薛桂陽 曹巖 劉明開

作者單位：116021 遼寧大連，大連大學附屬新華醫(yī)院檢驗科

隨著血液學檢驗技術(shù)的發(fā)展，血細胞分析儀在檢驗效率、準確性和重復性等方面都取得了較大進步，尤其是近幾年，很多廠商的儀器已經(jīng)可以對原始細胞、中性粒細胞核左移、異型淋巴細胞等情況進行報警提示，但在血細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)等方面的檢測尚不能代替顯微鏡鏡檢，目前仍然只能作為全血血細胞分析的過篩手段［1］。如何建立經(jīng)濟有效的血細胞分析儀復檢規(guī)則，始終受到血液學專家的重視［2］。2005 年，國際血液血復檢專家組通過對13 298 份血液標本的血常規(guī)結(jié)果進行分析，推薦了41 條自動血細胞分析儀分類復檢規(guī)則［3-4］。但在實際工作中發(fā)現(xiàn)，此套復檢規(guī)則的假陽性率過高，Sysmex XN-1000 儀器檢測缺乏針對性和特異性，不適合本實驗室的臨床應用。因此，血液分析儀復檢規(guī)則的建立必須結(jié)合各醫(yī)院的實際情況［5-6］。本研究參考“國際血液學41 條復檢規(guī)則”［3］，并結(jié)合XN-1000 分析儀自身的特點，制定適合本實驗室的Sysmex XN-1000 血細胞分析儀復檢規(guī)則。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2017 年11—12 月來自大連大學附屬新華醫(yī)院住院患者的1 241 份血液標本。所有標本于采樣后30 min～4 h 內(nèi)用XN-1000 自動進樣模式進行檢測，包括全血細胞計數(shù)、白細胞分類、有核紅細胞（nucleared red blood cell，NRBC），并將檢測報告存檔。

1.2 儀器與試劑 Sysmex XN-1000 全自動血細胞分析儀、原裝配套試劑、標準品和質(zhì)控品由日本Sysmex 公司提供；瑞氏染液由珠海貝索生物科技有限公司提供；Olympus BX43 光學顯微鏡由奧林巴斯光學株式會社提供。

1.3 “報警信息”系統(tǒng)設置 XN-1000 血液分析儀的報警信息包括可疑性信息和異常信息，XN-1000對每個可疑的報警信息（Q-flag）設置直方圖，通過查看直方圖確定報警信息的真?zhèn)?。每個報警指標的臨界值均規(guī)定為100，若某項指標的Q-flag值＜100，則為陰性；若某項指標的Q-flag 值為100～300（最大值），則為陽性。Q-flag 值越大，可信程度越高。

1.3.1 白細胞報警信息 白細胞報警信息包括白細胞散點圖分布異常、白細胞計數(shù)（white blood cell count，WBC）升高、WBC 降低、中性粒細胞計數(shù)（neutrophil，NEU）降低、NEU 升高、LYM 升高、淋巴細胞計數(shù)（lymphocyte，LYM）降低、單核細胞計數(shù)（monocytes，MON）升高、嗜酸粒細胞計數(shù)（eosinophil，EO）升高、嗜堿粒細胞計數(shù)（basophil，BA）升高、NRBC 存在、未成熟粒細胞存在、“原始細胞或異常淋巴細胞？”、“原始細胞？”、“核左移？”、“異常淋巴細胞？”、“異型淋巴細胞？”。

1.3.2 紅細胞和網(wǎng)織紅細胞報警信息 紅細胞和網(wǎng)織紅細胞報警信息包括紅細胞分布異常、貧血、紅細胞計數(shù)（red blood cell count，RBC）升高、雙峰紅細胞分布、網(wǎng)織紅細胞分布異常、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（reticulocyte，RET）升高、紅細胞大小不一、小紅細胞、大紅細胞、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）低、“紅細胞凝集？”、“乳糜血對Hb 造成干擾？”、“鐵缺乏？”、“Hb 異常？”、“紅細胞碎片？”。

1.3.3 血小板報警信息 血小板報警信息包括血小板計數(shù)（platelet，PLT）升高、血小板散點圖異常、血小板分布異常、PLT 降低、血小板聚集。

1.4 檢測方法 每份標本制備兩張血液涂片標注編號，由具有中級及以上職稱的專業(yè)技術(shù)人員，嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》［7］和《白細胞計數(shù)參考方法》［8］進行血涂片制備和鏡檢分析，分類計數(shù)200 個白細胞，觀察記錄血細胞形態(tài)［1，9］。

1.5 涂片鏡檢陽性判斷標準 依據(jù)全國血液學復檢專家小組提出的12 條血細胞自動計數(shù)復檢標準［10］進行評估，復檢標準為：①紅細胞明顯大小不等（細胞大小相差l 倍以上）；中空淡染（＞1/2 淡染區(qū)的紅細胞＞30%），且只要發(fā)現(xiàn)瘧原蟲均認為是紅細胞有陽性形態(tài)學改變；② 巨大血小板多于15%；③出現(xiàn)血小板聚集；④ 杜勒小體（Dohle 小體）的粒細胞＞10%；⑤ 中毒顆粒中性粒細胞＞10%；⑥ 空泡變性粒細胞＞10%；⑦ 原始和幼稚細胞≥1%；⑧ 早幼粒細胞和中幼粒細胞≥1%；⑨ 晚幼粒細胞＞2%；⑩ 異型淋巴細胞＞5%；NRBC≥1%；漿細胞≥1%。

1.6 本科室復檢規(guī)則的制定 參考“國際復檢規(guī)則41 條”［3］和XE-2000 血細胞復檢標準制定協(xié)作組推薦的“復檢規(guī)則23 條”［11］，結(jié)合實際工作中遇到的XN-1000 報警和患者檢查結(jié)果，制定本實驗室的XN-1000 復檢規(guī)則，共18 條。見表1。

1.7 評估方法 以顯微鏡鏡檢結(jié)果為“金標準”，統(tǒng)計本院自定義復檢規(guī)則各項參數(shù)的真陽性、假陽性、真陰性、假陰性例數(shù)以及復檢率，并與“國際41 條復檢規(guī)則”進行比較。真陽性定義為符合復檢規(guī)則且鏡檢結(jié)果為陽性；假陽性定義為符合復檢規(guī)則但鏡檢結(jié)果為陰性；真陰性定義為不符合復檢規(guī)則且鏡檢結(jié)果為陰性；假陰性定義為不符合復檢規(guī)則但鏡檢結(jié)果為陽性。

1.8 驗證試驗 為驗證本院制定的18條復檢規(guī)則，選取2017 年12 月—2018 年1 月611 份（全國臨床檢驗操作規(guī)程要求＞500 份即可）住院患者的血液標本，以人工復檢為金標準，對本實驗室的18 條復檢規(guī)則進行驗證。

2 結(jié)果

2.1 復檢規(guī)則各項參數(shù)的評估 通過更改原始淋巴細胞、異型淋巴細胞、核左移以及WBC 和PLT 較少的復檢判斷標準減少復檢。本科室18 條復檢規(guī)則的假陰性率雖然有所升高（復檢率1.9%，且無血液病漏檢），仍符合國際專家共識。但極大降低了復檢率（達27.7%），滿足檢驗科日常工作需求。見表2。

2.2 驗證試驗 本院18 條復檢規(guī)則可有效降低復檢率，滿足檢驗科日常工作需求。611 份血液標本的驗證結(jié)果見表3。

表1 本院自定義復檢規(guī)則

表2 本院1 241 份標本兩種復檢規(guī)則數(shù)據(jù)的比較

表3 采用兩種復檢規(guī)則評估本院611 份標本的驗證結(jié)果比較

3 討論

本院使用的血常規(guī)檢測儀器為Sysmex 公司的XN-1000，XN 系列全自動血液體液分析儀，相比于其他血液分析儀，新增了同時檢測白細胞、嗜堿粒細胞和NRBC 的“WNR”通道，幼稚細胞檢測專用的“WPC”通道，以及可通過熒光染色計數(shù)血小板的“PLT-F”通道，用戶可根據(jù)實際需求選擇通道檢測標本。但是，XN-1000 血細胞分析儀在實際工作中仍存在一定的局限性［12-13］，需要結(jié)合顯微鏡檢查，制定合適的復檢規(guī)則，防止漏檢情況的發(fā)生。本復檢規(guī)則結(jié)合儀器自身的特點和本院實際工作的需要，參照“國際復檢規(guī)則41 條”制定而成。

本研究參考國際血液血細胞41 條規(guī)則對本院1 241 份住院標本進行評估，并按照“國際復檢規(guī)則41 條”進行復檢，復檢率高達67.5%，如此高的復檢率在實際工作中顯然不現(xiàn)實。

經(jīng)分析復檢結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其假陽性主要發(fā)生于異型淋巴細胞和原始細胞的報警，且集中于100≤Q-flag＜150 的區(qū)間范圍內(nèi)，其陽性報警的數(shù)量為429 個，其中真陽性標本的數(shù)量為4 個，未發(fā)現(xiàn)血液病標本，與崔茶進［14］的研究結(jié)果基本相符。原因可能與儀器廠商擔心漏檢，將異型淋巴細胞和原始細胞報警的靈敏度設置較高有關。當把XN-1000 針對異型淋巴細胞和原始細胞的報警調(diào)整至150≤Q-flag 時，復檢率標本數(shù)量減少454 例，而相應的假陰性率標本增加4 例，并未發(fā)現(xiàn)血液病漏檢情況。

根據(jù)“XE-2000 血細胞復檢分析標準制定協(xié)作組”制定的鏡檢陽性判斷標準，剔除了原標準中桿狀核中性粒細胞＞5%這項指標［11］，這就造成儀器核左移報警的假陽性率升高，在核左移100≤Q-flag＜150 區(qū)間內(nèi)，陽性報警數(shù)為66 個，其中假陽性報警占57 個，且66 個陽性報警中未發(fā)現(xiàn)血液病標本，因此將儀器核左移的陽性報警調(diào)整為Q-flag≥150。

本研究還表明，WBC 為（3.0～4.0）×109/L 的真陽性僅有3 份，而且存在其他復檢提示；PLT 為（70～100）×109/L 的真陽性僅有2 份，也存在除PLT 外的其他復檢提示。有研究顯示，我國WBC 與PLT 的正常范圍較其他國家稍低［15］，所以本院復檢規(guī)則修改為WBC＜3.0×109/L，PLT＜70×109/L。

綜上所述，采用本院自主建立的18 條血細胞復檢規(guī)則，未出現(xiàn)血液病漏檢的情況，確保了血細胞分析儀的準確性，假陽性率和標本復檢率明顯降低，提高了檢驗科的工作效率，控制假陰性率＜5%，確保了復檢規(guī)則的實用性和可信性。由此可見，根據(jù)儀器特點建立適合本實驗室的血涂片復檢規(guī)則十分必要，可以更好地平衡檢測結(jié)果與工作效率之間的關系。同時復檢規(guī)則的制定不能一勞永逸，還需在今后工作中不斷完善，使其更好地為檢驗工作服務。