鄭 佳，李子安，阿祥仁

(青海省人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，青海西寧 810007)

血清中自身抗體是自身免疫反應和自身免疫性疾病(AID)的重要標志之一，及時準確地檢測這些自身抗體，除可用于AID的診斷、預后判斷、疾病活動性監(jiān)控及療效評估外，也可作為AID的風險預測指標[1]。近年來隨著人們生活水平和健康意識的提高，自身抗體檢測漸漸被納入了體檢項目，這對AID的早期發(fā)現、及時診斷和治療起了一定的積極作用。但是目前，對于自身抗體在健康體檢人群中的陽性分布情況及臨床意義的研究資料較少，故本研究對2 342名體檢人群血清中自身抗體檢測結果進行分析，以了解這些自身抗體在健康人群中的分布情況，篩選就診人群進行隨訪，探討體檢人群自身抗體檢測的臨床意義，提高自身抗體在疾病診療中的應用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 健康體檢人群來自于2013年2月至2014年8月和2016年1月至2017年11月，居住在青海地區(qū)(海拔2 280～3 500 m)，在青海省人民醫(yī)院體檢中心進行體檢的2 342名體檢者，年齡13～90歲。其中男性1 379例，平均年齡為(43.3±9.9)歲；女性963例，平均年齡為(42.3±10.3)歲。

1.2儀器與試劑 檢測儀器為歐蒙印跡法自動操作儀(EUROBlot Master)。所有試劑均使用德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷有限公司產品。

1.3方法 全部受檢對象均于清晨采集空腹靜脈血3～5 mL于血清真空采血管中，所有樣本3 000 r/min，離心10 min，分離血清待測。采用間接免疫熒光法(IIF)檢測血清標本中的抗核抗體(ANA)、抗平滑肌抗體(SMA)、抗壁細胞抗體(PCA)和抗線粒體抗體(AMA)。采用德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷有限公司抗原片(包括Hep-2細胞、猴肝、鼠胃和鼠腎)，按照試劑操作說明，血清稀釋后與抗原基質片反應30 min(同時設陽性和陰性對照)，浸泡5 min，加入熒光標記的二抗避光孵育30 min，浸泡5 min，加甘油封片后熒光顯微鏡下判讀結果，以抗體滴度≥1:100為陽性。

采用德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷有限公司線性免疫印跡法(LIA)檢測ANA譜特異性抗體，包括抗nRNP/Sm、Sm、SS-A(天然SS-A和Ro-52)、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、著絲點蛋白B(CENP B)、增殖細胞核抗原(PCNA)、雙鏈DNA(dsDNA)、核小體、組蛋白、核糖體(rRNP)和線粒體-M2(AMA-M2)共14種不同抗原的IgG抗體。1∶100稀釋的患者血清1.5 mL與膜條上的靶抗原反應30 min，洗滌3次(5 min/次)，加入1.5 mL酶標記的抗人IgG(酶結合物)反應 30 min，洗滌3次(5 min/次)，加入底物液反應15 min，蒸餾水清洗膜條終止反應，肉眼判讀結果。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計分析，男性與女性組抗體陽性率的比較采用χ2檢驗，不同年齡組抗體陽性率的比較采用秩和檢驗，趨勢檢驗采用Gamma法。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1各種自身抗體陽性率比較 2 342例標本中，ANA陽性的標本數為580例，陽性率為24.77%，SMA陽性的標本數為7例，陽性率為0.30%，PCA陽性的標本數為62例，陽性率為2.65%，AMA陽性的標本數為26例，陽性率為1.11%。ANA譜陽性的標本數為162例，陽性率為6.92%，各抗體檢出率分別為nRNP 15(6.55%)、Sm 2(0.87%)、SSA 56(24.45%)、Ro52 60(26.20%)、SSB 14(6.11%)、Scl-70 5(2.18%)、PM-Scl 10(4.37%)、組蛋白 12(5.24%)、Jo-1 4(1.75%)、核小體 2(0.87%)、PCNA 3(1.31%)、CENP B 11(4.80%)、rRNP 13(5.68%)、AMA-M2 22(9.61%)。

2.2不同性別受檢對象的陽性率分析 結果顯示ANA(χ2=21.367，P<0.05)、AMA(χ2=4.528，P=0.033)、ANA譜(χ2=17.647，P<0.05)陽性率體檢健康人群中女性高于男性，而SMA、PCA陽性率在男女性別間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同性別組自身抗體陽性率比較[n(%)]

2.3不同年齡段自身抗體陽性率比較 體檢健康人群中ANA、PCA、AMA陽性率隨年齡增加而升高，而SMA、ANA譜陽性率在不同年齡段間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同年齡段自身抗體陽性率比較[n(%)]

2.4陽性滴度情況 2 342名健康體檢人群血清標本中ANA、PCA、SMA、AMA陽性滴度以小于1∶320的低滴度居多，分別占79.69%、71.43%、51.61%、73.08%，見表3。

表3 不同陽性滴度所占百分比[n(%)]

2.5篩選就診人群進行隨訪 綜合考慮體檢者抗體檢測結果，IIF檢測ANA陽性并滴度大于1∶320且伴有其他自身免疫疾病相關實驗室檢測指標異常，篩選出26例就診人群，進行隨訪。其中男性7例(26.92%)，平均年齡為(54±14.05)歲，女性19例(73.08%)，平均年齡為(47.4±11.43)歲。最終確診為AID的患者2例，原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)1例，結締組織病1例，均為女性。

3 討 論

隨著自身免疫病治療的迅速發(fā)展，自身抗體的早期診斷和早期治療提高了患者的生活質量和疾病預后[2]。由于自身抗體可以在自身免疫病患者典型臨床癥狀出現前若干年檢測到，因此，自身抗體篩查在自身免疫病的早期診斷中顯得非常重要，自身抗體對自身免疫病的早期篩查是近年來自身抗體檢測在臨床應用的重要進展。本研究2 342名健康體檢人群ANA陽性率為24.77%，而我國有些學者研究報道的陽性率僅為11.27%[3]，這可能和體檢人群所處環(huán)境有關，高原低氧環(huán)境影響機體的免疫調節(jié)功能[4]。本文體檢人群主要居住在青海地區(qū)(海拔2 260～3 500 m)，高原地區(qū)海拔高、缺氧、寒冷干燥，對人體的免疫系統(tǒng)有一定的影響，很多免疫指標與平原地區(qū)有一定差異[5]。ANA譜各抗體也有一定的表達，陽性率為6.92%，以抗SSA和抗Ro-52抗體為多，與我國學者郭亞平等[6]的研究結果基本相符，這兩種抗體檢測靈敏度高，但特異度不如抗SSB抗體。不同性別組的陽性率分析顯示ANA、AMA、ANA譜陽性率體檢人群中女性高于男性，而SMA、PCA陽性率在男女性別間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。AID好發(fā)于女性，通?？贵w滴度越高，ANA譜越容易檢測出相應抗原，患AID的可能性越大，但也不絕對。健康體檢人群中ANA、PCA、AMA陽性率隨年齡增加而升高，而SMA、ANA譜陽性率在不同年齡段間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。自身抗體是指由于各種原因導致機體自身組織成分的抗體，按臨床意義不同可分為疾病標志性自身抗體、疾病特異性自身抗體、疾病相關性自身抗體、疾病非特異性自身抗體和生理性自身抗體[7]。由于正常機體也會存在微弱的自身免疫應答，產生生理性的自身抗體，因此，健康人群包括孕婦、老年人等也會檢測到低滴度的ANA[8]，肩負著清除體內衰老和死亡細胞的作用，并非自身免疫疾病特異性自身抗體，另外，感染性疾病、腫瘤等也會由于機體的自身免疫反應產生ANA，ANA陽性并非一定為AID[9-10]。

ANA檢測是AID疾病診斷、治療、監(jiān)控病情活動以及療效評估一項非常重要的試驗[11]，近年來，AID發(fā)病率明顯上升，其總體發(fā)病率占世界人口的3%～5%[12]，現有的研究結果顯示自身抗體是AID的早期標志物，AID患者體內自身抗體的出現往往早于臨床癥狀的出現，如RA相關抗CCP抗體可以在RA患者出現臨床癥狀前平均4.5年檢測到[13]，PBC患者體內的AMA-M2可以在患者任何臨床癥狀或其他實驗室檢測指標異常前10年出現[14]，ANA及其特異性抗體可存在于SLE、SS患者出現臨床癥狀前數年[15-16]，因此，自身抗體篩查在AID的早期診斷中非常重要，本研究篩查出26例就診人群進行隨訪追蹤，到目前確診為AID的患者2例。雖然自身抗體的存在并不意味著AID，但是一些自身抗體有很好的預警作用，健康體檢人群開展自身抗體檢測有助于早期發(fā)現AID，對于處在亞臨床期的患者也應定期復查，隨訪監(jiān)測。