胡曉舒 王娜 楊金花 溫一陽

（1 河南省鄭州人民醫(yī)院病理科 鄭州 450003；2 河南省人民醫(yī)院腫瘤科 鄭州 450003）

結(jié)腸癌是臨床最常見的惡性腫瘤疾病之一，受近年來生存環(huán)境和生活方式改變的影響，結(jié)腸癌患病率明顯增加且呈逐漸上升趨勢，已成為威脅我國居民身心健康和生命安全的重要疾病。結(jié)腸癌多發(fā)于乙狀結(jié)腸和直腸交界處，起病隱匿，患者早期多無典型臨床表現(xiàn)，當(dāng)出現(xiàn)明顯臨床癥狀時，病情已進展至中后期，治療難度明顯增加，如何提升結(jié)腸癌早期診斷檢出率是當(dāng)前臨床亟待解決的難題[1]。本研究對收治的80 例結(jié)腸癌患者開展研究，分別測定了所有患者病灶和正常組織中Mina53 和H-鈣黏蛋白的表達情況，分析了Mina53 和H-鈣黏蛋白與結(jié)腸癌病情進展的相關(guān)性?，F(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年4 月～2018 年4 月行手術(shù)治療的80 例結(jié)腸癌患者作為研究對象。其中男46 例，年齡39～72 歲，平均年齡（51.60±7.60）歲；病程1～3 年，平均病程（1.20±0.65）年。女34例，年齡38～70 歲，平均年齡（50.48±7.71）歲；病程1～4 年，平均病程（1.17±0.70）年。術(shù)中取所有患者的病灶組織和癌旁正常組織樣本各80 例，分為病灶組和正常組。本研究征得患者及家屬同意，已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)（1）納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：經(jīng)影像學(xué)和病理組織檢驗確診為結(jié)腸癌者，結(jié)腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《結(jié)腸癌治療指南》；患者均自愿參與，并簽署知情同意書；免疫和凝血功能無障礙；無其他血液系統(tǒng)或傳染性疾??；治療隨訪調(diào)查配合度和依從性良好；首次診斷，無手術(shù)、放化療等治療史。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：十二指腸潰瘍者；認(rèn)知功能障礙者；合并其他惡性腫瘤患者；妊娠期或哺乳期患者。

1.3 檢測方法（1）檢測試劑盒及試劑：人Mina53多克隆抗體（購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）、濃縮型DAB 試劑盒、GST 瓊脂糖、RNA 提取試劑盒等。（2）重組人Mina53 蛋白檢測方法：術(shù)中取結(jié)腸癌病灶組織及癌旁正常組織樣本，放入10%福爾馬林溶液固定后切片（5 μm），用二甲苯、乙醇和磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗后阻斷過氧化物酶活性，滴入人Mina53 多克隆一抗和二抗后過夜孵育，PBS 沖洗后使用蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水封片后觀察染色結(jié)果。通過觀察染色強度和染色程度評估Mina53 蛋白表達情況。（3）H-鈣黏蛋白檢測方法：染色方法基本相同，向組織切片中滴入H-鈣黏蛋白多克隆抗體50 μl，過夜后加入二抗孵育，DAB 顯色后復(fù)染，常規(guī)脫水干燥后封片，使用光學(xué)顯微鏡觀察染色結(jié)果。通過觀察染色強度和染色程度評估H-鈣黏蛋白表達情況。

1.4 觀察指標(biāo) 比較結(jié)腸癌組織和癌旁正常組織中Mina53 和H-鈣黏蛋白表達情況，染色強度弱計1 分，中等計2 分，強計3 分；染色程度通過染色范圍表示，≤25%計1 分、26%～50%計2 分、51%～75%計3 分、76%～100%計4 分；兩種計分相加，≤4 分為低表達，≥5 分為高表達。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗，計量資料以表示，采用t檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織樣本中Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性表達情況 Mina53 和H-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌病灶組中呈陽性高表達，且陽性表達率均明顯高于正常組織（P＜0.05）。見表1。

表1 不同組織樣本中Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性表達情況比較

2.2 Mina53 和H-鈣黏蛋白表達與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，Mina53 和H-鈣黏蛋白表達水平與結(jié)腸癌分化程度、TNM 分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，隨腫瘤病灶分化程度增高和TNM 分期增加，Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性率相應(yīng)增高（P＜0.05），伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病灶Mina53 和H-鈣黏蛋白表達陽性率高于無轉(zhuǎn)移病灶（P＜0.05）；在年齡和性別上也有明顯的差異（P＜0.05），男性及年齡＜48 歲人群的Mina53和H-鈣黏蛋白陽性占比高于女性和年齡＞48 歲的人群。見表2。

表2 Mina53 和H-鈣黏蛋白表達與結(jié)腸癌臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

3 討論

近年來，結(jié)腸癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)均呈上升趨勢，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。結(jié)腸癌的具體起病機制尚不明確，可能與遺傳和環(huán)境相關(guān)[3]。雖然結(jié)腸癌早期可通過手術(shù)切除治療，但因該病起病隱匿，多數(shù)患者在確診時已進展至中后期，治療效果和預(yù)后質(zhì)量明顯降低，病死率相應(yīng)升高[4]。探尋一種有效的早期篩查方法對提升結(jié)腸癌患者的臨床療效及預(yù)后質(zhì)量有積極意義。

本研究以收治的80 例結(jié)腸癌患者作為研究對象，分別檢測患者病灶組織和正常組織中Mina53和H-鈣黏蛋白的表達情況，以探討Mina53 和H-鈣黏蛋白測定應(yīng)用于結(jié)腸癌早期診斷中的價值。結(jié)果顯示，Mina53 和H-鈣黏蛋白在病灶組織中的陽性表達率明顯高于正常組織，提示可以通過測定Mina53 和H-鈣黏蛋白水平預(yù)測結(jié)腸癌發(fā)病。Mina53 是Myc 誘導(dǎo)的核抗原，H-鈣黏蛋白屬于鈣黏蛋白類，多項臨床研究顯示，Mina53 和H-鈣黏蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、增殖和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌患者病灶組織中均存在不同程度的Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性高表達，且隨著腫瘤病灶分化程度、TNM 分期的進展而升高，提示Mina53和H-鈣黏蛋白可作為評估結(jié)腸癌病程的重要參考指標(biāo)。另外，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌病灶中，Mina53 和H-鈣黏蛋白陽性率更高，提示Mina53 和H-鈣黏蛋白可能參與了結(jié)腸癌的發(fā)展和演變，通過進一步研究Mina53 和H-鈣黏蛋白作用機制可能為結(jié)腸癌的治療提供新靶點[5～6]。曹偉等[7]研究指出，結(jié)腸癌患者病灶組織中Mina53 表達水平明顯高于腺瘤和正常黏膜組織，且高齡者及男性的表現(xiàn)更加直觀，與本研究的結(jié)論基本一致，均證實了Mina53可能與結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展有相關(guān)性。本研究的不足之處在于選取樣本量較少，結(jié)果可能出現(xiàn)誤差，期待后續(xù)更多更全面的研究證實此觀點。綜上所述，Mina53 和H-鈣黏蛋白在結(jié)腸癌組織中呈陽性高表達，表達水平與病灶分化程度、TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，可作為結(jié)腸癌診斷的重要參考依據(jù)。