摘要：本次實(shí)驗(yàn)主要以克倫特羅為研究對(duì)象，用膠體金免疫層析法對(duì)市場上比較常見的肉制品進(jìn)行克倫特羅含量的快速檢測，根據(jù)檢測結(jié)果互相對(duì)比來評(píng)估市售膠體金檢測卡的性能質(zhì)量，對(duì)它們的重復(fù)性、穩(wěn)定性、假陽性率、假陰性率等進(jìn)行評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：克倫特羅;膠體金免疫層析法;快速檢測;質(zhì)量評(píng)估

克倫特羅于1964年在美國初次面世，而是一種人工合成的β2腎上腺素受體激動(dòng)劑，作為一種呼吸系統(tǒng)藥物臨床用于治療哮喘。在20世紀(jì)80年代初，美國一家公司無意間發(fā)現(xiàn)當(dāng)家禽攝取克倫特羅高出臨床5-10倍的用量時(shí)，能促進(jìn)動(dòng)物生長，強(qiáng)健肌肉，可顯著提高瘦肉率，于是盛行一時(shí)，被大量用作畜禽的促生長劑和飼料添加劑。但是人們很快發(fā)現(xiàn)，克倫特羅對(duì)人體有害。當(dāng)人類大量或長期食用克倫特羅殘留超標(biāo)的肉制品后，會(huì)出現(xiàn)頭發(fā)暈、心慌、四肢出現(xiàn)發(fā)麻、肌肉出現(xiàn)震顫等中毒癥狀，嚴(yán)重的會(huì)出現(xiàn)心臟驟停、昏迷甚至死亡。

目前，“瘦肉精”類藥物國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法主要包括氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）、高效液相色譜法（HPLC）、毛細(xì)管區(qū)帶電泳法（CE）和免疫分析法等。其中GC-MS法能夠在多種殘留物同時(shí)存在的情況下對(duì)某一種特定的殘留物進(jìn)行定量檢測，且檢測靈敏度高、假陽性率低，被國家認(rèn)定為檢測克倫特羅的確證性方法。但是這種方法也有一定的局限性，需要花費(fèi)大量的時(shí)間處理樣品、檢測過程比較繁瑣且需要專業(yè)技術(shù)人員操作實(shí)驗(yàn)儀器，不利于現(xiàn)場快速檢測。毛細(xì)管區(qū)帶電泳法（CE）重復(fù)性好、上樣量極少、操作簡單，能夠快速批量分離和分析離子化樣品，但該方法檢測時(shí)間長，儀器復(fù)雜，需要配套的儀器才可以檢測，現(xiàn)階段使用范圍不廣。膠體金免疫試紙條技術(shù)應(yīng)用于檢測克倫特羅殘留量方面，耗時(shí)短，操作簡單，產(chǎn)品價(jià)廉，可以快速的檢測樣品。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.2克倫特羅含量的檢測

用電子天平準(zhǔn)確稱取1g豬肝，用潔凈的剪刀將豬肝剪成碎塊，放入手動(dòng)玻璃勻漿器中，加入2mL提取液，充分勻漿后，13000rmp離心4min，取上清;再加入2mL提取液，二次提取，13000rmp離心4min，合并兩次上清，用NaOH溶液調(diào)節(jié)PH至7.0，13000rmp離心4min，取上清液待檢。

待檢樣品準(zhǔn)備好后，將膠體金檢測卡從包裝袋中取出，用記號(hào)筆分別為檢測卡編號(hào)。將檢測卡編號(hào)后，擺放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上，用微量移液槍吸取待檢上清液80uL加入益穗環(huán)保檢測卡S孔內(nèi)，5分鐘讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。用微量移液槍吸取待檢上清液100uL加入浩譜爾檢測卡和艾維德檢測卡S孔內(nèi)，10分鐘讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3 試紙條穩(wěn)定性測試

提前6個(gè)小時(shí)將三個(gè)公司的膠體金檢測卡分別在美的冰箱和數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱各放入四張，并將數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱溫度設(shè)置為37℃。待檢樣品準(zhǔn)備好后也分別放入冰箱和烘箱內(nèi)一段時(shí)間，等待測樣品升溫至環(huán)境溫度時(shí)，將檢測卡取出，迅速編號(hào)，編號(hào)見表2.2。編號(hào)后，擺放于實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上，用微量移液槍吸取待檢上清液80uL加入益穗環(huán)保檢測卡S孔內(nèi)，5分鐘讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。用微量移液槍吸取待檢上清液100uL加入浩譜爾檢測卡和艾維德檢測卡S孔內(nèi)，10分鐘讀取實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2 結(jié)果

通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示武漢市大花嶺菜市場購買的豬肉、豬肝不含有克倫特羅;雙匯集團(tuán)生產(chǎn)的雙匯肉花腸中也不曾檢測出克倫特羅。三種檢測卡的靈敏度都為3ug/kg（ppb），且都不曾檢測出陽性樣品，但也不能保證此次檢測的樣品中絕對(duì)不含克倫特羅，因?yàn)槟z體金檢測卡只能定性分析，作為初次篩選的憑證，可能會(huì)存在假陰性樣品，對(duì)有疑問的樣品還需用氣相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行確證。

益穗環(huán)保、浩譜爾、艾維德這三家生產(chǎn)克倫特羅膠體金檢測卡的公司生產(chǎn)的產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定，且抗逆性比較不錯(cuò)，能在較為惡劣的環(huán)境溫度下正常使用。不同公司生產(chǎn)的膠體金檢測卡質(zhì)量參差不齊，在檢測時(shí)，檢測線和質(zhì)控線顯色的先后順序不同，益穗環(huán)保公司生產(chǎn)的膠體金檢測卡先顯C線再顯T線，而浩譜爾公司和艾維德公司生產(chǎn)的膠體金檢測卡先顯T線再顯C線。根據(jù)競爭抑制法原理，應(yīng)是檢測線T線先顯色，然后質(zhì)控線C線才顯色。

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作者簡介：

韓端丹（1980-）女，研究方向：生物技術(shù)與生物制藥