丁阿鳳，馬莉莉，胡小露

1.上海市寶山區(qū)羅店醫(yī)院檢驗科(上海201908)；2.上海市寶山區(qū)羅店醫(yī)院藥劑科(上海201908)；3.上海市寶山區(qū)羅店醫(yī)院心內(nèi)科(上海201908 )

隨著人們生活水平的提高及生活方式的改變，高血壓等慢性病的發(fā)生率及病死率呈逐年上升趨勢，在城鄉(xiāng)居民疾病死亡中位于前列。也是心、腦血管疾病的重要致病因子[1]。大量調(diào)查發(fā)現(xiàn)高血壓是一種持續(xù)發(fā)生的、低度的炎癥反應(yīng)狀態(tài)，而炎性狀態(tài)中相關(guān)炎性因子如腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、內(nèi)皮素(Endothelin，ET-1)、一氧化氮(Nitric oxide，NO)及超敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)等在高血壓的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用[2]。高血壓會造成心、肝、腎等靶器官的嚴重損失。其中左室肥厚(Left ventricular hypertrophy，LVH)是導(dǎo)致無心血管疾病的高血壓患者發(fā)生心血管病發(fā)病并因血管疾病死亡的獨立危險因子，是心力衰竭等疾病的早期病變形式[3]。本研究希望利用自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rats，SHR)，探討卡托普利對高血壓大鼠炎性因子的影響及是否可以逆轉(zhuǎn)心室肥厚的不良結(jié)局；并對炎性因子與心室肥厚的相關(guān)性進行研究，并希望利用炎性因子預(yù)測心室肥厚的程度。為卡托普利治療高血壓及其并發(fā)癥提供理論依據(jù)，為預(yù)測心室肥厚提供新的思路。

材料和方法

1 材 料

1.1 實驗動物及飼養(yǎng)條件：從北京維通利華夠買12周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)14只作為SHR對照組，體重220～250 g；常規(guī)對照組選用同為12周齡清潔級SD大鼠7只，體重215～240 g；維持12 h光照和12 h黑暗的晝夜節(jié)律。實驗室溫度:20～25℃，濕度：(50±5)%，自由飲食，自由飲水。小鼠進入實驗室后適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 實驗試劑及器材：卡托普利(Captopril)購自廣州白云山制藥廠；將藥片淹沒、粉碎，用生理鹽水溶解為濃度為2.08 g/L的混懸液，4℃保存待用；TNF-α、ET-1及hs-CRP采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法；ELISA選用武漢華美生物工程有限公司的ELISA試劑盒；NO試劑盒購自于南京建成生物工程研究所；血壓檢測采用ALC-nibp無創(chuàng)尾動脈血壓測定分析儀(上海奧爾科特生物科技有限公司)。

2 實驗方法

2.1 實驗動物分組與處理：14只SHR大鼠和7只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，將SHR大鼠隨機SHR對照組(SHR組，n=7)，卡托普利組(Cap組，n=7)；7只SD大鼠為常規(guī)對照組(CON組)；Cap組給予卡托普利 25 mg/kg，每天一次，持續(xù)12周；SHR組和CON組給予等量的生理鹽水，同樣持續(xù)12周。

2.2 血壓測定：采用ALC-nibp無創(chuàng)尾動脈血壓測定分析儀測大鼠尾動脈收縮壓(清醒狀態(tài)下)，測3次，取其平均值；于干預(yù)后第0周、4周、8周、12周各測1次。

2.3 樣品采集與處理：各組大鼠干預(yù)至第12周后，記錄下大鼠體重，然后大鼠腹腔注射麻藥(2%戊巴比妥45 mg/kg),下腔靜脈取血，3 000 r/min離心10 min，取上清-20℃保存待用。

2.4 心臟重量指數(shù)：將完整心臟用4℃生理鹽水沖洗，洗去血漬，用濾紙吸干水分，稱重，獲得其心臟重量。心臟重量指數(shù)=心臟重量(mg)/大鼠體重(g)，評價左室肥厚程度。

結(jié) 果

1 卡托普利對各組大鼠尾動脈收縮壓的影響 給藥前，SHR各組大鼠收縮壓(SBP)為(226.71±5.64) mmHg；對照組收縮壓為(136.43±4.50) mmHg；SHR大鼠血壓顯著高于對照組(P<0.001)；SHR大鼠給藥后，其血壓隨著時間的延長顯著下降，至第8周后，血壓趨于穩(wěn)定，給予卡托普利的SHR大鼠收縮壓與SHR有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.001),但仍未降至正常對照CON組(圖1)。

注：與CON組相比，*P<0.05；與SHR組相比，#P<0.05

圖1卡托普利對各組大鼠尾動脈收縮壓的影響

2 卡托普利對各組大鼠炎性因子的影響 由表1可見，SHR組大鼠血清TNF-α、ET-1及Hs-CRP水平顯著高于正常對照CON組，SHR組大鼠血清NO水平顯著低于正常對照CON組；在對SHR大鼠給予卡托普利后，SHR組大鼠血清TNF-α、ET-1及Hs-CRP水平顯著降低，NO水平顯著升高，趨于正常對照CON組水平。見表1。

表1 卡托普利對各組大鼠炎性因子的影響

注：與CON組相比，*P<0.05；與SHR組相比，#P<0.05

3 卡托普利對各組大鼠心臟重量指數(shù)的影響 SHR組大鼠心臟重量及體重顯著低于正常對照CON組，而心臟重量指數(shù)卻顯著高于正常對照CON組；在對SHR大鼠給予卡托普利后，雖然體重沒有發(fā)生變化，而心臟重量顯著降低，因此其心臟重量指數(shù)顯著降低，趨于正常對照CON組水平。見表2。

表2 卡托普利對各組大鼠心臟重量指數(shù)的影響

注：與CON組相比，*P<0.05；與SHR組相比，#P<0.05

4 大鼠心臟重量指數(shù)與高血壓大鼠炎性因子的相關(guān)性分析 由表3可以看出心臟重量指數(shù)與TNF-α、ET-1及Hs-CRP有顯著的正相關(guān)(P<0.001)；與NO有顯著的負相關(guān)(P<0.001)。

表3 大鼠心臟重量指數(shù)與高血壓大鼠相關(guān)

5 大鼠心臟重量指數(shù)與高血壓大鼠相關(guān)炎性因子的線性回歸分析 將與心臟重量指數(shù)相關(guān)的炎性因子作為自變量納入線性回歸分析，發(fā)現(xiàn)對心臟重量指數(shù)貢獻的自變量從大到小依次為hs-CRP(1.13)、TNF-α(0.63)、ET-1(0.29)、NO(-0.05)，但從回歸系數(shù)顯著性檢驗的結(jié)果來看，只有CRP與NO兩個自變量進入回歸方程(t=2.92，P=0.01；t=2.23，P=0.41)，線性回歸方程為：心臟重量指數(shù)=1.13×CRP-0.05×NO。

討 論

高血壓是我國最為常見的慢性病之一。也是動脈粥樣硬化、腦血栓及心室肥厚所致的心絞痛、心力衰竭等疾病的重要致病因子。高血壓是一種持續(xù)發(fā)生的、低度的炎癥反應(yīng)狀態(tài)，而炎性狀態(tài)中相關(guān)炎性因子如TNF -α、ET-1及hs-CRP等在高血壓的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵的作用。

自發(fā)性高血壓大鼠SHR是目前國際公認的、最接近人類的高血壓的動物模型，自發(fā)性大鼠發(fā)生心血管疾病的概率很高，導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)病機制，心血管相關(guān)的并發(fā)癥都與人類所患的高血壓相似[4]。有研究發(fā)現(xiàn)，SHR大鼠第3～4周血壓就會持續(xù)升高，12周后達到高峰，7 ～ 8 周時就會繼發(fā)心室肥厚，14 周時已經(jīng)出現(xiàn)明顯的心肌肥厚表現(xiàn)[5]。本研究可以看出，自發(fā)性SHR大鼠血壓顯著高于正常對照組，同時其相關(guān)炎性因子TNF -α、ET-1、hs-CRP及NO發(fā)生明顯變化；此外對大從大鼠心臟重量指數(shù)來看，SHR大鼠已經(jīng)發(fā)生了明顯的心室肥厚。可能是SHR大鼠在長期慢性炎癥狀態(tài)下，心臟受到炎性因子的浸潤，導(dǎo)致心臟在自我平衡中導(dǎo)致心肌細胞肥大，心室肥厚，繼而產(chǎn)生心衰的心血管疾病[6]。

卡托普利為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，不僅能夠降低血壓，改善血流，降低腎小球阻力，卡托普利可以通過降低血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性、抑制血管緊張素Ⅱ的水平升高，降低血壓，改善血流，降低腎小球阻力。同時，能有效抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，舒張血管；還能在血管組織及心肌內(nèi)抑制血管緊張素I的形成，改善心衰患者心功能的作用[7-8]。本研究發(fā)現(xiàn)SHR大鼠在用過卡托普利后其血壓隨著時間的延長顯著下降，至第八周后，血壓趨于穩(wěn)定。同時對SHR大鼠給予卡托普利后，SHR組大鼠血清TNF-α、ET-1及Hs-CRP水平顯著降低，NO水平顯著升高，趨于正常對照CON組水平；同時SHR大鼠心室肥厚炎癥是心肌肥厚的情況有所改善。這可能的原因是：①心臟內(nèi)皮細胞分泌

NO增加，激活了環(huán)GMP(cGMP)-cGMP依賴性蛋白激酶1(PKG)信號通路，進而抑制心肌肥厚[9]；②ET-1的減少，可抑制 PLC-IP3信號通路，減少細胞外Ca2+內(nèi)流，Ca2+濃度減少抑制 MAPK 信號傳導(dǎo)通路，進而改善心肌細胞肥大狀態(tài)[10]；③下調(diào)TNF-α可減少對心肌間質(zhì)纖維化的調(diào)控，改善心肌間質(zhì)重構(gòu)；④Hs-CRP的降低能夠減少心肌細胞增殖，抑制心室重構(gòu)，改善左心室肥厚的現(xiàn)象；另外Hs-CRP的降低可促進內(nèi)皮細胞合成和釋放NO，進而抑制心肌肥厚。因此我們認為卡托普利可以通過改善SHR大鼠的炎性反應(yīng)抑制心肌肥厚的發(fā)生；同時利用相關(guān)炎性反應(yīng)預(yù)測大鼠心室肥厚的程度，為預(yù)測心室肥厚提供新的思路。