高艷梅　趙梅

【摘 要】 目的：對黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留量的可行性進行研究。方法：采用氣相色譜法，檢測器為電子捕獲檢測器（ECD），溫度 300℃;進樣口溫度 250℃，選擇程序升溫，載氣流速是1.5mL/min，恒壓模式，不分流;HP–5色譜柱（30m×0.32mm，0.25μm）;樣品用丙酮、二氯甲烷提取，濃硫酸磺化。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算農(nóng)藥含量，加標(biāo)回收率為94.5%～104.4%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%～1.5%，檢出限為0.061～0.175ng/mL。結(jié)論：此方法可用于測定其有機氯農(nóng)藥殘留量，穩(wěn)定、可靠、簡單、快速。

【關(guān)鍵詞】 氣相色譜法;黃芪飲片;有機氯農(nóng)藥

【中圖分類號】R284.1 【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）14-0044-03

中藥作為傳統(tǒng)藥物，在中國有著上千年的使用歷史。隨著中藥產(chǎn)品的影響力越來越大，中藥材更是受到國際高度關(guān)注。近年來受到國際貿(mào)易中綠色、技術(shù)等貿(mào)易壁壘的影響，中藥產(chǎn)品的出口貿(mào)易現(xiàn)狀不容樂觀。其中，農(nóng)藥殘留是影響中藥材質(zhì)量安全的主要因素，同時也是嚴(yán)重制約我國中藥產(chǎn)品走向國際市場的重要原因，直接影響了中藥在國際市場上的競爭力[1]。

黃芪具有補氣升陽，固表止汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌的功效。不管是用于治病還是用于保健，都越來越受到廣大人民的喜愛，保證其質(zhì)量安全，至關(guān)重要。我國中藥走向國際市場，受到農(nóng)藥殘留問題嚴(yán)重阻礙作用，規(guī)范中藥材種植和管理關(guān)鍵措施，建立有效的農(nóng)藥殘留量測定方法，以此來規(guī)范中藥種植源頭的農(nóng)藥殘留。目前，用于測定食品和中藥材中有機氯農(nóng)藥的方法主要為氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[2-3]。研究采用氣相色譜法分析檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留， 通過方法學(xué)考察， 本方法在實際檢測中穩(wěn)定、可靠、簡單、快速。

1 儀器與材料

1.1 儀器 7890A氣相色譜儀（美國Agilent公司）;KQ-300DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;SC-3610低速離心機（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）;RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海安亭電子儀器廠）;N-EVAP-112氮吹儀（美國Organomation公司）。

1.2 材料 黃芪飲片選自醫(yī)院。滴滴涕（op-DDT，PP′-DDT，PP′-DDE，PP′-DDD）及六六六（γ-BHC，δ-BHC，α-BHC，β-BHC）（混合對照品溶液批號：SB05-068-2018），濃度：100μg/ml;五氯硝基苯（PCNB）（批號：GB05-1845-2018）等對照品都來自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所研制。剩下試劑均是色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 進樣口：250℃;檢測器ECD溫度：300℃;程序升溫：初始溫度60℃，保持0.5min，以每分鐘60℃升到170℃，再每分鐘以10℃升到220℃，保持5min，再每分鐘以1℃升到240℃，再每分鐘以15℃升到280℃;載氣流速是1.5mL/min，高純氮氣（>99.999%），恒壓模式，尾吹流量是58.5mL/min，進樣量是1μL，不分流。

2.2 制備混合對照品溶液 取上述混合對照品溶液和五氯硝基苯，用石油醚稀釋制成分別為10.0μg·mL-1的溶液，作為混合對照品儲備液。取適量混合對照品儲備液，用石油醚分別稀釋成0.0、0.2、0.4、0.6、、0.8、1.0μg/mL的系列混合對照品溶液，用于線性回歸方程。

2.3 制備供試品溶液 取適量黃芪飲片，用中藥粉碎機粉碎，過三號篩，置于100mL燒杯中，稱取約2.0g，加水浸泡過夜，加6g氯化鈉，40mL丙酮，稱重后超聲處理30min，之后將30mL二氯甲烷加入其中，超聲處理15min，加入適量無水硫酸鈉，過濾，將有機相置于100mL燒杯中，靜置4h，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，低溫旋轉(zhuǎn)濃縮至近干，用5mL石油醚溶解，轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，緩緩加入1mL硫酸，渦旋離心10min[4]。取上清液，用0.22μm的微孔濾膜進行過濾，取濾液，即得;同時制備空白溶液，按2.1色譜條件進樣。

2.4 專屬性試驗 分別吸取上述2.2項下的混合對照溶液、2.3項下的供試品溶液及空白溶液，按2.1色譜條件進行檢測分析，經(jīng)分析后顯示，供試品溶液色譜圖與混合對照溶液色譜圖在相對應(yīng)位置存在部分相同保留時間的色譜峰，及部分六六六類和五氯硝基苯（PCNB）有殘留，滴滴涕（op-DDT，PP′-DDT，PP′-DDE，PP′-DDD）未檢出，此外可以看出，空白溶液色譜圖無干擾峰。其各成分的出峰順序如圖1所示。

2.5 線性范圍 精密吸取1μL系列混合對照品溶液，進入氣相色譜儀，每一濃度均進行5次平行測定，以平均峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，計算出線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)。見表1，其表明混合對照品溶液線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 取同一批次供試品（批號：180523），按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果六六六類和五氯硝基苯峰面積的RSD為0.2%～1.0%，表明儀器精密度良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗 取同一批次供試品（批號：181016），按2.3項下的方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、24h時按2.1色譜條件連續(xù)進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果六六六類和五氯硝基苯峰面積的RSD為0.8%～1.5%，表明供試品溶液在24h內(nèi)較穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批次供試品（批號：181110），按2.3項下的方法制備供試品溶液，平行制備6份，按2.1色譜條件進樣測定，結(jié)果六六六類和五氯硝基苯平均含量為0.01～0.05mg/kg，其RSD為0.5%～1.2%，表明重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗 精密稱取9份供試品（批號：181110），加入三種混合對照品溶液（濃度分別為0.2、0.4、0.8μg/mL），每一濃度加三份，各5mL;按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件平行進樣各5次測定。計算回收率。結(jié)果表明回收率為94.5%～104.4%，其RSD（n=6）為0.8%～1.5%。

2.10 供試品含量測定 取5個批次的黃芪飲片，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1色譜條件進樣測定，計算含量。結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 檢出限的確定 根據(jù)測定有機氯農(nóng)藥時的稱樣量、定容體積、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的響應(yīng)值、ECD的靈敏度、空白試樣的噪聲水平等因素來確定每個農(nóng)藥成分的檢出限[5]。本方法采用的試劑為色譜純，減少雜質(zhì)的干擾，提高靈敏度;采用低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，防止有效成分被破壞或損失。配制一系列的低濃度樣品與空白樣品進行信號比較，以信噪比為3：1的量計算出能被可靠地檢測出的被測物最低濃度來確定其檢出限。

3.2 色譜分離條件的優(yōu)化 有文章報道，流速為恒流模式 （1mL/min）;程序升溫： 初始溫度70℃， 保持 1.0min， 以80℃/min升溫至 170℃， 以3℃/min升溫至190℃， 以0.7℃/min? 升溫至 210℃， 以 5℃/min升溫至220℃并保持10min[6]。此色譜條件用于美國安捷倫公司30m×0.32mm，0.25μm的 HP–5色譜柱上，效果很差，部分色譜峰難以分離，分離度小于1.5。本實驗對9種有機氯類農(nóng)藥色譜條件進一步優(yōu)化，選取三個主要因素（程序升溫、色譜柱、流速），進行色譜優(yōu)化試驗，經(jīng)過多種的程序升溫、流速的變化和多個型號的色譜柱（Cpsil8CB、DB-1、DB-50、DB-1701、HP-5）進行分離，綜合色譜圖分離效果，選擇最終色譜條件。本方法建立的色譜條件優(yōu)點在于：第一，采用恒壓模式，峰形平穩(wěn);第二，出峰相對多的地方升溫速率慢，可以很好的分離各色譜峰，出峰相對少的地方，采用快速升溫，確保總體的保留時間較短，同時也能很好的分離色譜峰;第三，末尾采用高溫280℃，可以較好地分離出樣品中殘留的其他雜質(zhì);本方法可以用于20多種農(nóng)藥殘留的分析，且分離效果很好。

3.3 結(jié)果分析 在采集5組樣品中，經(jīng)測定的結(jié)果顯示，均符合《中國藥典》對黃芪藥材規(guī)定（≤0.2mg/kg），以及《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》對飲片、提取物及制劑、植物原料的規(guī)定（≤0.1mg/kg），有機氯農(nóng)藥殘留量均很低。同時在黃芪飲片中，六六六存在3種異構(gòu)體和五氯硝基苯有殘留，而相較于最低檢出限，其它含量均較低并未被檢出。然而針對于有機氯農(nóng)藥殘留量來說，不同批號的黃芪藥材存在的差異較大，可能和黃芪的種植過程有關(guān)，才造成此種現(xiàn)象的出現(xiàn)，另外也可能和氣候等環(huán)境因素有關(guān)，造成農(nóng)藥殘留的積集及轉(zhuǎn)化機制均需進一步研究，并積極的提供一定安全理論依據(jù)用于控制農(nóng)藥殘留，保證其質(zhì)量極其關(guān)鍵。

綜上，實驗建立黃芪飲片中9種有機氯類農(nóng)藥殘留的毛細管氣相色譜測定法，該方法分析時間短，各農(nóng)藥成分分離度良好（R>1.5），從方法的精密度和回收率來看，均能滿足實際分析的需要，并制定了快速，簡便的樣品前處理方法，這對其它中藥材有機氯類農(nóng)藥殘留測定的研究具有一定的參考價值。從樣品的測定結(jié)果看，黃芪藥材中仍有少量的農(nóng)藥殘留，雖然我國早已禁止生產(chǎn)和使用該類農(nóng)藥20多年，這可能與該類農(nóng)藥在環(huán)境中穩(wěn)定性好、半衰期長，不易分解等有關(guān)[7]。有機氯農(nóng)藥會造成慢性中毒，殘效期長，易積蓄，使用歷史長，用量大，對人體危害極大。此次研究檢測結(jié)果均符合要求，且有機氯農(nóng)藥的殘留在大多數(shù)黃芪飲片中均處于國家標(biāo)準(zhǔn)范圍中。

參考文獻

[1]李慧君，張文生，吳潔珊，等.中藥材農(nóng)藥殘留研究現(xiàn)狀[J].中國中藥雜志，2019，44（1）：48-52.

[2]劉芳，歐陽慧子，柴士偉，等.GC法檢測72種中藥飲片有機氯農(nóng)藥殘留量[J].中國藥房，2016，27（36）：5147-5150.

[3]靳貴英，張萬青.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定海藻羊棲菜中的19種有機氯農(nóng)殘[J].中國藥師，2017，20（12）：2173-2176.

[4]靳敏，梁青青，張麗萍，等.蒙古黃芪種植土壤及藥材中重金屬和農(nóng)藥殘留分析[J].中藥材，2015，38（3）：454-456.

[5]萬益群，謝明勇.中草藥中有機氯農(nóng)藥和擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的測定[J].分析化學(xué)研究報告，2005，33（5）：614-618.

[6]李烏云塔娜，云文潔.氣相色譜法測定北沙參中有機氯農(nóng)藥的殘留量[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2018，9（10）：2507-2511.

[7]杜妍，宗凱.氣相色譜法檢測黃芪飲片中有機氯農(nóng)藥殘留量[J].安徽醫(yī)藥學(xué)雜志，2016，20（10）：1857-1860.

（收稿日期：2019-04-30 編輯：劉斌）