文/謝妙 冉春麗 劉永奎

對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WSSV）具有很強(qiáng)的侵染性和復(fù)制能力。對(duì)蝦主要通過(guò)攝食攜帶WSSV的媒介生物或浸泡含有WSSV的水體感染病毒。感染W(wǎng)SSV的對(duì)蝦，在水質(zhì)惡化、水溫升高、pH晝夜相差大、養(yǎng)殖密度過(guò)高等不良環(huán)境因子的脅迫下，體質(zhì)變?nèi)?，病毒大量繁殖進(jìn)而發(fā)展為對(duì)蝦白斑綜合征。隨著對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和人們對(duì)環(huán)境保護(hù)的重視，室內(nèi)循環(huán)水工廠(chǎng)化對(duì)蝦養(yǎng)殖模式將成為主流對(duì)蝦養(yǎng)殖模式。本文將針對(duì)循環(huán)水工廠(chǎng)化對(duì)蝦養(yǎng)殖的特點(diǎn)，對(duì)對(duì)蝦WSSV的傳染機(jī)制和防控措施進(jìn)行初步的分析探討。

一、對(duì)蝦WSSV的感染、發(fā)病、診斷

（一）WSSV的感染機(jī)制

對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WSSV）是迄今危害最嚴(yán)重的甲殼類(lèi)病毒，具有傳播迅速、致病力強(qiáng)、宿主范圍廣等特點(diǎn)。感染了WSSV的南美白對(duì)蝦受到不良環(huán)境因子脅迫時(shí)容易發(fā)病，在10天內(nèi)死亡率可達(dá)80%～100%，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重阻礙了南美白對(duì)蝦的可持續(xù)發(fā)展。工廠(chǎng)化養(yǎng)殖系統(tǒng)中對(duì)蝦WSSV的傳播途徑有種蝦—蝦苗垂直傳播、經(jīng)口攝食傳播、水源水輸入傳播、共用未消毒工具交叉感染傳播、養(yǎng)殖區(qū)域動(dòng)物活動(dòng)傳播這五種。

（二）WSSV的發(fā)病機(jī)制和癥狀

對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV和發(fā)病在時(shí)間上并非完全一致，即對(duì)蝦感染了WSSV不一定馬上發(fā)病。在水質(zhì)良好、對(duì)蝦體質(zhì)健壯的情況下，對(duì)蝦不發(fā)病或者發(fā)病相對(duì)緩慢。但當(dāng)水質(zhì)環(huán)境惡化（如高氨氮、高亞硝酸鹽、低溶解氧等），水質(zhì)因子突變時(shí)（如溫度突變、pH突變、倒藻等），均可誘發(fā)對(duì)蝦體內(nèi)病毒粒子大量復(fù)制，進(jìn)而導(dǎo)致對(duì)蝦發(fā)病。對(duì)蝦體質(zhì)強(qiáng)弱也是決定對(duì)蝦是否發(fā)病的關(guān)鍵因素之一。當(dāng)對(duì)蝦受種蝦種質(zhì)退化、環(huán)境因子脅迫、搬運(yùn)損傷等不利因素影響時(shí)體質(zhì)變差，感染W(wǎng)SSV后很容易發(fā)展成對(duì)蝦白斑病毒綜合征。

對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV的初期表現(xiàn)為攝食活躍，攝食量增加。少數(shù)對(duì)蝦表現(xiàn)為趴邊、水面獨(dú)游、行動(dòng)遲緩的活動(dòng)癥狀。感染后期對(duì)蝦發(fā)展成白斑病毒綜合征，表現(xiàn)為蝦體變軟、紅體、空腸空胃、肝胰腺腫大發(fā)紅，頭胸甲易與真皮層分離剝落，且有大量肉眼清晰可見(jiàn)的白斑。感染后期的對(duì)蝦大量死亡，嚴(yán)重時(shí)排塘。

（三）對(duì)蝦病毒性白斑、細(xì)菌性白斑和非病原性白斑

對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中，可能受到病毒、細(xì)菌或者某些化學(xué)藥品的影響，頭胸甲均可出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)或僅顯微鏡下可見(jiàn)的白斑。根據(jù)白斑形成的機(jī)制不同，可將對(duì)蝦頭胸甲白斑分為病毒性白斑、細(xì)菌性白斑、非病原性白斑。

1.對(duì)蝦病毒性白斑

對(duì)蝦病毒性白斑是由對(duì)蝦WWSV引起，感染后期的對(duì)蝦頭胸甲肉眼可見(jiàn)大量不規(guī)則的白斑，頭胸甲表現(xiàn)為易與真皮層分離剝落。顯微鏡100倍鏡鏡檢下可發(fā)現(xiàn)頭胸甲有大量邊緣不規(guī)則的白斑狀結(jié)構(gòu)物，外觀(guān)呈花骨朵、多層魚(yú)鱗重疊狀，如圖1、2所示。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，白斑沉積物實(shí)際上是對(duì)蝦鈣鹽代謝異常導(dǎo)致碳酸鈣在頭胸甲沉積，但導(dǎo)致鈣鹽代謝異常的機(jī)制尚不清楚。病蝦組織做白斑病毒PCR檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。病毒性白斑發(fā)病迅猛，對(duì)蝦在一個(gè)星期內(nèi)爆發(fā)性死亡很可能是由對(duì)蝦WWSV引起的。

2.對(duì)蝦細(xì)菌性白斑

對(duì)蝦病毒性白斑往往還伴生對(duì)蝦細(xì)菌性白斑。對(duì)蝦細(xì)菌性白斑多數(shù)是由弧菌引起，感染的對(duì)蝦頭胸甲無(wú)肉眼可見(jiàn)白斑，外觀(guān)完好且不易與真皮層分離。顯微鏡100倍鏡鏡檢下可發(fā)現(xiàn)頭胸甲有許多呈中心輻射狀的白斑，邊緣相對(duì)規(guī)則，中心有黑點(diǎn)，如圖3、4所示。病蝦組織做白斑病毒PCR檢測(cè)結(jié)果為陰性，細(xì)菌培養(yǎng)可檢測(cè)到大量弧菌。細(xì)菌性白斑致死率沒(méi)有病毒性白斑高，通過(guò)換水、消毒、增強(qiáng)對(duì)蝦營(yíng)養(yǎng)可緩解癥狀。

圖1 對(duì)蝦病毒性白斑鏡檢-花骨朵狀

圖2 對(duì)蝦病毒性白斑鏡檢-多層魚(yú)鱗重疊狀

圖3 對(duì)蝦細(xì)菌性白斑-中心輻射狀

圖4 對(duì)蝦細(xì)菌性白斑—中心輻射狀

圖5 對(duì)蝦非病原性白斑-邊緣多支結(jié)晶狀

3.對(duì)蝦非病原性白斑

對(duì)蝦非病原性白斑通常是指的過(guò)多的鈣離子在對(duì)蝦頭胸甲沉積形成的白斑。這類(lèi)對(duì)蝦通常會(huì)表現(xiàn)為白腸白便，極端情況下蝦身和蝦肢也會(huì)覆蓋白色的碳酸鈣沉淀。非病原性白斑在100倍鏡下外觀(guān)多呈不規(guī)則狀，邊緣部分有多支狀碳酸鈣結(jié)晶，如圖5（該圖來(lái)源于中國(guó)水產(chǎn)頻道）所示。病蝦組織做白斑病毒PCR檢測(cè)結(jié)果為陰性。與病毒性白斑不同，病毒性白斑是由對(duì)蝦鈣鹽代謝異常導(dǎo)致碳酸鈣在頭胸甲沉積形成，而非病原性白斑是由水體中過(guò)高的鈣離子沉積在對(duì)蝦頭胸甲造成的。非病原性白斑可通過(guò)蓄水池充分曝氣、潑灑EDTA鈉鹽等來(lái)緩解病癥。

（四）檢測(cè)方法

WSSV的主要宿主為蝦蟹類(lèi)、鹵蟲(chóng)、橈足類(lèi)。藤壺不是WSSV的自然宿主，但WSSV可以在藤壺體內(nèi)復(fù)制。在海水、養(yǎng)殖水體中也存在游離的WSSV病毒粒子。對(duì)于不同的宿主和載體，WSSV的檢測(cè)方法也不同。在生產(chǎn)實(shí)踐中，成蝦和蝦苗通常使用對(duì)蝦白斑病毒PCR試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，鹵蟲(chóng)一類(lèi)的生物餌料推薦使用靈敏度更高的巢氏PCR法檢測(cè)提高陽(yáng)性檢測(cè)率。對(duì)于養(yǎng)殖水體和水源水的檢測(cè)需要通過(guò)聚乙二醇濃縮發(fā)、超濾離心管法進(jìn)行濃縮，提高單位體積病毒顆粒的密度，便于檢測(cè)。

二、工廠(chǎng)化養(yǎng)殖WSSV的防控措施

（一）選擇優(yōu)質(zhì)無(wú)特定病原攜帶的對(duì)蝦蝦苗是關(guān)鍵

研究中發(fā)現(xiàn)，南美白對(duì)蝦蝦苗WSSV陽(yáng)性檢出率雖然低于池塘放養(yǎng)蝦，但這些攜帶WSSV的蝦苗流向養(yǎng)殖場(chǎng)后有一部分會(huì)發(fā)展為白斑綜合征的病蝦。當(dāng)病蝦死亡后，健康對(duì)蝦通過(guò)攝食病蝦而感染W(wǎng)SSV，進(jìn)而發(fā)生串聯(lián)式感染，在封閉、高水溫的工廠(chǎng)化養(yǎng)殖環(huán)境下，這種病毒傳播速度非常迅速。生產(chǎn)不規(guī)范的種苗場(chǎng)所培育的蝦苗受親蝦垂直傳播和培育環(huán)境的影響往往帶有WSSV。即使是使用了SPF種蝦的苗場(chǎng)，若操作不規(guī)范將導(dǎo)致培育環(huán)境帶有WSSV，進(jìn)而生產(chǎn)出感染W(wǎng)SSV的蝦苗。通常情況下攜帶病毒的蝦苗在工廠(chǎng)化養(yǎng)殖前期不表現(xiàn)出病癥，但后期隨著投喂量的增加，水質(zhì)控制難度增加，當(dāng)控制不當(dāng)時(shí)就會(huì)突然發(fā)病，大量死亡，嚴(yán)重時(shí)排塘。因此工廠(chǎng)化養(yǎng)殖應(yīng)選擇優(yōu)質(zhì)的SPF蝦苗，并進(jìn)行抽樣檢測(cè)以確保蝦苗不攜帶病原，從源頭上杜絕WSSV的傳播。

（二）做好水源水的消毒和養(yǎng)殖尾水、養(yǎng)殖廢棄物的處理

在對(duì)蝦養(yǎng)殖集中的養(yǎng)殖區(qū)，多數(shù)養(yǎng)殖戶(hù)沒(méi)有經(jīng)過(guò)消毒處理就將含有大量病原、死亡養(yǎng)殖動(dòng)物的養(yǎng)殖廢水排放到自然水域中。由于自然水域的自?xún)裟芰τ邢?，水體中常常帶有各種病原體，包括WSSV。可使用漂白粉、強(qiáng)氯精、二氧化氯等含氯制劑，高錳酸鉀等消毒劑對(duì)養(yǎng)殖水體進(jìn)行處理，殺滅水體中游離病毒以及橈足類(lèi)、枝角類(lèi)等有可能攜帶WSSV的浮游生物，使WSSV的囊膜蛋白失活從而切斷水源傳播途徑。此外，通過(guò)實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，水源水經(jīng)過(guò)30m以上深度的沙井過(guò)濾可大大減少水體中弧菌和病毒等病原體以及有害浮游生物的數(shù)量，因此沙井過(guò)濾水可作為良好的養(yǎng)殖水源水。

現(xiàn)有的工廠(chǎng)化養(yǎng)殖技術(shù)尚達(dá)不到零排放，養(yǎng)殖廢水可通過(guò)沉淀、消毒、檢測(cè)合格后再進(jìn)行排放。病蝦、死蝦應(yīng)做無(wú)公害處理，加生石灰深埋處理，避免病死蝦排放到自然水域污染水源水。

（三）做好生物餌料的病原檢測(cè)和消毒

當(dāng)前的工廠(chǎng)化養(yǎng)殖主要為兩段法養(yǎng)殖，即中間培育和成蝦養(yǎng)殖。通常中間培育時(shí)會(huì)使用生物餌料，如豐年蟲(chóng)、輪蟲(chóng)、橈足類(lèi)等。研究中發(fā)現(xiàn)橈足類(lèi)有可能攜帶WSSV，而在生產(chǎn)實(shí)踐中也檢測(cè)到商品鹵蟲(chóng)、橈足類(lèi)休眠卵攜帶WSSV。因此應(yīng)加強(qiáng)生物餌料WSSV的檢測(cè)工作。

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，50ppm的高錳酸鉀處理5min即可破壞病毒幾乎所有的結(jié)構(gòu)蛋白和DNA結(jié)構(gòu)，從而使病毒顆粒失去感染活性。規(guī)范化的生物餌料培育，對(duì)卵的處理、孵化、擴(kuò)大培養(yǎng)、餌料的收集都應(yīng)做好消毒處理。此外還應(yīng)加強(qiáng)對(duì)購(gòu)買(mǎi)的商品生物餌料的消毒處理。消毒后的生物餌料還需要進(jìn)行WSSV檢測(cè)，確保合格再投入使用。

（四）良好的水質(zhì)管理

王年斌等認(rèn)為氨氮、硝酸氮、亞硝酸氮、化學(xué)耗氧量、鹽度和水溫等因子是決定對(duì)蝦疾病爆發(fā)的關(guān)鍵因子。因此良好的水質(zhì)對(duì)減少疾病的發(fā)生率有著重要的影響。夏季工廠(chǎng)化養(yǎng)殖車(chē)間溫度很高，藻類(lèi)繁殖旺盛，微生物分解殘餌、糞便的速度加快，容易形成pH波動(dòng)大，氨氮、亞硝酸急劇升高的不良環(huán)境?？赏ㄟ^(guò)改良通風(fēng)條件、降低養(yǎng)殖水體透明度、使用優(yōu)質(zhì)藻種肥水、合理投喂餌料、增加光合細(xì)菌、乳酸菌、硝化細(xì)菌一類(lèi)的益生菌的使用量、加強(qiáng)底部增氧、優(yōu)化生物處理池等措施改善水質(zhì)，必要時(shí)可適量換水。

工廠(chǎng)化養(yǎng)殖車(chē)間的生物處理池是水質(zhì)管理的重要環(huán)節(jié)。生物處理池中含有大量有益微生物，可以通過(guò)分解養(yǎng)殖用水中的有機(jī)廢物、轉(zhuǎn)化氨氮和亞硝酸等途徑改良水質(zhì)。但生物處理池的承載力是有限的，當(dāng)生物處理池處理過(guò)載時(shí)，可通過(guò)添加生物濾料來(lái)增大微生物附著總面積、提高養(yǎng)殖廢水的碳氮比（20:1）、延長(zhǎng)處理時(shí)間等方法提高處理池的處理能力，從而改善水質(zhì)。

（五）控制合理的養(yǎng)殖密度，加強(qiáng)免疫

南美白對(duì)蝦在室內(nèi)工廠(chǎng)化養(yǎng)殖密度較傳統(tǒng)要高，生產(chǎn)實(shí)踐中一般在375尾/m2～600尾/m2（＜8cm的標(biāo)粗蝦苗）。在供水充足的情況下，可適當(dāng)提高放養(yǎng)密度。但在南方高溫季節(jié)可適當(dāng)降低放養(yǎng)密度，生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，控制放養(yǎng)密度在300尾/m2～375尾/m2可有效避免病害的大規(guī)模爆發(fā)。

提高對(duì)蝦免疫力有助于對(duì)蝦抵抗病害感染。在對(duì)蝦病害流行季節(jié)，可通過(guò)在飼料中添加營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑、中草藥、解毒護(hù)肝劑、加強(qiáng)消化吸收劑來(lái)提高對(duì)蝦的免疫力。研究表明，在飼料中添加中草藥或者復(fù)方中草藥可顯著提高受到WSSV脅迫的南美白對(duì)蝦免疫性能和抗WSSV能力。在飼料中添加肽聚糖、葡聚糖等多糖類(lèi)制劑亦可提高南美白對(duì)蝦的抗菌和抗病毒能力，有效的幫助對(duì)蝦抵抗WWSV的感染。

（六）建立并嚴(yán)格執(zhí)行工廠(chǎng)化對(duì)蝦養(yǎng)殖的生物安保技術(shù)體系

對(duì)蝦工廠(chǎng)化健康養(yǎng)殖離不開(kāi)良好的種苗、水質(zhì)、餌料和優(yōu)秀的管理。黃倢認(rèn)為，良好管理的核心在于建立工廠(chǎng)化養(yǎng)殖生物安保體系，保證養(yǎng)殖系統(tǒng)中沒(méi)有病原。所謂生物安保，即以動(dòng)物病原風(fēng)險(xiǎn)分析為指導(dǎo)，通過(guò)在養(yǎng)殖設(shè)施、技術(shù)、管理上多方位實(shí)施病害防控措施，達(dá)到降低養(yǎng)殖系統(tǒng)中病原侵入、存留、傳播的風(fēng)險(xiǎn)的目的，提高養(yǎng)殖系統(tǒng)中動(dòng)物安全的整體水平。工廠(chǎng)化對(duì)蝦養(yǎng)殖的生物安保技術(shù)體系包括對(duì)蝦病原監(jiān)測(cè)計(jì)劃的制定、對(duì)蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估、病原風(fēng)險(xiǎn)的管理和建立可追溯的系統(tǒng)。

1.對(duì)蝦病原監(jiān)測(cè)計(jì)劃的制定

在對(duì)蝦病害流行的季節(jié)，應(yīng)制定對(duì)蝦病原監(jiān)測(cè)計(jì)劃，充分發(fā)揮檢驗(yàn)檢疫在對(duì)蝦工廠(chǎng)化養(yǎng)殖中的安保作用。通過(guò)對(duì)技術(shù)人員的培訓(xùn)，讓他們對(duì)病原的感染機(jī)制、傳播途徑、發(fā)病機(jī)制、發(fā)病癥狀有清晰而全面的了解。監(jiān)測(cè)對(duì)象包括進(jìn)排水、進(jìn)水渠道、鮮活餌料及冰鮮餌料、餌料休眠卵、幼蝦、成蝦、糞便、車(chē)間入侵動(dòng)物。采樣方法應(yīng)遵循隨機(jī)采樣、不限個(gè)體、多次采樣的原則，采樣頻率可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整，建議一周一次。樣品可送第三方檢測(cè)也可以采用巢氏PCR法自行檢測(cè)。

2.對(duì)蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估

對(duì)可能攜帶對(duì)蝦病原的餌料、水體、受精卵、無(wú)節(jié)幼體、糞便、對(duì)蝦親體、幼蝦、成蝦以及可能將對(duì)蝦病原引入到養(yǎng)殖體系的生產(chǎn)操作如交叉使用生產(chǎn)工具、投餌、換水、捕撈等行為、車(chē)間內(nèi)入侵動(dòng)物如老鼠、藤壺進(jìn)行全方位的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)評(píng)級(jí)，越是風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)高的越應(yīng)重視，對(duì)各部門(mén)的技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，加強(qiáng)對(duì)對(duì)蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的認(rèn)識(shí)，并確定病原的檢測(cè)技術(shù)。

3.對(duì)蝦病原風(fēng)險(xiǎn)的管理

建立全方位的消毒計(jì)劃，包括養(yǎng)殖場(chǎng)地與生產(chǎn)工具的消毒、水源水與進(jìn)水渠道的消毒、養(yǎng)殖尾水的消毒和養(yǎng)殖廢棄物的無(wú)公害處理、活餌料及冰鮮餌料的消毒，對(duì)于不同的消毒對(duì)象制定不同的消毒方案，并接受第三方檢疫機(jī)構(gòu)的檢查、評(píng)估，以確保消毒有效、徹底，做到養(yǎng)殖區(qū)域無(wú)疫。

4.建立可追溯的系統(tǒng)

制定工廠(chǎng)化對(duì)蝦健康養(yǎng)殖的標(biāo)準(zhǔn)操作流程，包括標(biāo)粗車(chē)間和養(yǎng)成車(chē)間的標(biāo)準(zhǔn)操作流程。標(biāo)準(zhǔn)操作流程應(yīng)全方位覆蓋，包括生產(chǎn)場(chǎng)地消毒、進(jìn)排水、衛(wèi)生管理、餌料投喂、搬蝦收蝦、日常巡邏、水質(zhì)檢測(cè)、樣品送檢，并完善生產(chǎn)管理記錄，構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)化的養(yǎng)殖場(chǎng)的全人員全過(guò)程的生產(chǎn)管理記錄和可追溯系統(tǒng)，以加強(qiáng)對(duì)蝦生物安保計(jì)劃的實(shí)施。