譚 丹，劉增再，薛 爽，陳 智，唐愛(ài)明，寧華杰

（長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙 410013）

狂犬?。╮abies）又稱(chēng)恐水癥，是由狂犬病病毒（rabies virus）引起的一種人獸共患急性傳染病，一旦發(fā)病，病死率幾乎達(dá)100%，目前尚無(wú)有效的治療手段，有效的疫苗免疫是預(yù)防和控制狂犬病最有效的手段，而免疫后抗體水平的高低是評(píng)價(jià)疫苗免疫效果的重要指標(biāo)。

湖南省長(zhǎng)沙市城區(qū)自實(shí)施國(guó)產(chǎn)狂犬疫病疫苗免費(fèi)免疫6 年以來(lái)[1]，尤其是犬類(lèi)狂犬病免疫職能下放至各城區(qū)管理后，犬類(lèi)免疫數(shù)量逐年上升。為確保免疫效果，長(zhǎng)沙市每年有計(jì)劃地開(kāi)展狂犬病免疫血清中和抗體檢測(cè)。本研究連續(xù)4 年（2015—2018）對(duì)長(zhǎng)沙市城區(qū)寵物犬進(jìn)行狂犬病免疫抗體檢測(cè)，并對(duì)免疫抗體合格率影響因素進(jìn)行分析，旨在為長(zhǎng)沙市犬狂犬病預(yù)防和疫苗效果評(píng)價(jià)等提供參考。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象與抽樣

根據(jù)各城區(qū)寵物醫(yī)院實(shí)際情況，設(shè)寵物醫(yī)院為定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，每年定期抽取犬血清，同時(shí)記錄血清的背景信息和免疫情況。2015 年定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)量為17 個(gè)，2018 年增加到41 個(gè)，4 年間共在長(zhǎng)沙市6 個(gè)區(qū)的41 個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)抽檢樣品2 137 份（表1）。

表1 2015—2018 年長(zhǎng)沙市各區(qū)縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)量及送檢血清數(shù)量 單位：個(gè)/份

1.2 檢測(cè)方法

采用法國(guó) SYBIOTICS 犬貓狂犬病抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清抗體定量檢測(cè)，具體操作參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦標(biāo)準(zhǔn)[2]，保護(hù)狂犬病病毒感染所需的最低抗體滴度為0.5 IU/mL，如果低于0.5 IU/mL，則沒(méi)有保護(hù)。

1.3 結(jié)果判定

當(dāng)陽(yáng)性質(zhì)控OD ≥0.300，并且陰性質(zhì)控OD ＜陽(yáng)性質(zhì)控OD×0.5 時(shí)，試驗(yàn)成立。樣品OD ≥陽(yáng)性O(shè)D 時(shí)，判定為陽(yáng)性，可認(rèn)為該血清合格，抗體具體有保護(hù)力，反之為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

檢測(cè)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 及Excel 2007 進(jìn)行分析處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗體合格情況

長(zhǎng)沙市城區(qū)整體免疫抗體合格率總體呈上升趨勢(shì)，由2015 年的50%以下，上升至2017 年、2018 年的70%以上，達(dá)到了國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)[3]。各區(qū)定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果（表2）顯示：開(kāi)福區(qū)、芙蓉區(qū)抗體合格率呈現(xiàn)直線(xiàn)上升趨勢(shì)，由2015 年的40%以下，上升至2018 年的80%以上；天心區(qū)、岳麓區(qū)抗體合格率變化不明顯，穩(wěn)定在60%上下，普遍不高；雨花區(qū)每年的抗體合格率一直處于全市城區(qū)的最高水平，2018 年達(dá)到了84.38%。高新區(qū)從2017 年開(kāi)始檢測(cè)，但因當(dāng)年的采樣量極小，無(wú)法反映真實(shí)情況；2018 年的合格率為50%，較為偏低。整體來(lái)看，開(kāi)福區(qū)、芙蓉區(qū)、雨花區(qū)免疫合格率較高，天心區(qū)、岳麓區(qū)、高新區(qū)免疫合格率偏低。

表2 2015—2018 年長(zhǎng)沙市各城區(qū)犬狂犬病抗體合格率統(tǒng)計(jì) 單位：%（份）

2.2 抗體合格率影響因素

2.2.1 不同年齡段 對(duì)2017 年背景信息詳細(xì)的669 份血清的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，狂犬病抗體合格率為72.39%，基本達(dá)到了免疫保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)，其中6 月齡以下犬的抗體合格率為66.67%，6～12 月齡的抗體合格率為69.23%，1～2歲的為68.61%，2～5 歲的達(dá)到83.59%，5 歲以上的降為72.37%?？傮w來(lái)說(shuō)，5 歲以前，犬抗體合格率隨年齡增長(zhǎng)同比上升，5 歲以后開(kāi)始下降。

2.2.2 不同性別 對(duì)669 份血清樣品的抗體檢測(cè)結(jié)果，按照不同性別分類(lèi)，發(fā)現(xiàn)公犬的抗體合格率為74.67%，母犬合格率為71.43%，將兩者進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同性別犬的狂犬病合格率差異不顯著（P=0.350，＞0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。

2.2.3 免疫后時(shí)間 考慮到狂犬病疫苗免疫后抗體產(chǎn)生增減規(guī)律，對(duì)669 份血清抗體檢測(cè)結(jié)果，按免疫后采樣時(shí)間進(jìn)行分類(lèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，1 個(gè)月內(nèi)的抗體合格率為69.43%，2～6 個(gè)月的為77.59%，半年以上的降為65.44%?？ǚ綑z驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同免疫后時(shí)間的犬狂犬病抗體合格率差異顯著（P=0.022，＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。

2.2.4 免疫次數(shù) 對(duì)669 份血清抗體檢測(cè)結(jié)果，按照不同免疫次數(shù)進(jìn)行分類(lèi)整理，發(fā)現(xiàn)免疫1 次的抗體合格率最低，為67.06%，免疫2～3 次的為75.19%，免疫4～6 次的最高，為81.54%，7 次以上的下降為72.00%?？ǚ綑z驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同免疫次數(shù)的犬狂犬病抗體合格率差異顯著（P=0.019，＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。

2.2.5 疫苗種類(lèi)及廠(chǎng)家 為評(píng)價(jià)不同疫苗的免疫效果，剔除6份免疫國(guó)產(chǎn)疫苗的犬血清（基數(shù)太?。俑鶕?jù)疫苗的種類(lèi)和廠(chǎng)家，整理了663 份血清抗體檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)免疫國(guó)產(chǎn)疫苗的抗體合格率為74.47%，免疫進(jìn)口疫苗的為73.05%，兩者相差不大，差異不明顯（P=0.700，＞0.05）；同時(shí)免疫進(jìn)口法國(guó)B 疫苗的抗體合格率最高，為88.64%，免疫法國(guó)A 疫苗、美國(guó)A 疫苗及國(guó)產(chǎn)A 疫苗的抗體合格率均在70%以上，而免疫荷蘭A 疫苗的抗體合格率最低，為63.57%?？ǚ綑z驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同疫苗廠(chǎng)家的犬狂犬病抗體合格率差異顯著（P=0.018，＜0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3）。

3 討論

據(jù)WHO 研究表明，實(shí)施對(duì)狂犬病易感動(dòng)物的免疫接種是有效預(yù)防狂犬病的基本策略，當(dāng)易感動(dòng)物免疫覆蓋率達(dá)到70%以上時(shí)，即可有效抑制狂犬病的傳播[3]。而確保免疫覆蓋率的先決條件是免疫的有效性，即動(dòng)物免疫狂犬病疫苗后，只有當(dāng)狂犬病的抗體滴度≥0.5 IU/mL 時(shí)，才能保證動(dòng)物有抵抗狂犬病病毒侵襲的能力。雖然依據(jù)抗體滴度的高低來(lái)評(píng)價(jià)一種疫苗免疫是否成功不是很全面，因?yàn)樵诳箍袢〔《靖腥痉矫?，?xì)胞免疫和體液免疫都起到非常重要的作用[4]，但抗體水平高低在一定程度上反映了免疫效果。

表3 不同因素對(duì)免疫抗體合格率的影響

為了解長(zhǎng)沙市城區(qū)寵物犬狂犬病免疫效果，2015 年至2018 年4 年間，每年在城區(qū)設(shè)定監(jiān)測(cè)點(diǎn)進(jìn)行狂犬病抗體水平監(jiān)測(cè)，共檢測(cè)動(dòng)物血清樣品2 137 份。雖然2015 年和2016 年的免疫效果不是很好，抗體合格率沒(méi)有達(dá)到70%的標(biāo)準(zhǔn)，但2017年后抗體合格率維持在70%以上，并呈上升趨勢(shì)，說(shuō)明長(zhǎng)沙市城區(qū)寵物犬免疫管理措施逐漸完善，犬只的免疫覆蓋率和有效率大大提高，已基本形成了抵御狂犬病病毒侵襲的有效屏障。

從6 個(gè)區(qū)的監(jiān)測(cè)情況看，芙蓉區(qū)、雨花區(qū)和開(kāi)福區(qū)免疫效果最好，而天心區(qū)、岳麓區(qū)和高新區(qū)免疫抗體合格率偏低，存在一定的感染風(fēng)險(xiǎn)，也說(shuō)明這些地區(qū)在疫苗免疫過(guò)程中，可能存在疫苗質(zhì)量較低、免疫程序不當(dāng)、免疫操作及樣品采集不規(guī)范等問(wèn)題。

本次監(jiān)測(cè)的范圍局限于長(zhǎng)沙市城區(qū)，其結(jié)果只能反映城區(qū)內(nèi)寵物犬的狂犬病抗體水平，而對(duì)于長(zhǎng)沙市周邊農(nóng)村城鎮(zhèn)犬只的免疫情況及免疫效果目前仍是空白，下一步需擴(kuò)大監(jiān)測(cè)范圍，加大對(duì)農(nóng)村散養(yǎng)犬只的監(jiān)測(cè)力度。

從不同年齡和免疫次數(shù)的抗體檢測(cè)結(jié)果看，兩者是相吻合的，犬的狂犬病抗體合格率隨犬只年齡和免疫次數(shù)增長(zhǎng)而提高。1 歲左右的犬只狂犬病抗體合格率低于70%，這可能是因?yàn)? 個(gè)月以?xún)?nèi)的犬只有母源抗體保護(hù)，同時(shí)免疫1 次可能存在免疫失敗或者產(chǎn)生抗體滴度不高的現(xiàn)象；2～5 歲抗體合格率達(dá)到最高，同時(shí)免疫2 次以上的狂犬病抗體合格率明顯增高，免疫4～6 次后達(dá)到最高（81.54%），說(shuō)明免疫次數(shù)越多，合格率越高。而免疫7 次以上免疫抗體合格率反而降低，這可能是因?yàn)槿荒挲g偏大后免疫機(jī)能下降導(dǎo)致的。從免疫后不同采樣時(shí)間的檢測(cè)結(jié)果看，免疫后1個(gè)月內(nèi)，犬只抗體合格率最低。這是因?yàn)闄C(jī)體只有在21 d 后，才會(huì)漸產(chǎn)生較高的抗體[5]，或者部分犬可能存在免疫失敗[6]，而免疫2～6 個(gè)月后的抗體合格率最高，免疫7 個(gè)月之后逐漸降低，這符合免疫抗體的消減規(guī)律。因此，建議首免1 個(gè)月后，進(jìn)行加強(qiáng)免疫，以后每年再次加強(qiáng)免疫。本研究發(fā)現(xiàn)，國(guó)產(chǎn)疫苗和進(jìn)口疫苗的免疫效果相差不大。雖然本研究中的免疫國(guó)產(chǎn)疫苗的樣本量太少，會(huì)對(duì)結(jié)果造成一定的影響，但相關(guān)文獻(xiàn)[7-8]也報(bào)道，國(guó)產(chǎn)疫苗并不比進(jìn)口疫苗的免疫效果差。不同廠(chǎng)家疫苗的免疫效果略有差異，大部分廠(chǎng)家的疫苗抗體合格率均能達(dá)到70%以上，也有部分國(guó)外廠(chǎng)家疫苗效果偏低，所以市民可以根據(jù)自身情況，選擇合適的疫苗。

4 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)：長(zhǎng)沙市城區(qū)近幾年寵物犬只狂犬病免疫抗體合格率逐年上升，免疫效果較好；城區(qū)犬狂犬病免疫合格率與犬年齡、免疫次數(shù)、免疫后時(shí)間及疫苗廠(chǎng)家有一定關(guān)系，而性別、疫苗種類(lèi)對(duì)抗體合格率影響不大。因此，在首次免疫后，需要進(jìn)行抗體監(jiān)測(cè)，做好犬的加強(qiáng)免疫工作，以保證犬處于較高的免疫保護(hù)水平。