李家明 楊雯翔 楊淑君 余加聰

作者單位：617000 四川攀枝花，攀鋼集團(tuán)總醫(yī)院檢驗(yàn)科

血漿凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）、血漿纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）及血漿凝血酶時(shí)間（thrombin time，TT）是臨床用于診斷凝血系統(tǒng)異常疾病的檢測(cè)指標(biāo)，不僅可用于出凝血異常疾病的篩選和診斷，也可用于止血?jiǎng)┖涂鼓幬锏寞熜ПO(jiān)測(cè)［1］。目前市面上的血凝試劑較多，檢測(cè)方法多樣，進(jìn)口試劑往往價(jià)格昂貴，國(guó)產(chǎn)試劑價(jià)格相對(duì)便宜。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)比分析使用西門(mén)子的SIEMENS 試劑和上海太陽(yáng)試劑在CA-7000 血凝儀上檢測(cè)患者血液樣本的相關(guān)指標(biāo)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本采集 按WS/T 359-2011 標(biāo)準(zhǔn)［2］，用真空管采集靜脈血樣本（枸櫞酸鈉109 mmol/L，1：9 抗凝），止血帶使用時(shí)間≤60 s，及時(shí)混勻，1 500g離心15 min 取血漿，在無(wú)溶血、黃疸、脂血的患者樣本中，選擇高、中、低濃度各25 份樣本供檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑 Sysmex CA-7000 全自動(dòng)血凝儀。西門(mén)子SIEMENS 試劑（A 試劑），其中PT 試劑（批號(hào)546949，參考范圍9.8～12.1 s）、APTT 試劑（批號(hào)557221，參考范圍22～33 s）、FIB 試劑（批號(hào)547281，參考范圍1.8～3.5 g/L）、TT 試劑（批號(hào)556825，參考范圍14～21 s），F(xiàn)IB 校準(zhǔn)品定標(biāo)（批號(hào)5032488），正常值質(zhì)控品（Dade Ci-Trol 1，批號(hào)548035）、異常值質(zhì)控品（Dade Ci-Trol 2，批號(hào)：548261），配套清洗劑。上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的血凝試劑（B 試劑），其中PT 試劑（批號(hào)2001307，參考范圍10～14 s）、APPT 試劑（批號(hào)Y2012196，參考范圍22～38 s）、FIB 試劑（批號(hào)2031095，參考范圍2～4 g/L）、TT 試劑（批號(hào)2021162，參考范圍10～16 s），校準(zhǔn)品定標(biāo)，正常值質(zhì)控品（批號(hào)182033）、異常值質(zhì)控品（批號(hào)183020）、配套清洗劑。

1.3 檢測(cè)方法 在Sysmex CA-7000 全自動(dòng)血凝儀正常運(yùn)行情況下，嚴(yán)格按照儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作，A 試劑校準(zhǔn)品定標(biāo)，用正常值和異常值兩種水平質(zhì)控品，監(jiān)控室內(nèi)質(zhì)控在控，然后更換為B 試劑及配套清洗劑，檢測(cè)正常值和異常值兩種水平質(zhì)控品在控后，先用A 試劑檢測(cè)PT、APTT、FIB、TT（含高、中、低濃度）各25 份患者標(biāo)本，再用B 試劑分析。所有測(cè)試均要求在4 h 內(nèi)完成。以上兩種試劑檢測(cè)凝血四項(xiàng)均采用凝固法。

1.4 臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 參照美國(guó)CLIA'88 規(guī)定的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)（T±15%），以SE%＜CLIA'88 規(guī)定的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的1/2（T±7.5%）作為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，判斷B 試劑在醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差（systematic error，SE）是否可以接受［3］。將PT、APTT和FIB 的2 個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平（PT 為X1＝10.5 s，X2＝15 s；APTT為X1＝20 s，X2＝40 s；FIB為X1＝1.70 g/L，X2＝4.10 g/L）分別代入回歸方程，計(jì)算SE?？山邮苄耘袛嘀笜?biāo)［4］SE%＝︱（a+bXc）-Xc︱/Xc×100%＜EA，與允許誤差（allowable error，EA）比較，判斷PT、APTT、FIB 和TT 的SE 可接受性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，檢測(cè)結(jié)果的組間均值比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩種試劑檢測(cè)結(jié)果比較 兩種試劑的PT 均值整體偏低，A 試劑與B 試劑的PT、TT 檢測(cè)結(jié)果比較有明顯差異，以TT 結(jié)果尤其明顯（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 A 試劑與B 試劑的檢測(cè)結(jié)果比較（）

表1 A 試劑與B 試劑的檢測(cè)結(jié)果比較（）

注：與A 試劑比較，aP＜0.01

2.2 兩種試劑的回歸方程和相關(guān)性分析 A 試劑和B 試劑FIB 檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性略差，而PT、APTT和TT 兩者相關(guān)性較好。以A 試劑（X）為標(biāo)準(zhǔn)，B 試劑（Y）4 個(gè)項(xiàng)目上的回歸方程及相關(guān)性分析見(jiàn)表2。

表2 A 試劑與B 試劑間檢測(cè)項(xiàng)目的回歸方程及相關(guān)系數(shù)

2.3 兩種試劑各參考區(qū)間的陽(yáng)性符合率比較 A試劑和B 試劑檢測(cè)APTT、FIB、TT 的陽(yáng)性符合率較為接近，但PT 陽(yáng)性符合率存在明顯差異。見(jiàn)表3。

表3 兩種試劑各自生物參考區(qū)間中的陽(yáng)性符合率比較

2.4 B 試劑在醫(yī)學(xué)決定水平處的SE 與臨床可接受性評(píng)價(jià) PT、APTT 在醫(yī)學(xué)決定水平處均可被臨床接受（SE%均＜7.5%），F(xiàn)IB 在高值水平可被臨床接受，但在低值水平不被接受。見(jiàn)表4。

表4 PT、APTT 和FIB 在醫(yī)學(xué)決定水平處的SE 及臨床可接受性評(píng)價(jià)

2.5 成本效益分析 A 試劑和B 試劑檢測(cè)同一凝血項(xiàng)目消耗的試劑等量，但B 試劑、質(zhì)控品和耗材有明顯的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，使用B 試劑更能節(jié)約成本。

3 討論

目前，許多醫(yī)院檢驗(yàn)科通常將凝血試驗(yàn)作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，PT 常用于凝血系統(tǒng)外源性和共同途徑的篩選以及口服抗凝劑的療效監(jiān)測(cè)；APTT 常用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)的篩選以及普通肝素的療效監(jiān)測(cè)；而FIB 和TT 不僅是出血性疾病與血栓性疾病的常用篩查指標(biāo)，也用于溶栓治療監(jiān)測(cè)。凝血項(xiàng)目檢驗(yàn)自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化使分析參數(shù)在臨床得到廣泛應(yīng)用，且不同實(shí)驗(yàn)室之間的數(shù)據(jù)有可比性。原裝配套試劑具有可溯源性、結(jié)果穩(wěn)定、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，但試劑、質(zhì)控品和耗材價(jià)格昂貴。而非原裝配套試劑各廠家質(zhì)量參差不齊，因此對(duì)此類(lèi)試劑進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的重要環(huán)節(jié)。

本次對(duì)比試驗(yàn)顯示，B 試劑對(duì)APTT 項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果與進(jìn)口A 試劑無(wú)明顯差異，相關(guān)性好，陽(yáng)性符合率較接近，臨床使用可接受。兩種試劑FIB 項(xiàng)目的參考區(qū)間有差別，相關(guān)性略差，陽(yáng)性符合率相近。雖然兩種試劑PT 和TT 檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性較好，但B 試劑檢測(cè)結(jié)果較A 試劑明顯降低，整體均值偏低，尤其以TT 檢測(cè)結(jié)果差異明顯。兩者的PT 陽(yáng)性符合率存在明顯差異，A 試劑PT 的參考區(qū)間低而窄，其原因有待分析。有研究顯示，PT 檢測(cè)結(jié)果與促凝血酶原激酶和鈣離子的活性和含量有關(guān)［5］。促凝血酶原激酶活性因來(lái)源不同、制備標(biāo)準(zhǔn)不同而存在差異，鈣離子作為啟動(dòng)劑其濃度直接影響各凝血因子的一系列酶促反應(yīng)，因此不同凝血試劑的促凝血酶原激酶活性和鈣離子濃度不同，可導(dǎo)致PT 測(cè)定值存在不同程度差異［6-7］。不同試劑TT 的生物參考區(qū)間有明顯差異，但在各自參考范圍中的陽(yáng)性符合率較接近。影響血凝測(cè)定的因素較多（如儀器精度、標(biāo)本狀況、環(huán)境溫度、試劑和反應(yīng)杯質(zhì)量等），尤其是試劑質(zhì)量，可導(dǎo)致不同品牌儀器及試劑之間的檢測(cè)結(jié)果差異較大，需要各實(shí)驗(yàn)室對(duì)試劑廠商提供的生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，建立適合自己實(shí)驗(yàn)室的生物參考區(qū)間［8］。各實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)儀器、試劑和校準(zhǔn)品等方面各成一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)，不同檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果可能存在明顯差異［9-10］。因本研究未找到TT的醫(yī)學(xué)決定水平，因此未做TT的SE及臨床評(píng)價(jià)。

從成本效益而言，國(guó)產(chǎn)試劑較進(jìn)口試劑有明顯的價(jià)格優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)室在確保質(zhì)量可靠的前提下，可根據(jù)實(shí)際情況選擇具有成本優(yōu)勢(shì)的試劑。

此外本室在日常工作中使用CA-7000 血凝儀檢測(cè)血凝項(xiàng)目時(shí)，發(fā)現(xiàn)溶血、黃疸和脂血樣本對(duì)檢測(cè)結(jié)果仍有一定程度影響，部分甚至影響極為顯著，這與孫德華等［11］發(fā)現(xiàn)的該血凝儀具有良好抗溶血、脂血及黃疸等干擾物質(zhì)能力的研究結(jié)果有差異。

綜上所述，在使用非原裝配套試劑時(shí)，對(duì)試劑進(jìn)行評(píng)估是不可或缺的重要環(huán)節(jié)。通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)可以有效地發(fā)現(xiàn)不同試劑間分析結(jié)果的差異性，評(píng)價(jià)臨床可接受度，不僅能為臨床提供正確可信的結(jié)果，還能降本增效。