黃雪秋，韋有杰，謝彝健，馬 璐

(百色學(xué)院預(yù)科教育學(xué)院，廣西 百色 533000)

原花青素是一種新型美白抗氧化的天然植物提取物，是一種天然的抗氧化劑[1-3]。其被認(rèn)定為當(dāng)前世界上所能提取到的抗氧化與清除人體內(nèi)自由基能力最強(qiáng)的物質(zhì)[4-5]。在葡萄籽中提取的原花青素可以消除與抵抗人體產(chǎn)生的自由基，有效幫助人體對維生素的吸收，抗衰老，易被人體表皮吸收，使肌膚保持緊致水潤，減少皺紋與角質(zhì)的產(chǎn)生,含有原花青素的護(hù)膚品在與皮膚接觸的同時(shí)收縮毛孔，緊致肌膚，從而使皮膚水潤清爽不粗燥[6-7]。所以可以合理利用我國天然廣闊的地理資源優(yōu)勢，開發(fā)出產(chǎn)各種含有原花青素的護(hù)膚品化妝品。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 葡萄籽原花青素的粗提取與吸光度測定

(1)葡萄籽粉碎→烘干→石油醚浸泡18h→抽濾→干燥→乙醇溶液浸提→抽濾→轉(zhuǎn)蒸→粗提物

取粗提物1mL，加蒸餾水稀釋并定容至250mL，測吸光度，記錄211λnm的吸光度值。

1.2 純化葡萄籽原花青素提取物

95%的無水乙醇浸泡D101大孔吸附樹脂，靜置24h后裝柱，上樣。依次用30%、50%、70%、90%的乙醇溶液梯度洗脫，洗脫液旋蒸，得到純化葡萄籽原花青素提取物。

1.3 原花青素面霜的配制

表1 面霜基質(zhì)原料配比

表1(續(xù))

加熱攪拌溶解硬脂酸、硬脂酸甘油酯、氫化聚葵烯與尼泊金甲酯，之后依次加入二甲基硅油、合成角鯊?fù)?、液體石蠟、苯氧乙醇，攪拌至均相，記為A相。黃原膠和卡波姆940加入到40℃溫水中，攪拌至其充分溶脹，接著依次加入甘油、丁二醇、泛醇、三乙醇胺、EDTA Na與海藻糖攪拌均勻，記為B相。將A、B相混合攪拌均勻后，再分別等量加入10%的抗壞血酸、粗提葡萄籽原花青素和純提葡萄籽原花青素，加純凈水至100g，攪拌均勻，之后進(jìn)行面霜基礎(chǔ)理化指標(biāo)和穩(wěn)定性試驗(yàn)，得到三種符合標(biāo)準(zhǔn)的抗氧化型面霜。

1.4 純提葡萄籽原花青素面霜自由基清除率的測定

取0.1g護(hù)膚品基質(zhì)和面霜分別稀釋至100mL，之后進(jìn)行紫外吸光度的測定。

①取純提原花青素面霜稀釋液2mL+2mL蒸餾水測基線。

②取面霜基質(zhì)稀釋液2mL+2mL70%無水乙醇DPPH溶液測定空白吸光度取波峰517λnm的數(shù)值記為A空白。

③取純提原花青素面霜稀釋液2mL+2mL70%無水乙醇DPPH溶液測樣品吸光度同取波峰為517λnm的數(shù)值記為A樣品。

1.5 對比三種面霜體外清除DPPH自由基的能力

取4支10mL毫升的玻璃試管，一支添加2mL葡萄籽粗提物護(hù)膚品稀釋液，一支添加稀釋后的抗壞血酸溶液2mL，另一只添加2mL葡萄籽純提物護(hù)膚品稀釋液，最后一支做對照組添加4mL的DPPH稀釋液；往前三支試管各加2mL DPPH稀釋液，觀察溶液的變化情況。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對葡萄籽粗提物吸光度的影響

圖1 無水乙醇濃度與吸光度關(guān)系線性圖

圖1可以看出乙醇濃度為60%時(shí)，葡萄籽粗提物吸光度，說明該濃度乙醇最利于葡萄籽原花青素的提取。造成此結(jié)果的原因可能是葡萄籽中的物質(zhì)在此濃度時(shí)趨于飽和溶解狀態(tài)，且葡萄籽內(nèi)的某些物質(zhì)是需要蒸餾水溶解出的，水浴乙醇協(xié)同才能能好地將葡萄籽中的原花青素浸提出來，而更高濃度的無水乙醇溶液中蒸餾水的比例相應(yīng)減少，水所能溶解出葡萄籽中物質(zhì)變少，所以在比60%更高濃度的無水乙醇溶液的吸光度下降。

2.2 攪拌溫度對葡萄籽粗提物吸光度的影響

圖2 攪拌溫度與吸光度關(guān)系線性圖

葡萄籽中溶解的物質(zhì)不僅與乙醇濃度相關(guān)，也與加熱攪拌時(shí)的溫度有關(guān)，從圖2可以看出，相同條件下，攪拌溫度為60℃時(shí)最有利于葡萄籽原花青素的提取。過低的溫度無法有效斷裂葡萄籽中的氫鍵，使葡萄籽中的多酚物質(zhì)不能溶到溶液中，由圖可看出葡萄籽在60%乙醇浸提溶液中的攪拌溫度為60℃時(shí)，所得粗提取的吸光度最高；溫度過高，葡萄籽中的多酚物質(zhì)在高溫狀態(tài)下會遭到破壞，在攪拌溫度為65℃時(shí)葡萄籽粉末中可能有少量的物質(zhì)遭到破壞無法更完全的提取而出，從而吸光度相應(yīng)下降。

2.3 攪拌時(shí)間對葡萄籽粗提物吸光度的影響

圖3 攪拌時(shí)間與吸光度關(guān)系線性圖

由圖3可得，攪拌時(shí)間為90min時(shí)所測得的吸光度曲線最好，原因可能是攪拌時(shí)間少的情況下葡萄籽中的物質(zhì)在溶液中溶解不完全，在圖中60min比30min吸光度曲線高可以說明，而在超過90min時(shí)，長時(shí)間的高溫也會使溶解后的物質(zhì)被破壞，而在150min分鐘時(shí)再次增高，可能的原因是溶解出了葡萄籽中多酚以外的物質(zhì)，這些多溶解的物質(zhì)在溶液中，在后來測曲線的時(shí)候還依舊存在，即造成吸光度增高。

綜上，當(dāng)浸提溶液濃度為乙醇60%、攪拌溫度為60℃、浸提時(shí)間為90min時(shí)，葡萄籽粗提物的吸光度值最高，即該提取條件為較優(yōu)的葡萄籽原花青素提取條件。

2.4 純提葡萄籽原花青素面霜的DPPH自由基清除率

記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到A空白=0.317，A樣品=0.015；由自由基清除率計(jì)算公式得：清除率=(1- A樣品/A空白)%得(1-0.317/0.015)%≈95.3%。

2.5 對比三種抗氧化型面霜的體外自由基清除能力

圖4 粗提物、維生素C、純提物清除自由基對比圖

圖4的試管從左至右分別為添加粗提物、抗壞血酸、純提物、DPPH稀釋液。由上圖的變色情況可分析得出，葡萄籽純提物的清除自由基能力最強(qiáng)，抗壞血酸清除率比葡萄籽粗提物強(qiáng)。

3 小結(jié)

由本實(shí)驗(yàn)得出葡萄籽中原花青素的提取率與溶液濃度，攪拌溫度，攪拌時(shí)間都相關(guān)，最佳的提取條件為60%乙醇濃度，60℃的攪拌溫度，90min的攪拌時(shí)間。且最后自由基清除率排行為純提物>維生素C>粗提物。所得原花青素面霜經(jīng)試驗(yàn)，其理化性質(zhì)穩(wěn)定，無不良反應(yīng)，可安全作用于人體表皮。