丁國玉，宋維彥，姚志剛

（日照職業(yè)技術學院，山東日照 276826）

目前我國水產養(yǎng)殖規(guī)模已位居世界前列，但仍存在養(yǎng)殖飼料原料供應不足和養(yǎng)殖產量不足以滿足社會需要等問題，如遠洋優(yōu)質魚粉資源的短缺導致國內水產飼料業(yè)主要原料仍得不到滿足（Ayyappan和Ahamad Ali，2007），從而不得不依靠非傳統(tǒng)的動植物資源蛋白質。另外，我國是世界上最大的桑樹種植國，有極大的桑葉資源優(yōu)勢和開發(fā)前景（王芳等，2015）。桑葉中富含多種天然活性物質（黃酮、單寧、多糖、植物甾醇和脫氧野尻霉素），能維持動物的正常生長發(fā)育，提高機體免疫機能，具有抗氧化、抗衰老功能，還能維持脂肪和糖類代謝，有利于動物抗病和保健（吳浩和孟慶翔，2010）。經過微生物的一定工藝處理后所得的發(fā)酵桑葉具有促進營養(yǎng)物質消化吸收的作用，同時具有促進畜禽生長、調節(jié)營養(yǎng)物質代謝等作用（許鐠文，2012）。國內外以往研究表明，飼料中添加發(fā)酵桑葉能顯著提高魚類生長性能，并且能有效改善血脂、血糖水平，提高機體抗氧化能力（沈黃冕等，2016）。

作為我國淡水養(yǎng)殖最多的魚類，2017年全國草魚養(yǎng)殖產量超590萬t（2018漁業(yè)年鑒）。目前有關草魚飼料中添加發(fā)酵桑葉的報道還比較少見，本試驗通過對比不同發(fā)酵桑葉添加量對草魚幼魚生長性能，營養(yǎng)組成和血清生化方面的影響，旨在探討發(fā)酵桑葉在草魚飼料中的添加效果，希望能為發(fā)酵桑葉在草魚飼料中的相關應用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料 試驗用發(fā)酵桑品均采摘于同年6～8月份，晾干后粉碎制成桑葉粉（40目）。于試驗室接種植物酵母菌、乳酸菌、芽孢桿菌和固氮菌發(fā)酵48 h，60℃烘干粉碎后制得。試驗用桑葉及發(fā)酵桑葉的基礎營養(yǎng)成分含量如表1。

表1 試驗桑葉營養(yǎng)物質組成 %

按飼料配方設計添加0（對照組）、2.5%、5.0%、7.5%和10.0%的發(fā)酵桑葉，配制成5組等氮等能試驗飼料（粗蛋白質32.14%，粗脂肪4.95%）（表2）。所有飼料原料粉碎后過80目篩，制成1.5 mm粒徑顆粒飼料，風干后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

表2 試驗飼料組成及相關營養(yǎng)水平（干物質） %

1.2 試驗設計和飼養(yǎng)管理 試驗魚選用同一批培育的體重為（15.01±0.12）g的草魚450尾，隨機分為5組，每組3個重復，每個重復30尾魚。在水缸（320 L）中飼養(yǎng)50 d，日投飼量為體重的2%～5%，每天 07：00、11：30、17：30各投喂1次。養(yǎng)殖所用曝氣自來水，試驗期間水溫為（25.1±2.5）℃，pH為7.4±0.4，溶氧含量為5～6 mg/L，氨氮含量＜0.40 mg/L。

1.3 樣品制備與分析 飼養(yǎng)50 d后，禁食24 h稱重，按每個重復取3尾試驗魚用于營養(yǎng)組成測定；取5尾用于靜脈取血，血樣于8000 r/min、4℃條件下離心5 min，收集血清，-20℃保存，24 h內測定完成相關生化指標。飼料抽樣及全魚樣品相關營養(yǎng)指標參照胡靜等（2016）測定方法。血清葡萄糖、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、甘油三酯、總膽固醇均采用試劑盒測定（南京建成生物工程研究所）。

1.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 20.0進行單因素方差分析（one-wayANOVA），采用Duncan’s進行多重比較。所有試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準差”表示，差異顯著水平為P＜0.05。

2 結果分析

2.1 飼料中添加發(fā)酵桑葉對草魚生長性能的影響 發(fā)酵桑葉添加量對草魚幼魚存活率無顯著影響（P＞0.05），試驗各組存活率均保持在95%以上。飼料中添加發(fā)酵桑葉使草魚生長性能（增重率、特定生長率和飼料效率）產生顯著變化（P＜0.05），隨著添加量增加，草魚生長性能逐漸增大，當添加量為7.5%時生長性能最大，且顯著高于對照組（P＜0.05），其他各添加組與對照組無顯著差異（P＞0.05）。當發(fā)酵桑葉添加量達到10%時草魚生長性能出現(xiàn)下降趨勢（表3）。

2.2 飼料中添加發(fā)酵桑葉對草魚營養(yǎng)組成的影響 飼料中添加發(fā)酵桑葉對全魚水分和粗蛋白質含量未產生顯著影響（P＞0.05）；當添加量達到10%時，試驗草魚的全魚灰分含量最大（P＜0.05）；隨著添加量增大，全魚和肝臟的粗脂肪含量出現(xiàn)下降趨勢，當添加量達到10%時，兩者粗脂肪含量都最?。≒＜0.05）；各添加發(fā)酵桑葉的試驗組草魚肌肉的粗脂肪含量未出現(xiàn)顯著變化（P＞0.05）（表4）。

表3 不同發(fā)酵桑葉添加量對草魚生長性能的影響

2.3 飼料中添加發(fā)酵桑葉對草魚血清生化指標的影響 由表5可知，發(fā)酵桑葉對血清葡萄糖含量無顯著差異（P＞0.05），添加發(fā)酵桑葉可以降低總膽固醇、甘油三酯、谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶、低密度脂蛋白含量，最小值均出現(xiàn)在發(fā)酵桑葉添加10%組，且隨著發(fā)酵桑葉添加量的增加，各血清生化指標均出現(xiàn)下降趨勢。

表4 不同發(fā)酵桑葉添加量對草魚營養(yǎng)組成的影響

表5 不同發(fā)酵桑葉添加量對草魚血清生化指標影響 mmol/L

3 討論

本研究中添加發(fā)酵桑葉對草魚生長效果和飼料利用率等方面有一定促進作用，這與以往對印度囊鰓鯰（Mondal等，2011）、巴塔野鯪（Mondal等，2012）和南亞野鯪（Kaviraj等，2013）的研究結果相似，區(qū)別于對羅非魚、大口黑鱸對生長抑制的研究結果。這可能與飼料中發(fā)酵桑葉添加種類和含量、試驗對象、飼料配方等因素有關。由于桑葉發(fā)酵后能有效改善適口性，提高飼料利用率（任元元等，2016），這在一定程度上提高了草魚體生長性能，而添加過多發(fā)酵桑葉也會有抑制草魚生長的趨勢。這與以往在羅非魚和一些畜禽飼料中添加過多發(fā)酵桑葉得出的結論一致（陳文燕等，2015；章學東等，2012）。

桑葉發(fā)酵后的抗營養(yǎng)因子減少，活性成分顯著增加（Feng等，2007）。這可能是本試驗中添加發(fā)酵桑葉后顯著降低魚體和肝臟脂肪含量，以及肝臟指數(shù)的原因。本研究結果中添加發(fā)酵桑葉后還在一定程度上降低了草魚血清中總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白幾個反應脂類代謝的指標，這與以往在羅非魚（陳文燕等，2015）和大口黑鱸（趙鵬飛等，2016）等水產動物的研究一致，從而進一步佐證了發(fā)酵桑葉能對草魚及大多數(shù)水產動物的脂類代謝起調節(jié)作用。

本試驗結果發(fā)現(xiàn)，添加發(fā)酵桑葉后顯著減少了草魚肝臟脂肪含量，監(jiān)測肝功能的兩種酶（谷丙和谷草轉氨酶）活性也出現(xiàn)顯著降低，這進一步證實了發(fā)酵桑葉能改善試驗對象肝臟健康。

桑葉中含有生物堿、DNJ（1-脫氧野尻霉素）以及多種多糖等活性成分，這些活性成分一方面能抑制葡萄糖在動物腸道的吸收（李有貴等，2010），另一方面黃酮類和生物堿能有效調控肝細胞中糖代謝（Hong等，2004），從而實現(xiàn)調節(jié)血糖功效。本試驗結果顯示，發(fā)酵桑葉可降低草魚的血糖含量，這也再次證明發(fā)酵桑葉在魚類血糖方面的調節(jié)作用。

因此，本試驗中飼料添加不超過7.5%發(fā)酵桑葉不會影響草魚的生長和飼料利用效率，同時添加發(fā)酵桑葉有助于草魚脂類代謝和肝臟健康。