晏菊姣，汪鑫，陳蓉，王珺

(武漢藥品醫(yī)療器械檢驗所，武漢 430075)

甲磺酸帕珠沙星是日本研究開發(fā)的第3代喹諾酮類廣譜抗菌藥，對厭氧菌有較強的抗菌活性[1]。我國目前有甲磺酸帕珠沙星大容量注射液，小容量注射液及凍干粉針三個注射劑型。甘露醇通?？勺鲀龈煞坩槃┹d體，使用較多。《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則0102僅對注射劑中常用抗氧劑與抑菌劑規(guī)定一般濃度范圍[2]，對其他添加的輔料僅僅描述為“適量”，注射用輔料的用量不規(guī)范影響藥物的療效和安全性。在甲磺酸帕珠沙星系列制劑國家評價性抽驗中，筆者收集7家藥品生產(chǎn)企業(yè)23批次注射用甲磺酸帕珠沙星樣品，其中6家生產(chǎn)企業(yè)都使用甘露醇，僅1家未使用。從生產(chǎn)企業(yè)提供的處方來看，使用量差別比較大。輔料甘露醇的用量不一，可影響產(chǎn)品穩(wěn)定性和使用時滲透壓不一致，易出現(xiàn)不良反應(yīng)[3-5]。同時甘露醇具有一定的藥理活性，使用得當可增加制劑的穩(wěn)定性并降低毒副作用[3]；使用不當則會增加藥物不良反應(yīng)的發(fā)生率。注射劑中應(yīng)盡量少加添加劑，或用量盡量少達到最好的效果來減少風(fēng)險。因此，有必要對輔料的含量進行控制[6]，更不能違法添加。筆者采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(HPLC-ELSD)法測定注射用甲磺酸帕珠沙星中甘露醇含量，并進行方法學(xué)考察，為該品種的輔料用量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1儀器 WATERS高效液相色譜儀(帶四元泵)；ALLTECH2000蒸發(fā)光散射檢測器；自動進樣器；XS105電子天平(梅特勒-托利多儀器公司，感量：0.01 mg)。

1.2試藥 甘露醇對照品(中國食品藥品檢定研究院，含量測定用，批號：100533-201103，含量：98.5%)；乙腈為HPLC級，實驗用水為超純水。注射用甲磺酸帕珠沙星(生產(chǎn)企業(yè)7家，23批)。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 采用依利特NH2色譜柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相：乙腈-水(90：10)，流速：1 mL·min-1，柱溫：30 ℃。蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度：90 ℃；空氣流速：2.0 L·min-1。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 取甘露醇對照品40 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液的制備 取供試品適量，加水制成相當于每毫升含甘露醇0.4 mg的溶液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按注射用甲磺酸帕珠沙星處方制備不含甘露醇的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制備陰性樣品溶液。

2.3專屬性實驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性樣品溶液，按“2.1”項色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖。見圖1。結(jié)果供試品溶液與對照品溶液色譜呈現(xiàn)保留時間相同的色譜峰，陰性樣品溶液無干擾。在此實驗條件下甘露醇與其他組分分離良好。理論板數(shù)按甘露醇峰計算應(yīng)不低于3000。

1.甘露醇

2.4線性關(guān)系實驗 分別精密吸取對照品溶液2,4,5,10,15,20 μL(含甘露醇0.792，1.580，1.979，3.928，5.937，7.916 μg)，按“2.1”項下色譜條件注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積常用對數(shù)(Y)對進樣質(zhì)量(μg)常用對數(shù)(X)進行線性回歸，得回歸方程為：Y=1.581X+5.774，r=0.999 5，線性范圍為0.792～7.916 μg。表明在此范圍內(nèi)甘露醇進樣質(zhì)量對數(shù)與峰面積對數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度實驗 取“2.2.1”項對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，峰面積RSD為0.42%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性實驗 按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液1份，分別于0，2，8，12，24 h進樣，進樣量為10 μL，結(jié)果峰面積的RSD為0.98%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性實驗 取某企業(yè)樣品(批號：130203)，按“2.2.2”項下方法制備，取含量測定濃度的80%、100%、120%溶液各3份，注入液相色譜儀進行測定，計算9份樣品中甘露醇的含量，結(jié)果平均值為14.7 mg·g-1，含量的RSD=1.26%(n=9)，結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2.8準確度實驗 精密稱取已測定甘露醇含量的樣品(批號：130203，含量14.7 mg·g-1)適量，精密加入甘露醇，按“2.2.2”項下方法分別配制含量測定濃度80%、100%、120%的溶液各3份，注入液相色譜儀進行測定，計算9份樣品的回收率，分別為：100.77%，103.01%，104.68%，100.33%，97.83%，100.82%，98.72%，102.04%，102.88%；平均回收率為101.2%，RSD=2.1%。

2.9樣品測定結(jié)果 取7個廠家生產(chǎn)的注射用甲磺酸帕珠沙星23批次，依法測定，結(jié)果其中G生產(chǎn)企業(yè)6個批次均未檢出甘露醇，其他企業(yè)測定結(jié)果見表1。

3 討論

3.1方法的必要性 藥用輔料是制劑一個重要組成成分，直接進入到人體，輔料質(zhì)量的好壞、量的多少與人的生命健康息息相關(guān)。凍干粉針由于輔料和工藝的原因,吸濕性一般均較強[7]，易影響藥物質(zhì)量，同時鑒于甘露醇自身的生理活性問題(作降壓劑、利尿劑、脫水劑，對人體腸道的清理和輕微的脫水作用)[8]，為保證安全用藥，有必要考察輔料的投料情況。

3.2方法實用性 企業(yè)在研發(fā)過程中可通過此測定方法篩選樣品工藝，確定甘露醇的用量，保證藥品質(zhì)量。從收集到樣品來看，各企業(yè)的甘露醇用量為0～345.16 mg·g-1，差異很大，甘露醇雖然利于復(fù)溶，但其本身的質(zhì)量和加入量會影響制劑的質(zhì)量，包括細菌內(nèi)毒素[9]、不溶性微粒、溶液的澄清度和顏色、水分等。某企業(yè)甘露醇加入與主藥比達到1：1，凍干過程中甘露醇量大，空隙致密，水分不易逸出，這也是該企業(yè)產(chǎn)品水分較其他企業(yè)偏高的原因之一。輔料量影響藥物制劑的穩(wěn)定性，并增加安全風(fēng)險，因此各企業(yè)的甘露醇處方量值得商榷。

表1 不同生產(chǎn)企業(yè)注射用甲磺酸帕珠沙星中甘露醇含量

生產(chǎn)企業(yè)和監(jiān)管部門通過此測定方法對生產(chǎn)過程中添加的輔料進行監(jiān)控，以利于企業(yè)嚴格按規(guī)范進行生產(chǎn)，保證藥品的安全性。從檢驗結(jié)果來看，各企業(yè)甘露醇為標示量73.3%～108.2%，投料基本符合處方，但部分企業(yè)批次間波動較大，不利于產(chǎn)品質(zhì)量控制。

3.3測定方法的選擇 甘露醇自身沒有紫外吸收。其屬于六元醇極性化合物，在常規(guī)的C18柱上幾乎無保留。文獻有采用高效液相色譜法(氨基柱[10]或強陽離子交換柱[11-12])-RID及HPLC-ELSD[13]，但強陽離子交換柱較昂貴，蒸發(fā)光散射器適用范圍廣，比RID受外界因素干擾較少[10-13]。考慮到測定對象是注射劑中輔料，主藥含量較大，為避免主藥和其他輔料的干擾，選擇使用氨基柱和ELSD。適當增強乙腈的比例，檢測器的基線噪聲降低、分離度變高。該實驗中乙腈-水(90：10)時分離度較好。結(jié)果表明本研究中方法專屬性強，精密度、穩(wěn)定性較好，準確度較高，能客觀反映甘露醇的含量，可作為注射用甲磺酸帕珠沙星中輔料甘露醇的含量檢測方法。