(yán)重的下呼吸道感染更增加了上述人群的病死率［8］。無論是院外感染的社區(qū)獲得性肺炎（community acquired pneumonia，CAP）、COPD 急性加重期、慢性支氣管炎急性加重期，還是入院24 h 后感染的醫(yī)院獲得性肺炎，若不能及時(shí)明確細(xì)菌種類、確定臨床治療方向，僅采取應(yīng)用廣譜抗菌藥物的經(jīng)驗(yàn)性治療，最后的結(jié)局只能是造成耐藥菌群逐漸擴(kuò)大，下呼吸道感染病死率越來越高［9］。所以，確定病原體種類是臨床治療的關(guān)鍵，傳統(tǒng)痰培養(yǎng)的檢測(cè)過程繁瑣，不僅培養(yǎng)病原菌的周期較長(zhǎng)，而且獲得的結(jié)果不一定準(zhǔn)確，但這也是在臨床應(yīng)用中最基礎(chǔ)的確診方法。為此本院引進(jìn)了新的痰標(biāo)本病原體種類檢測(cè)技術(shù)，即晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)技術(shù)。

本研究選取208 例下呼吸道感染患兒的痰液標(biāo)本，分別采用晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)和痰培養(yǎng)的方法在同一時(shí)間同一環(huán)境內(nèi)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)及檢測(cè)。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)對(duì)標(biāo)本的陽性檢出率達(dá)50.48%，痰培養(yǎng)則為37.98%，顯然前者的檢出率大于后者，雖然兩者差距不大，但是在差距較小的條件下，還應(yīng)選擇晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)進(jìn)行臨床病原體診斷，即在相同檢出率的前提下選擇更簡(jiǎn)單、快捷的方式［10］。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)技術(shù)在2 h 內(nèi)即可判斷病原體是否擴(kuò)增，而傳統(tǒng)痰培養(yǎng)則需將痰標(biāo)本在保溫箱中孵育24 h 以上，待其自然擴(kuò)增。由此更能體現(xiàn)晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)技術(shù)的敏感性和特異性均高于痰培養(yǎng)，并且降低了耽誤患者病情的風(fēng)險(xiǎn)。

本研究顯示，晶芯呼吸道擴(kuò)增技術(shù)對(duì)病原體的檢出率與痰培養(yǎng)一致，甚至前者的敏感性要高于痰培養(yǎng)。另外，兩種檢測(cè)方法對(duì)常見細(xì)菌如肺炎克雷伯桿菌的檢出率是相同的，均為1.44%，而對(duì)嗜麥芽窄食單胞菌、嗜肺軍團(tuán)菌和結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群的檢出率均為0%，晶芯病原體核酸檢測(cè)對(duì)常見病原菌（如肺炎鏈球菌、金葡菌、大腸埃希菌、肺炎支原體）的檢出率均高于痰培養(yǎng)。除此之外，由于痰培養(yǎng)標(biāo)本需在保溫箱中培育較長(zhǎng)時(shí)間，不能排除在此過程中有其他細(xì)菌感染和侵入，從而使某些細(xì)菌增多導(dǎo)致敏感性高的假象，痰培養(yǎng)技術(shù)中痰標(biāo)本的保存及痰細(xì)菌病原體的擴(kuò)增過程可能會(huì)受各種條件的限制，更能證明晶芯呼吸道擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)具有較高的敏感性和特異性。

本院對(duì)晶芯呼吸道擴(kuò)增檢測(cè)這一新技術(shù)進(jìn)行學(xué)習(xí)和研究，并將其應(yīng)用于臨床。在臨床應(yīng)用和研究過程中僅對(duì)常見感染病原體的菌株進(jìn)行擴(kuò)增，研究證明，晶芯呼吸道擴(kuò)增檢測(cè)通過等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，可靈敏、快捷并且準(zhǔn)確地檢測(cè)出下呼吸道感染患者痰液中常見的病原體種類，相對(duì)傳統(tǒng)的痰培養(yǎng)來說要更為容易，簡(jiǎn)單而言，只要有病原菌，哪怕一個(gè)核酸序列，晶芯呼吸道擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)即可擴(kuò)增出一群病原體［10］。此特點(diǎn)明顯優(yōu)于一般的痰細(xì)菌培養(yǎng)，且檢出率也高于常規(guī)痰培養(yǎng)技術(shù)。本研究通過與傳統(tǒng)痰細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行對(duì)比，顯示晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)技術(shù)在診斷不同病原體方面更具優(yōu)勢(shì)，為臨床快速檢出上下呼吸道病原體和積極治療患者提供了重要的保障。晶芯呼吸道病原菌核酸檢測(cè)技術(shù)高敏感性和高特異性的特點(diǎn)對(duì)臨床診斷具有重要的價(jià)值，尤其對(duì)幼兒下呼吸道感染的積極治療具有重要意義，值得臨床積極探討和運(yùn)用。