鄭州市婦幼保健院（450012）任志敏 陳慧萍 古雅麗

宮頸癌為現(xiàn)今女性群體中較為常見的惡性腫瘤，而宮頸鱗狀上皮病變（squamous intraepithelial lesion，SIL）在其發(fā)病中起到了重要作用[1]。病理學(xué)檢測為SIL診斷中的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但因缺乏客觀依據(jù)，SIL的組織病理學(xué)診斷將受病理科醫(yī)師的主觀性及彼此間可變性因素影響，極易影響診斷結(jié)果，造成誤診或過度治療現(xiàn)象。目前生物學(xué)標(biāo)志物在SIL診斷中逐漸應(yīng)用，可為組織病理學(xué)診斷提供確切信息，其中p16作為抑癌基因，其在細(xì)胞周圍調(diào)控中發(fā)揮了重要作用，Ki-67屬于增殖細(xì)胞標(biāo)記物，免疫組化染色陽性則可判定細(xì)胞增殖活躍[2][3]。鑒于此，本研究將分析p16、Ki-67聯(lián)合應(yīng)用在SIL診斷中的應(yīng)用價值?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2017年1～12月我院治療的宮頸各類病變患者117例作為研究對象，患者自愿參與，人乳頭瘤狀病毒(HPV-DNA)基因檢測、液基薄層細(xì)胞學(xué)（TCT）檢測結(jié)果異常，且經(jīng)蘇木素-伊紅染色(hematoxylin eosin，HE)病理檢測確診為慢性宮頸炎、宮頸上皮鱗狀化生、低級別鱗狀上皮病變(low-grade squamous intraepithelial lesions，LSIL)、CIN1-2、高級別鱗狀上皮病變(high-grade squamous intraepithelial lesions，HSIL) 患者各26例、4例、61例、10例、16例，其中年齡23～76歲，平均年齡（36.85±3.62）歲，入選病例均未實施放、化療治療。

1.2 方法 應(yīng)用免疫組織S-P法對入選者Ki-67、p16蛋白表達(dá)進(jìn)行測定，其中兔抗人單克隆Ki-67抗體、小鼠抗人單體克隆P16抗體均由上?；蚩萍脊煞萦邢薰咎峁?，其中組織陽性對照為確診的陽性鱗癌組織切片。通過半定量方法分析免疫組化染色相應(yīng)細(xì)胞分布與強度，其中陽性細(xì)胞在基底層附近1～2層細(xì)胞分布為“+”；陽性細(xì)胞在上皮內(nèi)＜1/3部位分布為“++”；在上皮內(nèi)＜2/3部位分布為“+++”；在上皮細(xì)胞內(nèi)≥2/3處分布為“++++”。Ki-67陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀，定位于細(xì)胞核，但Ki-67陽性細(xì)胞僅在副基底層、基底層時分布可判定為陰性；若Ki-67陽性細(xì)胞于上皮的上2/3分布則可判定為陽性；p16陽性細(xì)胞呈棕黃色顆粒狀，定位于細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)，但若細(xì)胞核未著色，僅出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)著色可診斷為陰性；宮頸良性病變：Ki-67、p16均為陰性，LSIL（CIN1）：Ki-67（++）、p16（+）和（++）；HSIL（CIN2-3）：Ki-67、p16≥（+++）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)和例數(shù)表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ki-67、p16檢測結(jié)果 通過觀察Ki-67、p16檢測結(jié)果對原病理診斷情況進(jìn)行修訂，其中宮頸上皮鱗狀化生中的4例患者更正診斷1例為HSIL，慢性宮頸炎中的26例患者仍診斷為慢性宮頸炎，LSIL中的61例患者中41例患者為LSIL，其余患者（16例）更正診斷HSIL，CIN1-2中的4例患者更正診斷為為LSIL、6例更正診斷為HSIL，HSIL中的14例患者診斷仍為HSIL，2例患者更正診斷為LSIL，而Ki-67、p16免疫組化染色更正診斷前、后HSIL、LSIL患者占比比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.518，P=0.004）。

2.2 Ki-67、p16診斷效能 LSIL患者中p16檢測均為陰性，陽性率為0.00%（0/51），HSIL病例中僅有1例患者p16檢測呈陰性，其余均為陽性，陽性率為97.30%（36/37），LSIL、HSIL患者中的p16陽性率對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=83.975，P=0.000）。Ki-67在LSIL、HSIL陽性率分別為21.57%（11/51）、67.57%（25/37），LSIL、HSIL患者中的Ki-67陽性率對比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=18.769，P=0.000）。而將Ki-67、p16聯(lián)合用于HSIL檢測中的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值見附表。

附表 Ki-67聯(lián)合p16檢測結(jié)果（%）

3 討論

宮頸癌發(fā)病、進(jìn)展屬于一個漸進(jìn)過程，故強化對癌前病變、早期宮頸癌的診斷及進(jìn)展進(jìn)行預(yù)測極為重要。增殖作為細(xì)胞特別是腫瘤細(xì)胞的主要生物行為，其在惡性腫瘤發(fā)病中發(fā)揮了重要作用，其中與細(xì)胞增殖相關(guān)的標(biāo)志物在腸癌、乳腺癌、胃癌等惡性腫瘤中均有過度表達(dá)現(xiàn)象，而在女性生殖道腫瘤病變中也具備了上述特征[4]。

p16基因?qū)儆诩?xì)胞周期調(diào)控基因，可利用成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白質(zhì)通路而對細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)展進(jìn)行控制。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，若細(xì)胞被HPV-DNA感染，可導(dǎo)致其細(xì)胞中的HPV腫瘤蛋白E7對成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤蛋白質(zhì)功能造成損傷，進(jìn)而可影響轉(zhuǎn)錄因子與其間的結(jié)合作用，促使細(xì)胞增殖失調(diào)，p16蛋白過表達(dá)[5]。Ki-67屬于細(xì)胞增殖標(biāo)志物，而Ki-67分布于宮頸鱗狀上皮部位與SIL病變級別間具有密切聯(lián)系，可作為SIL病變級別判斷中的敏感指標(biāo)，同時其免疫組化檢測也多被臨床用于判斷多種腫瘤的增殖活性中。郭艷敏[6]等研究中將Ki-67、p16用于宮頸鱗狀上皮病變及慢性宮頸炎診斷中，其研究結(jié)果得出，Ki-67、p16聯(lián)合檢測可改善宮頸鱗狀上皮病變及慢性宮頸炎診斷效能，提升病變分級診斷率，是宮頸癌早期篩查的有效手段。本次研究結(jié)果得出，p16、Ki-67在HSIL、LSIL患者中的陽性率對比差異顯著，而將Ki-67、p16免疫組化染色更正診斷前、后的HSIL、LSIL病例占比比較也存在較大的差異性，同時兩者聯(lián)合檢測特異度較高，由此可見，Ki-67、p16可作為SIL診斷中的敏感指標(biāo)，利于對SIL進(jìn)行篩查，并可對SIL分級情況進(jìn)行預(yù)測，以良好判斷SIL病變進(jìn)展，降低漏診、誤診幾率，減少患者過度治療現(xiàn)象。

綜上所述，可將p16、Ki-67聯(lián)合檢測作為SIL中的輔助診斷方法，這利于預(yù)測宮頸病變的進(jìn)展，提升宮頸病變診斷的效能。