河南省焦作市五官醫(yī)院（454000）楊浩

河南省焦作市第二人民醫(yī)院（454000）楊桂強(qiáng)

河南省焦作煤業(yè)（集團(tuán)）有限責(zé)任公司中央醫(yī)院（454000）王國(guó)有

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2017年1月～2018年1月期間接收的60例擬診為真菌性角膜炎患者為例，開(kāi)展臨床對(duì)比研究，分別予以激光共焦顯微鏡檢測(cè)與角膜組織刮片檢測(cè)方式，對(duì)比其圖像特點(diǎn)，男32例，女28例，年齡18～68歲，平均（42.5±4.5）歲；共有患眼60眼，均為單眼，病程4～50d，平均病程（11.5±3.5）d；視力：光感0～0.4，病變范圍為2mm至全角膜，同時(shí)其角膜炎深度為1/5～2/3，角膜深度，其中60例患者均有一定程度的植物外傷，現(xiàn)已通過(guò)植物性角膜外傷診斷，所有患者及家屬均知情同意，具有可比性。

1.2 方法 本次研究分別給予不同檢測(cè)方式，檢測(cè)前，刮取角膜潰瘍組織，將其接種于培養(yǎng)基中，以試管中培養(yǎng)，確保環(huán)境為25℃，放置于溫箱中，孵育5～18d，確定其菌絲與孢子可直接觀測(cè)。具體檢測(cè)方法如下。

1.2.1 角膜組織刮片檢測(cè)方式 給予檢測(cè)前準(zhǔn)備，確保無(wú)菌化標(biāo)準(zhǔn)，選擇鹽酸奧布卡因滴眼液進(jìn)行麻醉，選擇開(kāi)瞼器打開(kāi)眼瞼，并利用一次性手術(shù)圓刀刮取潰瘍，持續(xù)期浸潤(rùn)致密部位，盡量減少對(duì)角膜方向施加壓力，將壞死組織選取，并涂抹于載玻片上，將其鋪開(kāi)，滴KOH液，1～2滴（10ml/L），隨后覆蓋玻片，于顯微鏡下觀察其孢子及菌絲情況[1]。

1.2.2 共同焦激光顯微鏡檢測(cè)方式 儀器選擇HRI-Ⅱ型共焦激光角膜顯微鏡，同時(shí)選擇4g/L鹽酸奧布卡因滴眼液進(jìn)行局部麻醉，選擇開(kāi)瞼器打開(kāi)眼瞼，將患者下頜、前額以托架進(jìn)行固定，隨后在共焦顯微鏡表面涂抹眼部凝膠，調(diào)整微距，指導(dǎo)患者注視集中于前方固定點(diǎn)，選定角膜病灶的情緒圖像，記錄保存，隨后自角膜上皮細(xì)胞層進(jìn)行掃描，以順序逐層掃描，并記錄實(shí)時(shí)圖像信息[2]。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察不同檢測(cè)方式的檢查結(jié)果，其中包括直徑、排列、角膜壞死組織細(xì)節(jié)等情況，通過(guò)對(duì)比兩種檢測(cè)方式的結(jié)果進(jìn)行綜合分析，對(duì)比其臨床檢出率與不同菌絲密度、熒光含量及炎性細(xì)胞密度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均由SPSS20.0數(shù)據(jù)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以（）與百分比進(jìn)行數(shù)據(jù)描述，t檢驗(yàn)計(jì)量資料，x2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測(cè)方式的檢查結(jié)果 經(jīng)研究分析可見(jiàn)，激光共焦顯微鏡檢測(cè)方式中，檢測(cè)出黑暗背景下真菌菌絲結(jié)構(gòu)為強(qiáng)烈反光線(xiàn)型，其直徑為2～4um，且呈現(xiàn)出長(zhǎng)短不一的情況，其排列無(wú)規(guī)律，交錯(cuò)雜亂，部分菌絲有分節(jié)。角膜組織刮片檢測(cè)方式中，其部分菌絲可見(jiàn)其呈現(xiàn)為溶解狀，孢子清晰且呈橢圓形，無(wú)分解，具有折光反應(yīng)。

2.2 不同檢測(cè)方式檢出結(jié)果分析 真菌性角膜炎患者共計(jì)60眼，通過(guò)激光顯微鏡檢出陽(yáng)性52眼，陰性8眼，綜合檢出率為86.7%。通過(guò)角膜組織刮片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其陽(yáng)性確診45眼，陰性15眼，檢出率為75.0%。組間對(duì)比，x2=6.697，P=0.004，激光共焦顯微鏡檢測(cè)方式的檢出率顯著高于角膜組織刮片檢測(cè)方式，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 不同密度、熒光含量、直徑、長(zhǎng)度及炎性細(xì)胞密度情況對(duì)比 通過(guò)臨床研究分析可見(jiàn)，激光共焦顯微鏡檢測(cè)方式與角膜組織刮片對(duì)比均有明顯差異，P＜0.05，詳見(jiàn)附表1、附表2。

附表1 不同密度、熒光含量、直徑、長(zhǎng)度情況對(duì)比（）

附表1 不同密度、熒光含量、直徑、長(zhǎng)度情況對(duì)比（）

菌絲類(lèi)型 密度（n/mm2） 熒光含量 直徑（um） 長(zhǎng)度（um）樹(shù)枝狀 2542.54±135.52 566.54±68.54 - 376.58±87.55線(xiàn)狀 1954.24±155.54 354.27±84.36 3.67±1.05 264.65±84.64段狀 1654.52±203.14 265.67±84.45 4.08±1.65 46.57±84.25真菌孢子 1001.75±186.65 184.67±84.14 16.35±1.32 -t 9.654 10.654 44.681 20.650 P 0.001 0.001 0.001 0.001

附表2 不同炎性細(xì)胞密度對(duì)比（）

附表2 不同炎性細(xì)胞密度對(duì)比（）

菌絲類(lèi)型 炎性細(xì)胞密度（n/mm2）樹(shù)枝狀 38.65±9.67線(xiàn)狀 48.65±8.26段狀 70.67±8.15真菌孢子 108.67±12.67 t 13.648 P 0.001

3 討論

真菌性角膜炎(fungal keratitis，mycotic keratitis)或角膜真菌病(keratomycosis)在臨床上十分常見(jiàn)，同時(shí)又較難診斷，誤診率較高，通常因治療不當(dāng)而造成患者失明。該癥病情頑固，病程冗長(zhǎng)，且近年以來(lái)其發(fā)病率仍在不斷上升，因此，采取一項(xiàng)有效的診斷措施，再完善早期控制效果，是降低病情惡化，避免失明的有效途徑。

經(jīng)臨床研究得知，大部分角膜炎均是由外部感染所致，由于角膜受損，細(xì)菌及病毒侵入角膜，從而誘發(fā)炎癥反應(yīng)，因此，單純用眼過(guò)度不會(huì)引起角膜炎；同時(shí)，角膜炎通常會(huì)出現(xiàn)疼痛、畏光、流淚等嚴(yán)重刺激癥狀，不但存在睫狀充血，同時(shí)伴隨有虹膜充血，嚴(yán)重患者的球結(jié)膜甚至眼瞼都會(huì)發(fā)生水腫[3]。臨床上又將角膜炎分為潰瘍性角膜炎、非潰瘍性角膜炎兩類(lèi)；由內(nèi)因，外因不同因素影響，其疾病表現(xiàn)也存在一定差異，因角膜外傷，細(xì)菌及病毒侵入角膜引起炎癥；同時(shí)，患眼有異物感，刺痛甚至燒灼感；球結(jié)膜表面混合性充血，伴有畏光、迎風(fēng)流淚、視力障礙及分泌物增加等癥狀。角膜炎的危害最主要的是會(huì)使視力或多或少地受到影響，尤以炎癥侵犯瞳孔區(qū)域者更為嚴(yán)重。其次角膜炎的危害是潰瘍愈合后形成的角膜瘢痕不但阻礙光線(xiàn)進(jìn)入眼內(nèi)，并能使角膜表面彎曲度和屈光折射力發(fā)生改變，使物體不能在視網(wǎng)膜上聚焦形成清晰物像，因而視力降低。視力的受累程度完全取決于瘢痕所在的位置，如果位于角膜正中，縱然瘢痕很小但影響視力卻很大。另外，因虹膜血管的炎癥性攣縮，可引起紅眼、流淚、眼瞼痙攣等，嚴(yán)重者角膜混濁，根據(jù)上述分析，細(xì)菌或真菌引起的化膿性角膜炎，將導(dǎo)致不同性狀嚴(yán)重多膿性分泌物；但病毒性角膜炎分泌物并不多，只造成單純性不同程度的視力下降，若病變位于瞳孔區(qū)，則視力下降更明顯。本次研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)激光共焦顯微鏡檢查方式能夠有效提升其臨床檢測(cè)效果，所耗時(shí)間較短，相較于角膜刮片檢測(cè)方式，其具有無(wú)創(chuàng)性?xún)?yōu)勢(shì)，雖具有一定的局限性，但對(duì)病理組織的辨別能力相對(duì)較高，更加容易被臨床接受[4]。

綜上所述，激光共焦顯微鏡檢查與角膜組織刮片檢查方式應(yīng)用于真菌性角膜炎的臨床診斷中各有優(yōu)勢(shì)，相較之下激光共焦顯微鏡檢測(cè)方式具有無(wú)創(chuàng)性、所耗時(shí)間低、診斷率高等優(yōu)勢(shì)，具有更加理想的臨床應(yīng)用前景，綜合兩種檢測(cè)方式的優(yōu)勢(shì)進(jìn)行聯(lián)合診斷，是提升臨床檢測(cè)率的有效途徑，值得進(jìn)一步推廣研究。