周曉紅，李永明，李莎，滕欣麗

1佳木斯市腫瘤醫(yī)院腫瘤科，黑龍江佳木斯154007

2佳木斯大學(xué)解剖教研室，黑龍江佳木斯154007

胃癌是全球第四大常見惡性腫瘤，也是全球腫瘤相關(guān)死亡的第二大常見原因，每年約有70萬人死于胃癌[1]。盡管胃癌的早期診斷率不斷提高，但仍有部分患者屬于進(jìn)展期胃癌患者[2]。目前，進(jìn)展期胃癌仍然被認(rèn)為是致命性的惡性腫瘤，且其預(yù)后難以被準(zhǔn)確地評(píng)估。因此，探尋用于胃癌個(gè)體化治療和預(yù)后評(píng)價(jià)的分子生物標(biāo)志物具有重要意義。微小RNA（microRNA，miRNA）是一類在動(dòng)植物中廣泛存在的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，長(zhǎng)度為18～25個(gè)核苷酸，miRNA與信使RNA（messenger RNA，mRNA）的 3'非翻譯區(qū)相結(jié)合，導(dǎo)致mRNA降解或轉(zhuǎn)錄后翻譯抑制，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)[3-4]。miRNA參與腫瘤的多種生物學(xué)過程，包括增殖、分化、侵襲和凋亡等，作為原癌基因或抑癌基因在多種類型腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[5]。盡管在胃癌中已觀察到多種miRNA的異常表達(dá)，但尚未確定關(guān)于胃癌的確切發(fā)病機(jī)制[6]。miRNA-133b最初被認(rèn)為是心肌特異性miRNA，可以調(diào)控成肌細(xì)胞的分化、肌源性相關(guān)疾病的發(fā)生和骨骼肌的發(fā)育[7]，然而，有研究表明，miRNA-133b也表達(dá)于除心肌以外的組織中，尤其是其在非肌源性相關(guān)疾?。ㄈ缧牧λソ摺⑿呐K肥大、帕金森?。┲邪l(fā)揮著重要的作用；另外，miRNA-133b在多種腫瘤（如頭部腫瘤、頸部腫瘤、口腔腫瘤、食管鱗狀細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌和結(jié)直腸癌）中的表達(dá)下調(diào)[8]。目前，關(guān)于miRNA-133b在胃癌中的表達(dá)情況與胃癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究較少見。本研究探討了miRNA-133b在人胃癌細(xì)胞MKN-1中的表達(dá)情況及其對(duì)人胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并分析了其在胃癌組織中的表達(dá)情況與胃癌患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2015年6月佳木斯市腫瘤醫(yī)院收治的胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)腫瘤細(xì)胞學(xué)或組織學(xué)證實(shí)為胃癌；②行胃癌根治手術(shù)；③術(shù)前未接受過放療、化療等抗腫瘤治療；④未合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；⑤臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并精神類疾??；②合并心、肺等其他臟器功能障礙；③合并自身免疫系統(tǒng)疾病；④存在嚴(yán)重的營(yíng)養(yǎng)不良。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入80例胃癌患者，其中男45例，女35例；年齡為26～69歲，平均年齡為（58.31±10.0）歲。收集80例同一胃癌患者經(jīng)手術(shù)切除的胃癌組織標(biāo)本、癌旁組織（2cm＜距腫瘤切緣＜5cm）標(biāo)本和正常胃黏膜上皮組織（距腫瘤切緣≥5cm）標(biāo)本，標(biāo)本均在外科手術(shù)室獲得，所取組織均經(jīng)病理科醫(yī)師復(fù)核。將所有樣品快速冷凍于液氮中，并保存于-80℃的溫度下，以待后續(xù)檢測(cè)。收集患者的吸煙史、腫瘤直徑、浸潤(rùn)深度、臨床分期（參照第7版美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)標(biāo)準(zhǔn)[9]進(jìn)行分期）等臨床資料。

1.2 細(xì)胞、試劑和儀器

人胃癌細(xì)胞MKN-1、人正常胃黏膜細(xì)胞GES-1均購(gòu)自上海研生實(shí)業(yè)有限公司。RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；胰蛋白酶、青霉素-鏈霉素、胎牛血清均購(gòu)自浙江天杭生物科技股份有限公司；miRNA-133b模擬物（miRNA-133b mimics）、miRNA-133b陰性對(duì)照（negative control，NC）及轉(zhuǎn)染試劑、miRNA-133b及內(nèi)參U6的上下游引物均購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司；Trizol試劑、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）試劑盒和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒均購(gòu)自日本Takara公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白定量試劑盒、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2相關(guān)X蛋白（B-cell lymphoma/leukemia-2 associated X protein，BAX）、cleaved胱天蛋白酶3（cleavedcysteinyl aspartate specific proteinase 3，cleaved caspase 3）單克隆抗體和辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗鼠免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）（二抗）均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；酶標(biāo)儀和PCR儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；二氧化碳（CO2）培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)SIM公司；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒購(gòu)自上海恒斐生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)將人胃癌細(xì)胞MKN-1、人正常胃黏膜細(xì)胞GES-1培養(yǎng)于含10%胎牛血清、1%青霉素和1%鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。

1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組轉(zhuǎn)染前24 h，用胰蛋白酶將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞MKN-1進(jìn)行消化，以細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行重懸并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以2×105/m2的密度接種于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞融合度達(dá)80%左右時(shí)，參照LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒說明書中的方法將miRNA-133b mimics及miRNA-133b NC分別轉(zhuǎn)染至人胃癌細(xì)胞MKN-1，并分別作為miRNA-133b mimics組和miRNA-133b NC組，將僅加入轉(zhuǎn)染試劑LipofectamineTM2000的人胃癌細(xì)胞MKN-1作為對(duì)照組。將人胃癌細(xì)胞MKN-1轉(zhuǎn)染miRNA-133b mimics和miRNA-133b NC后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，采用qRT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中miRNA-133b的相對(duì)表達(dá)量，并驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率；繼續(xù)培養(yǎng)72 h，提取細(xì)胞總蛋白，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 qRT-PCR法檢測(cè)miRNA-133 b的相對(duì)表達(dá)量轉(zhuǎn)染后，采用Trizol試劑按照說明書的步驟從待測(cè)的3種組織或細(xì)胞中提取總RNA。采用酶標(biāo)儀檢測(cè)其濃度及質(zhì)量，采用qRT-PCR反轉(zhuǎn)錄試劑盒將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行PCR。在PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)擴(kuò)增，PCR的反應(yīng)條件：95℃30 s；95℃5 s，60℃34 s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。qRT-PCR引物序列：miRNA-133b上游引物為5'-TTTGGTCCCTTCAACCA-3'，下游引物為5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'；U6的上游引物為5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，下游引物為5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。以ABI7500實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，建立PCR產(chǎn)物的熔解曲線，以U6為內(nèi)參基因，采用2-△△CT法分析，進(jìn)行半定量比較。計(jì)算各組織和細(xì)胞中miRNA-133b的相對(duì)表達(dá)量。

1.3.4 CCK-8法檢測(cè)胃癌細(xì)胞的增殖情況取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的miRNA-133b mimics組、miRNA-133b NC組和對(duì)照組的人胃癌MKN-1細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于96孔板中，每孔100 μl，接種待測(cè)細(xì)胞懸液，將培養(yǎng)板置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)24 h后，于每孔中加入CCK-8溶液10 μl，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1～4 h。使用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔450 nm波長(zhǎng)處的吸光度（A）值，并計(jì)算3組人胃癌細(xì)胞MKN-1的增殖情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.5 蛋白質(zhì)印跡法（Westernblot）檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的相對(duì)表達(dá)量轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)人胃癌細(xì)胞MKN-1，培養(yǎng)72 h后，取 miRNA-133b mimics組、miRNA-133b NC組和對(duì)照組處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞MKN-1，按照蛋白提取試劑盒說明書提取細(xì)胞總蛋白，采用BCA試劑盒檢測(cè)Bcl-2、BAX、cleaved caspase 3的濃度，采用Western blot法檢測(cè)各蛋白的表達(dá)情況。將上述3種蛋白與Loading buffer充分混合，100℃沸水中煮沸5 min致蛋白變性，每孔取50 μl蛋白樣品加入到十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）凝膠上樣孔中進(jìn)行電泳和轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉37℃封閉1 h。加入稀釋后的一抗（稀釋濃度為1∶2000），4℃孵育過夜。TBST洗膜后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（羊抗鼠IgG，稀釋濃度為1∶5000），37℃孵育1 h，充分洗膜后采用電化學(xué)發(fā)光（electrochemiluminescence，ECL）試劑盒曝光成像，以自動(dòng)凝膠成像系統(tǒng)采集圖像，以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算各蛋白的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 隨訪

所有患者的隨訪資料均保存完整，包括地址和聯(lián)系方式，隨訪方式為門診復(fù)查、電話隨訪，隨訪截止日期為2018年5月。觀察終點(diǎn)為胃癌患者死亡，定義為確診胃癌至因胃癌死亡的時(shí)間段。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；等級(jí)資料的比較采用秩和檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，生存情況的比較采用Log-rank檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同細(xì)胞及組織中miRNA-133 b的相對(duì)表達(dá)量

qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，miRNA-133b在人胃癌細(xì)胞MKN-1中的相對(duì)表達(dá)量為（0.34±0.10），明顯低于人正常胃黏膜細(xì)胞GES-1的（0.99±0.09），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.834，P＜0.01）。miRNA-133b在胃癌組織、癌旁組織和胃黏膜上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。miRNA-133b在胃癌組織中的相對(duì)表達(dá)量低于癌旁組織和胃黏膜上皮組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。miRNA-133b在癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量低于胃黏膜上皮組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

2.2 轉(zhuǎn)染后人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133 b的相對(duì)表達(dá)量

轉(zhuǎn)染后，miRNA-133b mimics組、miRNA-133bNC組和對(duì)照組人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133b的相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。miRNA-133b NC組人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133b的相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。miRNA-133b mimics組人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133b的相對(duì)表達(dá)量高于miRNA-133b NC組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表1 不同組織中miRNA-133 b相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表1 不同組織中miRNA-133 b相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

注：a與胃癌組織比較，P＜0.05；b與癌旁組織比較，P＜0.05

組織類型miRNA-133b胃癌組織（n=80）癌旁組織（n=80）胃黏膜上皮組織（n=80）F值P值0.39±0.10 0.73±0.13a 1.09±0.12a b 899.712＜0.01

表2 轉(zhuǎn)染后不同組別人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133 b相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表2 轉(zhuǎn)染后不同組別人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133 b相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

注：*與miRNA-133b mimics組比較，P＜0.05

組別miRNA-133b對(duì)照組miRNA-133b NC組miRNA-133b mimics組F值P值1.02±0.08*1.01±0.09*2.39±0.31 102.570＜0.01

2.3 上調(diào)miRNA-133 b表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-1增殖能力的影響

轉(zhuǎn)染后，miRNA-133b mimics組、miRNA-133b NC組和對(duì)照組人胃癌細(xì)胞MKN-1的相對(duì)細(xì)胞存活比例比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。miRNA-133b mimics組人胃癌細(xì)胞MKN-1的相對(duì)細(xì)胞存活比例低于miRNA-133b NC組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。miRNA-133b NC組和對(duì)照組人胃癌細(xì)胞MKN-1的相對(duì)細(xì)胞存活比例比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表3）

表3 不同組別人胃癌細(xì)胞MKN-1相對(duì)細(xì)胞存活比例的比較（%，±s）

表3 不同組別人胃癌細(xì)胞MKN-1相對(duì)細(xì)胞存活比例的比較（%，±s）

注：a與對(duì)照組比較，P＜0.05；b與miRNA-133b NC組比較，P＜0.05

組別相對(duì)細(xì)胞存活比例對(duì)照組miRNA-133b NC組miRNA-133b mimics組F值P值1.03±0.13 0.99±0.08 0.62±0.10a b 27.613＜0.01

2.4 上調(diào)miRNA-133 b表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞MKN-1中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況的影響

Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后，對(duì)照組、miRNA-133b NC組和miRNA-133b mimics組人胃癌細(xì)胞MKN-1中Bcl-2、BAX和cleaved caspase 3的相對(duì)表達(dá)量比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。miRNA-133b mimics組人胃癌細(xì)胞MKN-1中Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組和miRNA-133b NC組，BAX和cleaved caspase 3的相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組和miRNA-133b NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表4）

表4 不同組別人胃癌細(xì)胞MKN-1中凋亡相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表4 不同組別人胃癌細(xì)胞MKN-1中凋亡相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

注：*與miRNA-133b mimics組比較，P＜0.05

1.00±0.13*0.98±0.11*0.42±0.09 43.83 0.000 0.99±0.08*0.98±0.09*4.32±0.43 291.312 0.000 1.02±0.10*1.01±0.11*3.41±0.50 98.05 0.000對(duì)照組miRNA-133b NC組miRNA-133b mimics組F值P值組別Bcl-2 BAX cleaved caspase 3

2.5 胃癌組織中miRNA-133 b表達(dá)情況與胃癌患者臨床特征的關(guān)系

以胃癌患者胃癌組織中miRNA-133b相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)（0.247）為臨界值，將80例胃癌患者分為 miRNA-133b高表達(dá)（miRNA-133b＞0.247）患者27例和miRNA-133b低表達(dá)（miRNA-133b≤0.247）患者53例。不同腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量和TNM分期胃癌患者胃癌組織中miRNA-133b的表達(dá)情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），不同性別、年齡、吸煙史胃癌患者胃癌組織中miRNA-133b的表達(dá)情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表5）

表5 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中miRNA-133 b的表達(dá)情況比較（n=80）

2.6 miRNA-133 b表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系

miRNA-133b高表達(dá)胃癌患者的中位生存時(shí)間為39.1個(gè)月，長(zhǎng)于miRNA-133b低表達(dá)胃癌患者的29.6個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.514，P＜0.05）。（圖1）

圖1 miRNA-133 b高表達(dá)（n=27）和低表達(dá)（n=53）胃癌患者的生存曲線

3 討論

miRNA的異常表達(dá)參與胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，部分miRNA作為促腫瘤因子促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，部分miRNA發(fā)揮抑制腫瘤的作用。miRNA-21、miRNA-106a等在胃癌中常過表達(dá)并促進(jìn)胃癌的進(jìn)展，而let-7、miRNA-101、miRNA-148和miRNA-133b等常在胃癌的發(fā)展過程中持續(xù)低表達(dá)[4]，盡管miRNA-133b最初被認(rèn)為是肌肉特異性miRNA，但后來被證明可以作為包括胃癌在內(nèi)的各種類型腫瘤的腫瘤抑制因子[10]。

本研究探討了miRNA-133b在胃癌中的表達(dá)情況及其與胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，人胃癌細(xì)胞和胃癌組織樣本與人正常胃黏膜上皮細(xì)胞和胃黏膜上皮組織相比，miRNA-133b的相對(duì)表達(dá)量均降低（P＜0.05）；轉(zhuǎn)染后，與miRNA-133b NC組和對(duì)照組相比，miRNA-133b mimics組人胃癌細(xì)胞MKN-1中miRNA-133b以及BAX、cleaved caspase 3的相對(duì)表達(dá)量較高，Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量和人胃癌細(xì)胞MKN-1的相對(duì)細(xì)胞存活比例均較低（P＜0.05）。說明上調(diào)miRNA-133b的表達(dá)可以抑制人胃癌細(xì)胞MKN-1的增殖能力，并抑制Bcl-2的表達(dá)，促進(jìn)BAX、cleaved caspase 3的表達(dá)。miRNA-133b對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的調(diào)控可能與多嘧啶束結(jié)合蛋白1（polypyrimidine tract-binding protein 1，PTBP1）有關(guān)，PTBP1是miRNA-133b的下游調(diào)控基因之一，miRNA-133b表達(dá)的上調(diào)可抑制PTBP1的表達(dá)，而PTBP1可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的Warburg效應(yīng)[11]。丙酮酸激酶（pyruvate kinase，PK）是糖酵解過程中的關(guān)鍵酶，其中，活性最強(qiáng)的丙酮酸激酶M2型（pyruvate kinase M2，PKM2）是糖酵解過程中的限速酶[12]，而PKM2的表達(dá)又受到PTBP1的調(diào)控，miRNA-133b過表達(dá)可通過調(diào)控PTBP1的表達(dá)進(jìn)而影響PKM2的表達(dá)和轉(zhuǎn)化，干擾胃癌細(xì)胞的糖酵解，影響胃癌細(xì)胞的增殖能力[13]。在非小細(xì)胞肺癌中，miRNA-133b可通過激活caspase 3和caspase 7依賴的凋亡途徑和誘導(dǎo)細(xì)胞停滯于S期從而降低肺癌細(xì)胞的存活率[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染后，cleaved caspase 3的表達(dá)水平升高，提示miRNA-133b對(duì)caspase 3依賴的凋亡途徑的調(diào)控可能是其影響胃癌惡性程度的重要機(jī)制之一，尋找miRNA-133b的凋亡相關(guān)下游靶點(diǎn)有助于揭示miRNA-133b對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制。

鑒于miRNA-133b在胃癌細(xì)胞增殖和凋亡方面的調(diào)控作用，本研究對(duì)miRNA-133b的表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行了探究，結(jié)果顯示，miRNA-133b高表達(dá)患者的中位生存時(shí)間長(zhǎng)于miRNA-133b低表達(dá)患者（P＜0.05），說明miRNA-133b表達(dá)的下調(diào)與胃癌患者的預(yù)后不良可能有關(guān)，miRNA-133b具有成為評(píng)估胃癌預(yù)后的分子標(biāo)志物的潛力。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-133b與結(jié)直腸癌的TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況可能有關(guān)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-133b的表達(dá)與胃癌的腫瘤直徑、分化程度、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量和TNM分期可能有關(guān)，其中，miRNA-133b的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量可能有關(guān)，提示miRNA-133b可能對(duì)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化、腫瘤干細(xì)胞表型的形成等腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)生物學(xué)過程具有調(diào)控作用。目前，miRNA-133b與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)基礎(chǔ)研究較少，還需更多的分子生物學(xué)證據(jù)進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，miRNA-133b在胃癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)下調(diào)，而上調(diào)miRNA-133b的表達(dá)可抑制胃癌細(xì)胞的增殖，并能夠影響凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)；miRNA-133b表達(dá)下調(diào)可能與胃癌患者的預(yù)后不良有關(guān)，其具有成為胃癌預(yù)后預(yù)測(cè)的分子標(biāo)志物的潛力。miRNA-133b在細(xì)胞能量代謝和細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，在后續(xù)的研究中，可通過生物信息學(xué)及熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)，尋找與細(xì)胞能量代謝和凋亡相關(guān)的miRNA-133b下游靶點(diǎn)，從而揭示miRNA-133b調(diào)控胃癌細(xì)胞能量代謝及凋亡過程的具體機(jī)制。另外，長(zhǎng)鏈非編碼RNA的研究已廣泛開展，與miRNA-133b相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA的篩查可能能夠?yàn)閷ふ椅赴╊A(yù)后預(yù)測(cè)的分子標(biāo)志物提供新的方向。