申丹

摘 ?要：本文采用高校液相測定了不同儲(chǔ)存期金銀花中2種藥效組分的的含量，流動(dòng)相：0.5%冰乙酸-乙腈，線性梯度洗脫：0～20min（90∶10～78∶22），20～35min（78∶22～76∶24），35～37min（76∶24～65∶35），37～40min（65∶35～90∶10）;固定相為：思普樂C18液相色譜柱（4.6mm×250mm，5μm），檢測波長為327nm和350nm;此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于不同儲(chǔ)存期金銀花中2種藥效組分的測定。

關(guān)鍵詞：金銀花;高效液相;含量

金銀花為忍冬科植物山銀花Lonicara confusa DC.的花蕾或帶初開的花?！镀穮R精要》記載：“金銀花，三月開花，五出，微香，蒂帶紅色，花初開則色白，經(jīng)一、二日則色黃，故名金銀花?！苯疸y花既能宣散風(fēng)熱，還善清解血毒。木犀草苷和綠原酸具有抗炎、抑菌的作用[1-3]。本文采用高校液相測定了不同儲(chǔ)存期金銀花中2種藥效組分的的含量。

1 儀器與試藥

HD-7高靈敏度紫外檢測儀（青浦滬西紫外分析儀）;澤權(quán)Zealpure Classic超純水機(jī)（上海澤權(quán)儀器設(shè)備有限公司）;GY-50高溫循環(huán)油浴（西安禾普生物科技有限公司）;SPR-BW200液相色譜進(jìn)樣瓶專用洗瓶機(jī)（杭州亞萊博儀器有限公司）;SB-80超聲波清洗機(jī)（南京以馬內(nèi)利儀器設(shè)備有限公司）。綠原酸和木犀草苷對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（山西優(yōu)倫多生物科技有限公司）、磷酸（山西優(yōu)倫多生物科技有限公司）、磷酸二氫鉀（德州銳特化工有限公司）、甲醇（四川華源盛泰生物科技有限公司）、甲酸（四川華源盛泰生物科技有限公司）、冰醋酸（四川華源盛泰生物科技有限公司）、三乙胺（四川華源盛泰生物科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果[4-6]，確定色譜條件如下。色譜柱為思普樂C18液相色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）;.5%冰乙酸-乙腈，線性梯度洗脫：0～20min（90∶10～78∶22），20～35min（78∶22～76∶24），35～37min（76∶24～65∶35），37～40min（65∶35～90∶10）為流動(dòng)相;檢測波長為327nm和350nm;流速1.0mL·min-1;柱溫：30℃。理論板數(shù)按木犀草苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取金銀花適量，置于容量瓶內(nèi)，精密加人50%甲醇10ml，超聲處理30分鐘，放冷，過濾，定容至25毫升容量瓶內(nèi)，搖勻，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取綠原酸和木犀草苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成每1mL含綠原酸200μg和木犀草苷20μg的溶液，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密稱取綠原酸、木犀草苷對(duì)照品50.0mg、5.0mg，置25ml容量瓶中，加入流動(dòng)相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL，置于10mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻。依照色譜條件測定，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，綠原酸在100～1000μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系;木犀草苷在10～100μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，分別精密吸取綠原酸和木犀草苷對(duì)照品溶液重復(fù)測定6次，測定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD分別為0.83%和0.86%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別量取樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，RSD值為0.75%，0.81%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2小時(shí)進(jìn)樣測定，供試品綠原酸和木犀草苷峰面積的RSD分別為0.71%和0.76%。結(jié)果表明樣品溶液至少在2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的綠原酸和木犀草苷對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量，計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率分別為99.3%和99.5%，RSD分別為0.86%和0.83%。

2.9 不同儲(chǔ)存期金銀花中2種藥效組分的含量

3 討論

分別考察乙腈-0.1%磷酸溶液（60：40），甲醇-0.1%磷酸（70：30），乙腈一水一甲酸（17：80：0.5），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氫鉀-三乙胺 （60∶40：0.01），甲醇-0.1moloL-1磷酸二氫鉀-三乙胺 （50∶50：0.01），乙腈-0.1%磷酸溶液（50：50），5%冰乙酸-乙腈，線性梯度洗脫，乙腈-磷酸-0.1moloL-1磷酸二氫鉀 （40∶0.01：60）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以5%冰乙酸-乙腈，線性梯度洗脫為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用5%冰乙酸-乙腈，線性梯度洗脫為流動(dòng)相。金銀花在儲(chǔ)存過程中含量有所下降，但儲(chǔ)存24個(gè)月的金銀花還符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

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