胡艷瑞，王世磊

濮陽市人民醫(yī)院普通外科，河南濮陽457000

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，具有很強(qiáng)的異質(zhì)性，盡管大多數(shù)乳腺癌患者經(jīng)過手術(shù)、放化療等治療后可達(dá)到根治性的效果，但仍有部分患者預(yù)后不佳，5年生存率較低[1]。有研究認(rèn)為，有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和有無擴(kuò)散是乳腺癌患者預(yù)后的影響因素[2]。目前，臨床對于乳腺癌的診斷主要通過病理和免疫組化分析，但是，近年來，血清生物學(xué)標(biāo)志物已成為惡性腫瘤診斷和治療的重要輔助指標(biāo)。通過檢測血清生物學(xué)標(biāo)志物還可找到乳腺癌的潛在治療靶點(diǎn)，有利于對乳腺癌的治療[3]。金屬硫蛋白（metallothionein，MT）是一類具有特定金屬結(jié)合能力的、高度保守的蛋白質(zhì)，由MT1E、MT1G和MT1X等亞基構(gòu)成。其中，MT1E存在于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中，其在血清中的表達(dá)水平與多種惡性腫瘤有關(guān)，可能參與靶向調(diào)控基因的表達(dá)[4]。 糖 類 抗 原153（carbohydrate antigen 153，CA153）是存在于乳腺細(xì)胞上皮表面糖蛋白的變異體[5]，是一種腫瘤相關(guān)抗原，在乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌中均有表達(dá)。本研究探討了MT1E、CA153在乳腺癌患者血清中的表達(dá)水平及與乳腺癌患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2013年1月至2017年1月濮陽市人民醫(yī)院收治的128例乳腺癌患者為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②均為女性；③術(shù)前未接受過放化療等抗腫瘤治療；④非急診手術(shù)患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并病毒性肝炎、血液系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病等；②合并其他部位惡性腫瘤。另外，選取130例同期于本院行健康體檢的女性為對照組。觀察組患者的年齡為28～68歲，平均年齡為（55.41±9.87）歲。對照組受試者的年齡為29～65歲，平均年齡為（54.16±10.22）歲。兩組受試者的年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有受試者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

抽取全部受試者的清晨空腹靜脈血，分離血清，離心速度為3000 r/min，離心時間為10 min，離心半徑為8 cm，凍存于-80℃冰箱中保存待測。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測全部受試者血清中MT1E和CA153的表達(dá)水平。ChemiDoc MP化學(xué)發(fā)光儀購自美國Bio-rad公司，酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒購自亞諾法生技股份有限公司。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書的步驟進(jìn)行。使用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品制作質(zhì)控曲線。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：MT1E≥0.85 ng/ml為陽性，CA153＞30 U/ml為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)及隨訪

觀察并比較兩組受試者血清中MT1E、CA153的表達(dá)水平，分析乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)率與乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系，對全部乳腺癌患者進(jìn)行隨訪。術(shù)后每半年進(jìn)行一次門診隨訪，隨訪截止時間為2018年6月，隨訪內(nèi)容包括病史詢問、體格檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)；影響因素分析采用Cox比例風(fēng)險回歸模型。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中MT1E、CA153表達(dá)水平的比較

觀察組患者血清中MT1E的表達(dá)水平為（1.22±0.51）ng/ml，明顯高于對照組患者的（0.46±0.13）ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=16.457，P＜0.01）；觀察組患者血清中CA153的表達(dá)水平為（28.81±5.22）U/ml，明顯高于對照組患者的（10.10±4.01）U/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=32.315，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)情況

TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)率均明顯高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的乳腺癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=12.621、21.321，P＜0.01）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清中MT1E的陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=27.275，P＜0.01）。不同年齡、腫瘤直徑、病理類型、雌激素受體狀態(tài)、孕激素受體狀態(tài)、分化程度乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況乳腺癌患者血清中CA153的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

2.3 MT1E、CA153陽性表達(dá)乳腺癌患者的生存情況

MT1E陽性表達(dá)乳腺癌患者的中位生存時間為51.19個月（95%CI：46.660～55.727），短于 MT1E陰性表達(dá)乳腺癌患者的57.31個月（95%CI：53.855～60.764），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.558，P＜0.05）；CA153陽性表達(dá)乳腺癌患者的中位生存時間為 50.22個 月（95%CI：45.331～54.702），短于CA153陰性表達(dá)乳腺癌患者的57.54個月（95%CI：54.178～60.892），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.606，P＜0.05）。（圖1、圖2）

2.4 乳腺癌患者預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險回歸分析

以淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、雌激素受體狀態(tài)、分化程度、MT1E表達(dá)、CA153表達(dá)作為自變量，以總生存時間作為因變量進(jìn)行Cox比例風(fēng)險回歸模型分析，結(jié)果顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、MT1E陽性表達(dá)、CA153陽性表達(dá)均是乳腺癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險因素（P＜0.05），雌激素受體陽性是乳腺癌患者預(yù)后良好的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05）。（表2）

表1 不同臨床特征乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)情況（n=128）

圖1 MT1E陽性表達(dá)（n=92）和陰性表達(dá)（n=36）乳腺癌患者的生存曲線

圖2 CA153陽性表達(dá)（n=85）和陰性表達(dá)（n=43）乳腺癌患者的生存曲線

表2 乳腺癌患者預(yù)后影響因素的Cox比例風(fēng)險回歸分析（n=128）

3 討論

乳腺癌是臨床常見的惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展是多種因素共同作用的結(jié)果，大多數(shù)早期乳腺癌患者術(shù)后可獲得根治性的治療效果，術(shù)后再輔以放療、化療，多數(shù)患者可獲得良好的預(yù)后[6]。部分患者術(shù)后易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散，治療效果較差，生存時間較短[7]。病理組織活檢是診斷和評估病情的金標(biāo)準(zhǔn)，但其對患者造成的創(chuàng)傷較大，可導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展[8]。鉬靶X線攝影檢查等影像學(xué)檢查無法對腫瘤進(jìn)行確診，且可能對患者機(jī)體造成放射性損傷，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展[9]。血清生物學(xué)標(biāo)志物是目前診斷和治療惡性腫瘤的重要輔助指標(biāo)，與病理學(xué)檢查相比，具有檢測方便、結(jié)果客觀、創(chuàng)傷小等優(yōu)勢[10]。通過檢測血清生物學(xué)標(biāo)志物，還可發(fā)現(xiàn)潛在的治療靶點(diǎn)，為惡性腫瘤的治療提供新的思路[11]。

金屬硫蛋白含有61～68個氨基酸殘基，蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有兩個金屬結(jié)合域，具有特定的金屬結(jié)合能力[12]。有研究認(rèn)為，MT在不同腫瘤組織中的表達(dá)水平不同，可作為腫瘤的一種輔助性診斷指標(biāo)[13]。MT1E屬于MT1蛋白，在腫瘤細(xì)胞中呈陽性表達(dá)，尤其在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中含量較高。有研究發(fā)現(xiàn)，MT1E可作為調(diào)控因子直接參與靶向基因的表達(dá)，MT1E在乳腺癌患者血清中的表達(dá)水平較高，與乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[14-15]。CA153是存在于乳腺細(xì)胞上皮表面糖蛋白的變異體，在乳腺癌中的表達(dá)水平較高[16]。有研究證實(shí)，CA153是乳腺癌診斷的特異性標(biāo)志物[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者血清中的MT1E和CA153水平明顯高于健康女性，這一結(jié)果與相關(guān)研究結(jié)果類似[18-19]。血清MT1E和CA153水平可作為乳腺癌的輔助診斷指標(biāo)。本研究對不同TNM分期乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)率進(jìn)行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)率均明顯高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的乳腺癌患者，提示乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)率可能與TNM分期有關(guān)。本研究還發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清中MT1E的陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，提示乳腺癌患者血清中MT1E的陽性表達(dá)率可能與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。

通過長期的隨訪發(fā)現(xiàn)，MT1E和CA153陽性表達(dá)乳腺癌患者的中位生存時間均短于MT1E和CA153陰性表達(dá)的乳腺癌患者，提示乳腺癌患者血清中MT1E和CA153的陽性表達(dá)情況與患者的預(yù)后可能有關(guān)，且MT1E、CA153陽性表達(dá)乳腺癌患者的中位生存時間更短。分析其原因可能是由于血清中MT1E、CA153陽性表達(dá)的乳腺癌患者往往已發(fā)展至乳腺癌晚期，且發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此，MT1E、CA153陽性表達(dá)的乳腺癌患者預(yù)后更差。

本研究中，Cox比例風(fēng)險回歸分析結(jié)果顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、MT1E陽性表達(dá)、CA153陽性表達(dá)均是乳腺癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險因素（P＜0.05），雌激素受體陽性是乳腺癌患者預(yù)后良好的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05），提示MT1E、CA153可作為臨床評估乳腺癌患者病情和預(yù)后的輔助指標(biāo)。

綜上所述，乳腺癌患者血清中MT1E和CA153的表達(dá)水平較高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、MT1E陽性表達(dá)、CA153陽性表達(dá)是乳腺癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險因素，雌激素受體陽性是乳腺癌患者預(yù)后良好的獨(dú)立保護(hù)因素。但是，本研究納入的樣本量較少，未對乳腺癌患者進(jìn)行分類研究，在今后的臨床工作中應(yīng)注意積累樣本，探討三陰性乳腺癌等特殊類型乳腺癌患者血清中MT1E、CA153的陽性表達(dá)情況。