林小柯　楊伊莉　葛彬潔　吳佳紅　高紅　茅范心

摘 要：目的：研究組織破碎法提取蓮蓬中原花青素的工藝。方法：以蓮蓬中原花青素得率為評價指標，通過單因素和正交試驗確定組織破碎法提取蓮蓬中原花青素的最佳工藝。結果：組織破碎法提取蓮蓬中原花青素的最佳工藝技術如下，乙醇濃度50%、液料比為1∶12、提取時間為4 min，提取電壓為50 V。結論：組織破碎法提取蓮蓬中花青素具有高效、省時、提取率高的特點。

關鍵詞：組織破碎法;蓮蓬;原花青素

原花青素是一類天然多酚類化合物，作為保健食品，其不僅是國際上公認的較強的抗氧劑，同時具有抗衰老等多種功能，被稱為口服的化妝品。目前，原花青素主要為葡萄籽、藍莓及法國海岸松樹皮提取物，價格較為昂貴，有研究報道稱蓮蓬中含有較為豐富的原花青素，在蓮的加工過程中，蓮蓬作為廢棄物常常被丟棄，因此研究蓮蓬中的原花青素具有較強的現(xiàn)實意義[1-2]。

文獻報導了利用超聲、微波、雙酶法等技術提取蓮蓬中原花青素的工藝研究，各提取方法各具優(yōu)缺點[3-5]。組織破碎提取法是一種依靠超分子滲濾技術，通過粉碎、攪拌、振動等外力作用，在溶劑存在的條件下破壞植物細胞組織，達到高效提取的新型提取技術，其對多酚類等熱敏感物質的提取具有一定的優(yōu)勢[6]。本研究采用組織破碎提取法提取蓮蓬中的原花青素，以期為蓮蓬中原花青素的開發(fā)提供參考。

1 儀器與試藥

組織破碎提取器（西安太康生物科技有限公司），721型紫外可見分光光度計（上海奧析科學儀器有限公司），原花青素對照品（純度為98%，購自南京廣潤生物制品有限公司），蓮蓬（采摘于金華武義縣）。

2 方法與結果

2.1? 原花青素測定方法的建立

2.1.1? 原花青素標準曲線的繪制

精密稱取原花青素對照品29.1 mg，置50 mL棕色量瓶中，用乙醇溶解定容得原花青素對照品溶液（0.58 mg/mL）。分別精密量取原花青素對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0 mL和4.0 mL，置10 mL量瓶中，用乙醇分別定容，得濃度為0.029、0.058、0.116、0.174 mg/mL和0.232 mg/mL的對照品溶液。

精密吸取上述對照品溶液各1.0 mL和9.0 mL反應混合液（正丁醇-濃鹽酸-10%硫酸鐵銨溶液=83∶6∶1），置10 mL刻度試管中，用塞子塞緊，搖勻，置沸水浴中加熱40 min，立即取出，于冰水中快速冷卻4～5 min，取出，室溫放置10 min，以空白試劑于550 nm處調零，測定吸光度。以濃度C為橫坐標，以吸光度A為縱坐標，得回歸方程：A=3.506 8C+0.014 5，R2=0.998 3。原花青素在0.029～0.232 mg/mL范圍內有良好的線性關系。

2.1.2? 原花青素得率

取新鮮蓮蓬，洗凈后在涼處陰干，預處理后剪碎，按一定的料液比加入50%的乙醇溶液，按組織破碎法提取后，過濾得蓮蓬各提取液。取樣品溶液測定550 nm處的吸光度。根據(jù)原花青素回歸方程計算供試品溶液中的原花青素，得率計算公式：得率=提取液中原花青素質量/蓮蓬投料量×100%

2.2? 組織破碎提取工藝單因素試驗

2.2.1? 料液比的影響

取處理過的蓮蓬各30 g，分別按料液比1∶6、1∶8、1∶10、1∶12及1∶14的比例加50%乙醇液進行提取，提取電壓為50 V，提取時間3 min，得到各提取液樣品，按“2.1.2”中的方法計算原花青素得率，重復3次。結果顯示，原花青素得率隨料液比的增加有所提高，但當料液比達到1∶10時，原花青素得率趨于平穩(wěn)。故把1∶8、1∶10、1∶12的料液作為因素水平。

2.2.2? 提取時間的影響

取處理過的蓮蓬各30 g，按1∶10的料液比加入50%乙醇液進行提取，提取電壓50 V，提取時間分別為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 min及7.0 min，得到各提取液樣品。按“2.1.2”的方法計算原花青素得率，重復3次。結果顯示，隨著提取時間的增加原花青素得率提高，當提取時間為4 min時，原花青素得率最高;然后隨著提取時間的增加，原花青素得率下降，故把提取時間3.0、4.0 min和5.0 min做為因素水平。

2.2.3? 提取電壓的影響

取處理過的蓮蓬各30 g，以1∶10的料液比加入50%的乙醇，提取時間為3.0 min，提取電壓分別為30、40、50、60、70 V及80 V，得到各提取液樣品。按“2.1.2”的方法計算原花青素得率，重復3次。結果顯示，當提取電壓在30～50 V時，原花青素的得率隨著電壓的增大而提高，當提取電壓在50～80 V時，隨著提取電壓的增長，得率變化不大，這表明當提取液處于50 V時，蓮蓬中的原花青素已基本提取完，故把提取電壓40、50 V與60 V做為因素水平。

2.3? 組織破碎提取工藝正交試驗

根據(jù)上述單因素試驗，以原花青素得率為指標，選取料液比（A）、提取時間（B）、提取電壓（C）作為考察因素，以表1中的因素水平進行L9（33）正交實驗。

正交試驗結果表明，利用組織破碎法提取蓮蓬中原花青素的實驗中，各因素對得率的影響次序為：料液比>提取電壓>提取時間，各因素的最佳組合水平為A3B2C2，即組織破碎法提取蓮蓬中的原花青素最佳取工藝技術為：液料比為1∶12、提取時間為

4.0 min，提取電壓為50 V。

2.4? 組織破碎法與傳統(tǒng)提取方法的比較

常用的提取原花青素的方法是回流提取法（500 W電熱套，50%乙醇提取2次，提取時間為2.0、1.5 h，提取溫度為60 ℃），與組織破碎提取法進行比較，結果見表2。

從表2可知，組織破碎法比回流提取法的原花青素得率提高了17%，提取時間僅為回流提取法的1.9%，在電量的消耗上，僅為回流提取法的2.9%。從以上3方面的比較可得出，組織破碎法對蓮蓬中原花青素的提取具有節(jié)能、省時、高效的特點。

3? 討論

組織破碎法是利用超分子滲濾原理，使植物細胞內的化學成分與細胞外部的溶劑充分接觸，以時有效成分快速溶解、轉移至溶劑中。本實驗結果證實，用組織破碎法提取蓮蓬中原花青素具有一定的優(yōu)勢，值得推廣。

參考文獻

[1]陳夢雨，黃小丹，王釗.植物原花青素的研究進展及其應用現(xiàn)狀[J].中國食物與營養(yǎng)，2018（3）：55-59.

[2]余修亮.蓮副產(chǎn)物中原花青素的結構、抗氧化活性及降脂作用的研究[D].南昌：南昌大學，2017.

[3]梁祖培，張燕，熊波.天然植物中原花青素提取和純化方法研究進展[J].食品安全質量檢測學報，2017（9）：201-208.

[4]尹浩，陳婭，陶濤，等.蓮房原花青素低聚體納米脂質體的制備及其穩(wěn)定性、抗氧化性分析[J].食品科學，2018，39（10）：97-105.

[5]李媛，張友維，盧菁.響應曲面法優(yōu)化蓮房原花青素提取工藝研究[J].農(nóng)業(yè)與技術，2015，35（14）：9.

[6]李精云，劉延澤.組織破碎提取法在中藥研究中的應用進展[J].中草藥，2012，42（10）：2145-2149.