呂明亮，陳再鳴，薛振文，李伶俐，應(yīng)國華**

（1.麗水市林業(yè)科學(xué)研究院，浙江 麗水 323000；2.浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310058）

香菇（Lentinula edodes） 菌種是香菇生產(chǎn)的重要生產(chǎn)資料，菌種種源對香菇栽培有著舉足輕重的作用，研究香菇種源菌種保存技術(shù)對香菇生產(chǎn)具有重要的意義。當(dāng)前我國大部分產(chǎn)區(qū)香菇菌種生產(chǎn)還處于小作坊分散式生產(chǎn)，種源菌種保存技術(shù)相對落后，在實(shí)際生產(chǎn)中利用冰箱保存比較普遍[1]，通過對該保存方式的種源菌種進(jìn)行出菇栽培試驗(yàn)，探討種源母種不同保存期對栽培效果的影響，為香菇種源菌種保存利用提供參考。

1 材料與方法

香菇種源菌種：香菇L808，來自麗水市大山菇業(yè)研究開發(fā)有限公司，具體見表1。菌種保存方法：試管PDA斜面培養(yǎng)基（20 mm×200 mm），菌種長滿培養(yǎng)基后，將試管棉塞蘸溶化石蠟封口。在家用冷藏箱，用水銀溫度計(jì)實(shí)測溫度4℃～5℃下保存。保存的試管菌種經(jīng)過轉(zhuǎn)管1次培養(yǎng)活化后，進(jìn)入正常的菌種擴(kuò)繁栽培試驗(yàn)。

試驗(yàn)地概況：浙江省麗水市城郊，海拔60 m左右。

表1 參試香菇L808種源菌種Tab.1 Test of Lentinula edodes L808 strains of provenances

1.1 菌種擴(kuò)繁

2017年4月6日用試管母種接種菌種瓶原種，生產(chǎn)種用規(guī)格為15 cm×32 cm×0.005 cm的聚乙烯菌種袋裝料，高壓滅菌，冷卻后于6月19日接種生產(chǎn)種，在7月4日～7月20日測量菌絲生長速度。

1.2 試驗(yàn)菌棒生產(chǎn)和培養(yǎng)

用雙袋法制棒，內(nèi)層為保水袋，外層為常規(guī)聚乙烯筒袋，外筒袋規(guī)格為15 cm×55 cm×0.005 cm。栽培棒基質(zhì)配方：雜木屑79%、麩皮20%、石膏粉1%。常壓滅菌，冷卻后于接種箱中接種。生產(chǎn)棒各菌株在9月1日接種，接種后套上外套袋于室外蔭棚下常溫培養(yǎng)，于9月18日～9月25日測量各菌株的菌絲生長距離。

按照參考文獻(xiàn)[2]的方法進(jìn)行培養(yǎng)出菇管理，根據(jù)發(fā)菌情況，菌種L808-1菌棒于10月25日脫去外套袋，刺孔，L808-12于11月1日刺孔，菌種L808-11菌棒在11月3日基本發(fā)滿，于11月6日刺孔。刺孔用滑落式機(jī)械自動(dòng)刺孔機(jī)，每棒刺孔數(shù)為50個(gè)左右。孔大小為0.5 cm×0.5 cm，深約2.5 cm。

1.3 出菇管理

各菌株制作試驗(yàn)菌棒150棒，各選取無污染菌棒90棒，以30棒為1個(gè)小區(qū)，重復(fù)3次。12月14日在層架上排放（天氣為陰天），做好標(biāo)記后脫袋管理，只脫去外袋，留下保水袋。主要管理是濕度管理，氣溫低于15℃時(shí)，每天中午噴水1次，到3月份，氣溫升高，改為早上和傍晚各噴水1次。每天察看，采收8分～9分成熟香菇子實(shí)體，對鮮菇稱重記錄。于1月2日對采收的菇體抽樣測量子實(shí)體外觀，拍照。

分別在1月11日第1次注水。2月27日第2次注水。于3月21日，第3次注水。到4月20日采菇結(jié)束。

2 結(jié)果

2.1 菌絲生長情況

分別對生產(chǎn)種菌包（7月4日～7月20日） 和生產(chǎn)菌棒（9月18日～9月25日） 的菌絲生長速度進(jìn)行調(diào)查和統(tǒng)計(jì)，如表2、表3所示。

表2 生產(chǎn)種菌絲生長速度比較Tab.2 Comparison of the growth rate of spawn mycelia

表3 菌棒菌絲生長速度比較Tab.3 Comparison of the growth rate of artificial log mycelia

與對照相比，在香菇菌種的生長前期，經(jīng)過低溫保存的菌種菌絲生長較緩，到中后期二者菌絲生長基本接近，趨于一致。這可能是由于只通過一次轉(zhuǎn)管斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌絲活化不夠充分。但在生產(chǎn)棒菌絲培養(yǎng)階段，各菌株的菌絲生長速度已相近。

前期菌種L808-1在培養(yǎng)基中萌發(fā)生長較快，于10月25日滿袋，菌種L808-11、L808-12后期發(fā)菌速度也較快，滿袋時(shí)間在10月28日～10月30日，差距在5 d以內(nèi)。

2.2 轉(zhuǎn)色出菇情況

從菌棒的轉(zhuǎn)色出菇觀察，刺孔放氣后菌棒的轉(zhuǎn)色期基本相近，脫袋后于12月29日～12月30日達(dá)到第一潮菇的出菇高峰期，各菌種間無明顯的差異。但菇形色澤上稍有差別，見圖1～圖3。

圖1 菌種L808-1的出菇情況Fig.1 Production of L808-1 strain

圖2 菌種L808-11的出菇情況Fig.2 Production of L808-11 strain

圖3 菌種L808-12的出菇情況Fig.3 Production of L808-12 strain

從第一潮出菇情況看，出菇后，菌種L808-1菇體菌柄粗短，菌蓋表面色澤較深，而菌種L808-11與L808-12的菇體菌柄細(xì)長，且菌蓋表面的色澤較淺。

2.3 產(chǎn)量

12月20日開始少量采菇，到4月25日采收結(jié)束。對香菇產(chǎn)量采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析差異顯著性，各菌種栽培的平均單棒產(chǎn)量數(shù)據(jù)如表4所示。

從整個(gè)生長周期的香菇產(chǎn)量來看，經(jīng)過低溫保存后的香菇菌種，3個(gè)重復(fù)栽培的平均產(chǎn)量有所下降，菌種L808-1與L808-11間有顯著差異，其他菌種間無顯著差異。

2.4 子實(shí)體外觀指標(biāo)

表4 不同菌種的平均單棒產(chǎn)量比較Tab.4 Comparison of the average yields of different strains

隨機(jī)抽取30個(gè)子實(shí)體，測量每個(gè)菇體的單菇重、菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄長度、菌柄直徑的平均值，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如表5所示。

表5 不同菌種子實(shí)體外觀性狀Tab.5 Fruiting body characteristics of different strains

從表5統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，隨著菌種保存時(shí)間的延長，子實(shí)體的單菇重明顯下降，菌蓋直徑減小，菌蓋厚度無明顯差異，菌柄長度變長，菌柄直徑變小，菌蓋直徑與菌柄長度比值變小。從各數(shù)據(jù)的變化，基本反映了香菇種源菌種隨著保存時(shí)間的延長，其菌種栽培時(shí)的農(nóng)藝活力的下降，香菇子實(shí)體外觀性狀的退化趨勢。

3 結(jié)論

通過本試驗(yàn)，香菇種源菌種用冰箱經(jīng)過低溫保存（4℃～5℃），對香菇產(chǎn)量和子實(shí)體的外觀性狀有一定的負(fù)面影響，特別是子實(shí)體的外觀性狀指標(biāo)與保存期長短具有相關(guān)性。

經(jīng)過一定保存期的香菇菌種，使用時(shí)要充分活化，有利于菌絲活力的恢復(fù)，與蔡令儀等[3]的研究結(jié)果相符。保存后的菌種在投入生產(chǎn)前需要經(jīng)過栽培試驗(yàn)評價(jià)。