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        布魯氏菌疫苗A19與S2株免疫奶??贵w消長規(guī)律與4種檢測方法比較

        2019-10-21 06:41:06喬波嚴平樂漢橋張健
        畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2019年12期
        關(guān)鍵詞:布魯氏菌病奶牛

        喬波 嚴平 樂漢橋 張健

        摘要:為了解奶牛免疫A19疫苗和S2疫苗后的抗體消長規(guī)律,比較目前地市級實驗室常用的3種血清學(xué)檢測方法的效果,研究分別按廠家說明書對分別對60頭試驗?zāi)膛_M行免疫,使用虎紅平板凝集試驗(RBT)、試管凝集試驗(SAT)和競爭ELISA(cElisa)對免疫前1d至免疫后260d的血清樣品進行檢測。結(jié)果:2組奶牛血清樣品經(jīng)RBT、SAT、cELISA檢測,抗體在28d達到峰值,且在21~56d保持較高水平,A19疫苗組260d仍未全部轉(zhuǎn)陰,S2疫苗組在免疫后140d已全部轉(zhuǎn)陰。A19疫苗的陽轉(zhuǎn)率明顯高于S2疫苗組并且抗體持續(xù)時間更長。

        關(guān)鍵詞:布魯氏菌病;奶牛;A19和S2疫苗;血清學(xué)檢測

        中圖分類號:S855.12

        文獻標(biāo)識碼:B

        doi:10.3969/j.issn.2096-3637.2019.12.001

        0引言

        布魯氏菌?。˙rucellosis)是由布魯氏菌引起的人獸共患傳染病,病原是革蘭氏陰性菌、兼性胞內(nèi)寄生菌[1]。該病以公畜睪丸炎、母畜流產(chǎn)、產(chǎn)奶量下降等為主要癥狀[2]。布魯氏菌進人機體被巨噬細胞吞噬,會有10%以上的細菌在巨噬細胞內(nèi)定植。該菌根據(jù)形態(tài)差異分為粗糙型(rough,R)和光滑型(smooth,S)2種,光滑型具有完整的外膜結(jié)構(gòu),能刺激機體產(chǎn)生針對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)中的O-側(cè)鏈的抗體,粗糙型布魯氏菌沒有O-側(cè)鏈抗原[3]。常用的血清學(xué)檢測方法中虎紅平板凝集試驗(RBT)是以布魯氏菌細胞壁脂多糖上的O鏈抗原作為診斷位點,試管凝集試驗(SAT)抗原檢測光滑脂多糖抗體(S-LPS),ELISA方法主要以光滑型布魯氏菌脂多糖抗原檢測布魯氏菌抗體[4-6]。

        我國常用的布病疫苗包括牛種布魯氏菌A19疫苗、豬種S2疫苗、羊種M5疫苗,均為光滑型[7]。現(xiàn)有的血清學(xué)檢測方法無法區(qū)分野毒株和疫苗株。目前河南省用于奶牛布魯氏菌防控的疫苗為A19株和S2株,這2種疫苗分別通過皮下注射和口服2種方式[8]。研究使用3種常用血清學(xué)檢測方法對A19和S22種疫苗免疫后的抗體消長規(guī)律進行檢測,結(jié)合本地實際探究合適的疫苗和檢測方法。

        1材料與方法

        1.1材料

        1.1.1疫苗

        布魯氏菌病A19株活疫苗,金宇保靈生物藥品有限公司,疫苗批號17942005;布魯氏菌病S2株活疫苗,新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司,疫苗批號2017021。

        1.1.2試劑

        布魯氏菌虎紅平板凝集試驗抗原及陰陽性血清,試管凝集抗原及陰陽性血清購自中國獸藥監(jiān)察所;cELISA試劑盒購自武漢科前公司。

        1.1.3主要儀器

        布病疫苗全封閉連續(xù)投藥器(鄭州靈格公司);酶標(biāo)儀(TECANSUNRISE),瑞士TECAN公司產(chǎn)品;洗板機(ELx50),美國Bio一Tek公司產(chǎn)品。

        1.1.4試驗動物

        某養(yǎng)殖企業(yè)飼養(yǎng),免疫前間隔2周連續(xù)采血3次,經(jīng)虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗和cELISA檢測陰性且經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查無布魯氏菌病感染史的66頭0.5~2歲的奶牛。試驗地點選在隔離圈進行,試驗牛群與其他畜群無直接接觸。1.2方法

        (1)試驗牛隨機分組。見表1。

        (2)免疫方法。將布病活疫苗A19株和S2株按照說明書所標(biāo)注的含菌數(shù)量,用生理鹽水稀釋。皮下注射組奶牛(A19組)用連續(xù)注射器按1mL/頭份注射布魯氏菌A19疫苗,A19對照組皮下注射1mL/頭生理鹽水;口服組奶牛(S2組)用改裝的連續(xù)注射器按2mL/頭灌服布魯氏菌S2疫苗,S2對照組灌服2mL/頭生理鹽水。

        (3)安全性檢測。A19和S2疫苗免疫后7d觀察并記錄奶牛發(fā)熱、呼吸、食欲等狀況。

        (4)分別于免疫前1d和免疫后5、7、14、21、28、

        56、84、112、140、168、196、224、260d采集試驗組和對照組共924份血清,冷凍保存。

        (5)虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗按照GB/T18646-2018進行;cELISA按照試劑盒說明進行。

        2結(jié)果

        2.1疫苗安全性

        疫苗免疫后,A19疫苗組30頭奶牛中有5頭出現(xiàn)發(fā)熱、食欲減退,經(jīng)1~3d均恢復(fù)正常,未見其他癥狀;S2疫苗組未見異常。

        2.2轉(zhuǎn)陽率檢測情況

        對采集的奶牛血清樣品,采用RBT、SAT和cELISA檢測,對照組均為陰性。A19疫苗組與S2疫苗組在免疫21~56d抗體水平維持在較高水平,之后抗體水平隨時間推移逐漸回落。3種血清學(xué)檢測方法均顯示,免疫奶牛后A19疫苗組抗體水平明顯高于S2疫苗組,抗體產(chǎn)生速度更快,持續(xù)時間更長,見圖1。

        2.3A19免疫牛群3種血清學(xué)方法陽性率

        A19疫苗免疫后,應(yīng)用RBT、SAT和cELISA方法檢測顯示免疫后28d所有動物均為陽性,陽轉(zhuǎn)率達到100%,說明此時奶牛機體內(nèi)抗體水平達到最高水平。免疫84d后,抗體水平開始出現(xiàn)下降,cELISA較RBT和SAT檢測抗體持續(xù)時間更長,表現(xiàn)出更好的靈敏性。見表2。

        2.4S2免疫牛群3種血清學(xué)方法陽性率

        S2疫苗免疫后,應(yīng)用RBT、SAT和cELISA方法檢測顯示免疫后抗體轉(zhuǎn)陽率始終低于30%,免疫后168d3種檢測方法均未檢測陽性血清。見表3。

        3討論

        我國現(xiàn)有的A19疫苗是20世紀(jì)50年代從蘇聯(lián)引進的未缺失序列的S19株,毒力強于S2疫苗株,該毒株不適用于懷孕動物和公畜:免疫懷孕奶牛可引起1%~2.5%的流產(chǎn)和公畜持續(xù)睪丸炎[9]。S2疫苗是中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所于1960年從豬胚篩選出的豬種布氏菌2號弱毒菌株,安全性較好,孕期家畜仍可使用[10]。目前認為清除胞內(nèi)寄生菌主要依賴于細胞免疫,但是布魯氏菌細胞免疫水平的檢測尚不成熟,抗體水平通常與細胞免疫水平呈正比,可在很大程度上反映細胞免疫水平[11]。

        結(jié)果表明,A19疫苗能刺激奶牛產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答,陽轉(zhuǎn)率和抗體持續(xù)時間明顯優(yōu)于S2疫苗,對奶牛免疫效果較好。在免疫方法上,口服法使用布病疫苗雖使用全封閉連續(xù)投藥器,但對牛的保定和人員的操作水平有一定要求,實際免疫劑量和外泄數(shù)量較難控制。相比之下,皮內(nèi)注射操作更為方便,免疫劑量更易控制。結(jié)合試驗數(shù)據(jù)和2種疫苗的特點,建議本地區(qū)牛場有選擇的使用2種疫苗:育成牛和產(chǎn)后母牛選擇A19疫苗,孕牛選擇S2疫苗。在免疫程序上可采取犢牛3~6月齡首免A19疫苗,6~8個月后加強免疫1次,此后及時監(jiān)測抗體水平,根據(jù)需要每年加強1~2次;S2疫苗在使用時間隔3~4個月加強1次免疫。4結(jié)論

        對比RBT、SAT.cELISA檢測可知,RBT在2種疫苗免疫后5~28d敏感性高于另外2種檢測方法。SAT在免疫后檢測到抗體峰值水平的時間較兩者晚且操作復(fù)雜、費時,判斷時對操作人員的要求較高。cELISA表現(xiàn)出較SAT更好的敏感性,結(jié)果判定時人為誤差較小,操作更為方便。根據(jù)試驗結(jié)果并結(jié)合實際工作中的應(yīng)用,建議在進行實驗室檢測中使用RBT方法進行初篩,用SAT或cELISA進行確診。

        參考文獻

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        [3] Cloeckaert A, Grayon M, Verger JM, et al. Conservationof seven genes involved in the biosynthesi-s of the lipopolysaccharide O-side chain in Brucellaspp. [J]. ResMicrobiol, 2000, 151:209-216.

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        [7]錢晶、犬布氏桿菌菌殼疫苗株的構(gòu)建及實驗免疫研究[D].長春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué),2014.

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        [10]李建玲,李愛巧,楊啟元,等、烏魯木齊牛羊布魯氏菌疫.苗免疫效果對比試驗[J].中國動物檢疫,2013,2(4):47-49.

        [11]景志剛,嚴家瑞,范偉興、布魯氏菌病疫苗研究進展[J].中國人獸共患病學(xué)報,2016,32(2):188-199.

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