錢蕾 陳陽 皖南醫(yī)學(xué)院 法醫(yī)病理學(xué)教研室 安徽蕪湖 241002

重樓,又名"蚤休",屬華中珍稀瀕危植物【1】,廣泛分布于云南、四川等地,以蚤休之名始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》【2】,味苦、微寒,具清熱解毒、消腫止痛功效,民間多用于治療毒蛇咬傷、流行性腮腺炎,也用于驚風(fēng)抽搐.其主要化學(xué)成分有甾體皂苷、黃酮以及多糖,其中多糖具有降血壓、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)等活性,因此日益成為中藥材評(píng)價(jià)指標(biāo)之一.前期研究表明重樓多糖具有較好的體外活性,對(duì)其提取工藝的研究報(bào)道較少,故本實(shí)驗(yàn)通過熱水浸提法提取重樓多糖,設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提取工藝,優(yōu)選最佳提取條件,為重樓多糖在醫(yī)藥及保健領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù).

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器

小型高速粉碎機(jī)WK-2000A (青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司) SHB-ⅢS循環(huán)水式多用真空泵 (鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司) 酶標(biāo)儀 (美國(guó)Bio-TeK公司) 離心機(jī)SIGMA4K15

1.2 試劑與材料

重樓(安國(guó)藥源商貿(mào)有限公司) 葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品 (色譜純,美國(guó)Sigma-Aldrich公司)

所用試劑均為分析純,水為去離子水 三氯甲烷、正丁醇、無水乙醇

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用改良蒽酮硫酸法, 以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品, 濃度為橫坐標(biāo), 吸光值為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 得線性回歸方程:Y=3.6927X-0.0067,R2=0.9987.

2.2 單因素考察

稱取5份重樓粉末2g,分別按固液比1:20、1:30、1:40、1:50、1:60加入純水,70℃提取2h,提取液補(bǔ)足減失重量,離心、抽濾,稀釋至適當(dāng)濃度用改良蒽酮硫酸法630nm測(cè)吸光度,結(jié)果提取率先增大后減小,1:30最大.

稱取5份重樓粉末2g,加80mL純水,分別40、50、60、70、80℃提取2h,同法測(cè)吸光度,結(jié)果提取率先增大后減小,60℃最大.

稱取5份重樓粉末2g,加80mL純水,70℃分別提取1、1.5、2、2.5、3h,同法測(cè)吸光度,結(jié)果提取率先增大后減小,2.5h最大.

3 正交試驗(yàn)

結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果,設(shè)計(jì)三因素三水平正交試驗(yàn),分別進(jìn)行9組實(shí)驗(yàn).結(jié)合方差分析,對(duì)多糖得率影響最大的是提取時(shí)間,最佳提取條件為,固液比1:30、提取溫度60℃、提取時(shí)間2.5h,此條件下多糖得率為13.91%.

表1 L9(33)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

4 結(jié)論

通過單因素分析,設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),提取時(shí)間對(duì)多糖得率影響最大,PC<0.01,因素C具有極顯著性差異.通過本文研究發(fā)現(xiàn):重樓多糖的最佳提取條件是,固液比1:30、提取溫度60℃、提取時(shí)間2.5h.在此條件下,重樓多糖得率為13.91%.該研究結(jié)果提高了重樓多糖的提取效率,優(yōu)化了提取工藝,為重樓多糖的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù).