闞永軍　施萍萍　蔣暢　趙立　胡娟

【摘 要】 目的：考察不同提取方式對(duì)太子參粗多糖的得率、總多糖含量的影響。方法：采用熱水提取法、超聲提取法和酶提取法分別提取太子參多糖，苯酚硫酸法測(cè)定總多糖含量。結(jié)果：熱水提取法、超聲提取法和酶提取法對(duì)太子參粗多糖得率分別為14.54%、11.12%和17.81%，太子參總多糖含量依次為10.18%、8.68%和10.69%。結(jié)論：綜合考慮提取效率、多糖純度和工藝成本，熱水提取法較為適用于太子參多糖的生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】 太子參;多糖;提取;含量

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）14-0041-03

福建道地藥材太子參在柘榮縣已有近百年的人工栽培歷史，太子參的生產(chǎn)、加工成為當(dāng)?shù)刂е彤a(chǎn)業(yè)。多糖是太子參中重要活性成分之一，研究表明，太子參多糖具抗氧化[1]、免疫調(diào)節(jié)[2]、抗糖尿糖[3-4]、及心肌保護(hù)[5]等多種活性。太子參多糖的高效生產(chǎn)對(duì)于太子參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展尤為重要，在多糖生產(chǎn)過程中，如何在提高提取率的同時(shí)，降低生產(chǎn)能耗和成本，是多糖生產(chǎn)工藝中的難點(diǎn)。

目前，中藥多糖提取方法主要有熱水提取法、酸/堿提取法、超聲波提取法、微波提取法、酶提取法、超臨界萃取法和超高壓提取等，其中熱水提取法工藝成本較低、操作簡單，是最傳統(tǒng)的提取方法;超聲提取具有時(shí)間短、效率高、節(jié)約能耗等特點(diǎn);酶提取法可有效破壞藥材致密的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，促進(jìn)多糖的溶出[6]。本研究分別采用熱水提取法、超聲提取法、酶提取法3種方法提取太子參多糖，比較不同提取方法對(duì)太子參粗多糖的得率、總多糖含量的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-3200型紫外分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）;AE240S電子分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）;KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;Sorall ST 16R高速冷凍離心機(jī)（Thermo Fisher公司）;MOKULYOD-230型冷凍干燥儀（Thermo Fisher公司）。

1.2 材料 太子參藥材購于福建柘榮太子參市場(chǎng);纖維素酶（批號(hào)：20170309）、乙醇（批號(hào)：20170424）、苯酚（批號(hào)：20161018）等購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;硫酸（批號(hào)：160123，西隴化工股份有限公司）;D-無水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：110833-201506，中國食品藥品檢定研究院）。

2 方法與結(jié)果

2.1 多糖的提取

2.1.1 熱水提取法 精密稱取太子參粉末20.00g，加入400mL蒸餾水，回流提取1h，濾渣重復(fù)提取2次，合并3次續(xù)濾液，旋蒸濃縮至約100mL;加入4倍量無水乙醇，4 ℃靜置過夜，離心（4000r/min， 10min），收集沉淀。向沉淀中加入100mL蒸餾水，充分溶解，重復(fù)醇沉1次。收集沉淀冷凍干燥，稱重，計(jì)算粗多糖得率，既得熱水提取法太子參粗多糖。

2.1.2 超聲提取法 精密稱取太子參粉末20.00g，加入400mL蒸餾水，超聲（350W，40℃）提取0.5h，濾渣重復(fù)提取2次，合并3次續(xù)濾液后處理方式同熱水提取法，既得超聲提取法太子參粗多糖。

2.1.3 酶提取法 精密稱取太子參粉末20.00g，加入400mL蒸餾水，加入0.5g纖維素酶55℃浸泡1h，煮沸10min對(duì)酶進(jìn)行滅活，過濾，濾渣重復(fù)提取2次，合并3次提取所得濾液后處理方式同熱水提取法，既得酶提取法太子參粗多糖。

2.2 多糖含量的測(cè)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確稱取D-無水葡萄糖對(duì)照品20.02mg，加蒸餾水溶解，定容至200mL容量瓶中，配制成濃度為100μg /mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mL 置于10mL 的具塞試管中，分別添加蒸餾水至2mL，并且各加5%苯酚溶液1mL，混勻，緩緩加入硫酸5mL，搖勻;沸水浴中加熱20min，取出，置冰浴中冷卻5min。用1mL蒸餾水按同法反應(yīng)作為空白對(duì)照，分別在490nm 波長處測(cè)定吸光度。以葡萄糖濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。并得到回歸方程：y=0.0072x+0.0167，r=0.9991，表明葡萄糖在10.01～90.09μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

2.2.2 精密度試驗(yàn) 精密稱取太子參粗多糖10 mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，精密吸取太子參多糖溶液1mL，共6份，分別置10 mL具塞試管中按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定吸光度，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為3.35%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取太子參粗多糖供試液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法顯色，分別于0、15、30、60、90、120min測(cè)定吸光度，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.72 %，表明在120min內(nèi)樣品具有良好的穩(wěn)定性。

2.2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取太子參粗多糖5份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法顯色，測(cè)定吸光度，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.56%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取太子參粗多糖10.00mg，置于100mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，準(zhǔn)確移取供試液8份，每份5mL，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，分別加入0.5mg/mL葡萄糖溶液0、0.5、1、1.5mL，加超純水定容至刻度，測(cè)定吸光度，計(jì)算含量及回收率，加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.2.6 總多糖的測(cè)定 精密稱取不同提取方法的太子參粗多糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入超純水，超聲溶解，定容。精密吸取各多糖溶液1mL，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各多糖含量。

通過對(duì)不同提取方式得到的粗多糖得率及總多糖含量進(jìn)行對(duì)比（表2），結(jié)果顯示太子參粗多糖得率受提取方法的影響很大，熱水提取法、超聲提取法和酶提取法獲得太子參粗多糖得率分別為14.54%、11.12%和17.81%，粗多糖得率由高至低依次為酶提取法>熱水提取法>超聲提取法。酶提取法所得粗多糖與熱水提取法和超聲提取法相比純度較低。熱水提取法（10.18%）和酶提取法（10.69%）所得太子參總多糖含量相當(dāng)，均高于超聲提取法（8.68%）。

4 討論

研究采用熱水回流提取法、超聲提取法和酶法分別提取太子參多糖，結(jié)果顯示熱水回流和酶法提取所得粗多糖得率高于超聲提取法?；亓魈崛》ㄝ^高的提取溫度有利于提取溶劑進(jìn)入藥材內(nèi)部，增加藥材與提取溶劑的接觸;酶提取法利用纖維素酶分解太子參細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，在一定程度上可以促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)部多糖的溶出和提高太子參中纖維素源多糖的提取率，因此，熱水回流和酶提取法更有利于太子參多糖的高效提取。在實(shí)用性方面，超聲波提取法需要專門設(shè)備，且設(shè)備要求技術(shù)含量較高，不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。酶提取法所需設(shè)備簡捷，操作簡便，但存在提取成本較高和多糖產(chǎn)物純度較低等問題。熱水回流提取法在工業(yè)上已有較成熟的提取設(shè)備，且提取時(shí)間短、提取率高，較為適用于太子參多糖的生產(chǎn)。

該試驗(yàn)采用的室溫條件下超聲提取法對(duì)太子參多糖提取率要低于熱水提取法和酶提取法，說明較高的溫度可能更有利于太子參多糖的溶出，但是高溫的提取環(huán)境容易破壞多糖的空間結(jié)構(gòu)，從而影響其生物活性;而相對(duì)較低的提取溫度，可能會(huì)更好的保持多糖獨(dú)特的性質(zhì)[7]，關(guān)于不同提取條件下太子參多糖生物活性的研究有待進(jìn)一步深入。

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（收稿日期：2019-04-30 編輯：劉斌）