王洪濤，劉照容，王敬磊，王方，張彥卓

(徐州醫(yī)科大學(xué)，江蘇省新藥研究與臨床藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 徐州 221004)

吉非替尼(gefitinib,GFB)是一種選擇性作用于表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)的酪氨酸激酶抑制劑[1-2]，可以競爭性地結(jié)合EGFR胞內(nèi)ATP位點(diǎn)，阻斷信號(hào)傳導(dǎo)，抑制腫瘤細(xì)胞的繁殖、轉(zhuǎn)移，發(fā)揮靶向作用[3]。GFB臨床上作為抗晚期非小細(xì)胞肺癌治療的藥物，市售制劑為片劑，由于首過效應(yīng)、P-糖蛋白外排作用，存在生物利用度低、個(gè)體差異大、胃腸道不良反應(yīng)隨劑量增加而加重等問題[4-5]。

脂質(zhì)體是一類將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)形成的微型囊泡體，主要成分為磷脂、膽固醇，具有無毒、無免疫原性、生物相容性好的特點(diǎn)。難溶性藥物包埋于脂質(zhì)雙分子層中，有利于提高難溶藥物的溶解度[6-7]。脂質(zhì)體通過吸附、融合、內(nèi)吞等方式被細(xì)胞攝取，實(shí)現(xiàn)藥物的胞內(nèi)遞送[8-9]。但僅由磷脂、膽固醇形成的脂質(zhì)體穩(wěn)定性差、包封率較低，限制了體內(nèi)外運(yùn)用。泊洛沙姆407是由聚氧乙烯和聚氧丙烯組成的嵌段聚合物，中間為疏水聚氧丙烯嵌段，兩側(cè)為親水性聚氧乙烯嵌段，具有良好的兩親性，可與生物膜材料良好相容[10]，同時(shí)對(duì)P-糖蛋白介導(dǎo)的藥物外排作用有抑制效果[11]。泊洛沙姆407與磷脂形成脂質(zhì)體時(shí)，可增加脂質(zhì)體的強(qiáng)度，同時(shí)作為表面活性劑可提高藥物的溶解度[12]。本課題制備泊洛沙姆407修飾的吉非替尼脂質(zhì)體(GFB-PML)，通過泊洛沙姆407的修飾增加藥物溶解性、包封率，發(fā)揮脂質(zhì)體的被動(dòng)靶向與吉非替尼的分子靶向的雙重作用，通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)與小鼠體內(nèi)腫瘤生長實(shí)驗(yàn)考察GFB-PML的腫瘤抑制效果，為吉非替尼的新劑型研究提供參考。

1 材料和方法

1.1 儀器與材料

1.1.1 儀器 RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；SH2-CA循環(huán)水式多用真空泵(鞏義市予華儀器有限公司)；SB-5200超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技公司)；MS104S/01分析天平(梅特勒-托利多公司)；Nicomp 380/ZLS納米粒度及Zeta電位測定儀(美國PSS公司)；FD-1C-50冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)實(shí)驗(yàn)儀器公司)；CKX31顯微鏡(日本奧林巴斯公司)；SHZ-82A數(shù)顯恒溫振蕩器(金壇區(qū)白塔新寶儀器廠)；H1850臺(tái)式高速離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)；1260高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。

1.1.2 試藥 大豆卵磷脂(上海阿拉丁試劑公司，批號(hào)：G1813018)；膽固醇(上海阿拉丁試劑公司，批號(hào)：G12600)；泊洛沙姆407(巴斯夫股份公司，批號(hào)：WPW1603B)；吉非替尼原料藥(南京亞東啟天藥業(yè)有限公司，批號(hào)：180420)；吉非替尼對(duì)照品(南京亞東啟天藥業(yè)有限公司，批號(hào)：180309)；透析袋(上海源葉生物科技公司，MCWO 8000-14000)；超濾管(北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司，MWCO 10K)；噻唑藍(lán)(MTT)細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(凱基生物技術(shù)股份有限公司，批號(hào)：20180413)；香豆素-6(北京百靈威科技有限公司，批號(hào)：LPC0R06);赫斯特?zé)晒馊玖?3342(上海阿拉丁試劑公司，批號(hào)：11318001)；羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(翎盛科技有限公司，批號(hào)：T03598)；乙腈、乙酸銨為色譜純；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3 細(xì)胞及動(dòng)物 人肺癌細(xì)胞A549、小鼠肝癌細(xì)胞H22購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫；昆明小鼠，雌性，體重(20±5)g，購于徐州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK(蘇)2010-0011，常規(guī)飼養(yǎng)1周后進(jìn)行造模。

1.2 方法

1.2.1 GFB-PML的制備 采用薄膜分散-水化法制備GFB-PML。即稱取磷脂20 mg、膽固醇6 mg、泊洛沙姆407 10 mg、GFB 5 mg，置于100 mL茄形瓶中，加入30 mL無水乙醇超聲溶解。50 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，待形成薄膜后，加入5 mL pH 7.4磷酸鹽緩沖液，超聲水化，得到脂質(zhì)體混懸液。將脂質(zhì)體混懸液過0.45 μm微孔濾膜，即得GFB-PML溶液?？瞻撞绰迳衬沸揎椫|(zhì)體(PML)處方中不含GFB，其他制備過程保持一致。將GFB-PML溶液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，-20 ℃預(yù)凍12 h后，于冷凍干燥機(jī)內(nèi)凍干24 h，得GFB-PML凍干粉。

1.2.2 GFB-PML內(nèi)藥物的測定

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent TC-C18柱(4.66 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-乙酸銨水溶液(51∶49，乙酸銨濃度為0.01 mol·L-1)，流速為1 mL·min-1，柱溫35 ℃，紫外檢測波長247 nm，進(jìn)樣量20 μL。

1.2.2.2 GFB標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取GFB對(duì)照品10.00 mg，溶于100 mL乙腈中，配成100 μg·mL-1的GFB儲(chǔ)備液。分別吸取上述溶液適量，乙腈稀釋至終濃度為0.05、0.1、0.5、1、5、10、50 μg·mL-1的溶液。高效液相色譜儀進(jìn)樣，記錄峰面積。

1.2.2.3 精密度試驗(yàn) 分別配制0.1、1、50 μg·mL-1的GFB溶液，于同一天內(nèi)重復(fù)測定5次，計(jì)算日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。重復(fù)測定3 d，計(jì)算日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.2.2.4 回收率試驗(yàn) 取9份1 mL制備的PML溶液，加至25 mL容量瓶內(nèi)，分別加入適量“1.2.2.2”項(xiàng)下GFB儲(chǔ)備液，每組3份，乙腈定容至刻度線，制成低、中、高(0.2、2.0、10.0 μg·mL-1)濃度的供試品溶液。進(jìn)液相測定峰面積，與同濃度GFB標(biāo)準(zhǔn)溶液測定峰面積進(jìn)行比較，計(jì)算回收率。

1.2.3 GFB-PML的質(zhì)量研究

1.2.3.1 粒徑和Zeta電位的測定 吸取適量制備的GFB-PML溶液，用去離子水稀釋數(shù)倍并超聲分散，用Nicomp380/ZLS型納米粒度與Zeta電位測定儀測定粒徑、PDI值、Zeta電位，重復(fù)測定3次。

1.2.3.2 GFB-PML載藥量與包封率的測定 稱取10 mg GFB-PML凍干粉，記錄質(zhì)量m1。加5 mL乙腈超聲20 min破乳，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶并定容，過0.45 μm微孔濾膜后按“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行液相檢測，記錄峰面積，對(duì)應(yīng)濃度為C0。按以下公式計(jì)算載藥量：載藥量(%)=(25C0×10-3/m1)×100%。吸取500 μL GFB-PML溶液，加至超濾管中，9 500 rpm離心30 min，吸取濾過液，按“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行液相檢測，記錄峰面積，對(duì)應(yīng)游離濃度C1。同時(shí)吸取500 μL GFB-PML溶液加至25 mL容量瓶中，加乙腈定容，進(jìn)樣并計(jì)算總濃度C2。按以下計(jì)算包封率：包封率(%)=(1-C1/50C2)×100%。

1.2.3.3 形態(tài)學(xué)觀察 將制備的GFB-PML混懸液用適量純化水稀釋，滴于銅網(wǎng)上，自然晾干，醋酸鈾負(fù)染后，進(jìn)行透射電鏡拍攝，觀察形態(tài)。

1.2.3.4 體外釋放度實(shí)驗(yàn) 稱取10 mg GFB-PML凍干粉，記錄質(zhì)量m2，5 mL釋放介質(zhì)(PBS7.4磷酸鹽緩沖液，含30%甲醇，V/V)溶解，轉(zhuǎn)移至透析袋中，置于含95 mL釋放介質(zhì)的燒杯內(nèi)，于37 ℃，100 rpm恒溫振蕩器內(nèi)振搖，平行3組。同時(shí)稱取GFB原料藥，甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至透析袋內(nèi)，相同釋放介質(zhì)進(jìn)行釋放。平行3組。分別于第0.5、1、2、4、6、8、12、24、36、48 h從各燒杯內(nèi)取樣5 mL,同時(shí)補(bǔ)充相同體積的釋放介質(zhì)，樣品經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過后，按“1.2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行濃度檢測，根據(jù)下式計(jì)算累積釋放率：累積釋放率(%)=(100×Cn+5×∑n-1Cn-1)×10-3/m2×100%，Cn為第n次取樣樣品濃度。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，GFB的累積釋放率為縱坐標(biāo)，繪制釋放曲線。

1.2.4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

1.2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將A549細(xì)胞接種于含完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清，1%雙抗的DMEM培養(yǎng)基)的培養(yǎng)瓶內(nèi)，于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，待瓶內(nèi)細(xì)胞數(shù)量達(dá)80%～90%時(shí)可進(jìn)行傳代。棄去細(xì)胞瓶內(nèi)培養(yǎng)基，生理鹽水清洗后加入1.5 mL胰酶，消化3 min后加入等體積完全培養(yǎng)基終止消化。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，800 rpm離心3 min，棄去上清，加入完全培養(yǎng)基吹打均勻后吸取部分轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶內(nèi)，放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2.4.2 細(xì)胞攝取 按“1.2.1”項(xiàng)下GFB-PML制備方法，將GFB替換成香豆素-6溶液0.2 mL(0.5 mg·mL-1)制備載香豆素-6的熒光脂質(zhì)體(C6-PML)。取對(duì)數(shù)生長期的A549細(xì)胞，消化離心后，棄去上層液體，加入新DMEM培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)，以每孔2×104個(gè)細(xì)胞接種于24孔板，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h。吸去培養(yǎng)基后，按C6-PML終濃度為50、200、500、1 000 μg·mL-1將C6-PML培養(yǎng)基溶液加入孔內(nèi)，培養(yǎng)4 h；吸取500 μg·mL-1C6-PML培養(yǎng)基溶液加入孔內(nèi)，培養(yǎng)0.5、2、4 h，攝取結(jié)束后棄去培養(yǎng)基；生理鹽水清洗3次后，加入500 μL 4%多聚甲醛溶液固定10 min；生理鹽水清洗3次，再加入200 μL赫斯特染料，孵育10 min，繼續(xù)清洗3次。于倒置熒光顯微鏡觀察攝取情況并拍照。

1.2.4.3 細(xì)胞毒性評(píng)價(jià) 取對(duì)數(shù)生長期A549細(xì)胞置于96孔板內(nèi)，密度為每孔1×104個(gè)。24 h后棄掉原有培養(yǎng)基，更換為無血清DMEM培養(yǎng)基。按照培養(yǎng)基內(nèi)PML終濃度為20、50、100、200、300、400、500、1 000 μg·mL-1加入配置好的PML溶液，每個(gè)濃度6個(gè)復(fù)孔，每孔100 μL。加樣后培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)24 h；24 h后每孔加入50 μL MTT溶液(2 mg·mL-1)，繼續(xù)放回培養(yǎng)箱孵育4 h；4 h后吸出上清液，每孔加入150 μL二甲基亞砜，置于平板搖床100 rpm搖動(dòng)10 min，酶標(biāo)儀492 nm波長處檢測吸光度值(OD值)。按以下公式計(jì)算：細(xì)胞存活率(%)=(OD實(shí)驗(yàn)-OD陰性對(duì)照)/(OD陽性對(duì)照-OD陰性對(duì)照)×100%，陽性對(duì)照組為不加藥物的含細(xì)胞組，陰性對(duì)照組為僅加二甲基亞砜的無細(xì)胞組。同時(shí)，按照培養(yǎng)基內(nèi)GFB終濃度為0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、20 μg·mL-1加入GFB原料藥和GFB-PML，培養(yǎng)24 h后檢測吸光度值并計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.2.5 體內(nèi)抗腫瘤研究 取2只雌性昆明小鼠腹腔接種小鼠肝癌細(xì)胞(H22細(xì)胞)懸液，約7 d形成腹水模型。抽取腹水，于離心管內(nèi)加等量生理鹽水，1 000 rpm離心3 min，棄上清后，生理鹽水分散并計(jì)數(shù)。細(xì)胞濃度調(diào)整到每毫升2×107個(gè)細(xì)胞后，于小鼠腹部右下側(cè)皮下接種0.2 mL細(xì)胞懸液，待瘤體生長到約800 mm3時(shí)開始給藥。32只雌性荷瘤小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只，分為生理鹽水組，PML組，GFB組，GFB-PML組，尾靜脈給藥，GFB劑量為6 mg·kg-1，每兩天給藥1次共給藥4次，給藥后1 d游標(biāo)卡尺測量瘤徑(長徑D，短徑d，mm)。按以下公式計(jì)算瘤體積V(mm3)=0.5×D×d2，繪制腫瘤體積曲線。給藥結(jié)束后解剖瘤塊，稱重，并按公式計(jì)算抑瘤率：抑瘤率=(生理鹽水組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/生理鹽水組平均瘤重×100%。

2 結(jié)果

2.1 GFB-PML的質(zhì)量研究

2.1.1 GFB標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、回收率結(jié)果 GFB的線性回歸方程為A=72.575C+3.961 5，r=1，表明在0.05～50 μg·mL-1范圍內(nèi)峰面積與濃度線性良好。低、中、高3個(gè)濃度下，測得日內(nèi)精密度RSD分別為0.45%、0.27%、0.19%(n=5)；日間精密度RSD分別為0.81%、0.84%、1.08%(n=3)，均小于3%，表明該液相方法適合本品測定。低、中、高濃度GFB回收率為101.49%、98.12%、100.88%(n=3)，RSD均小于3%，表明回收率符合要求。

GFB-PML粒徑分布結(jié)果及電位測定如下：平均粒徑為(190.00 ± 8.77)nm，PDI值為0.31±0.04，Zeta電位為(-15.07±6.11)mV。載藥量測定結(jié)果為5.09%±0.48%，包封率測定結(jié)果為99.53%±0.34%。

制備的GFB-PML透射電鏡結(jié)果如圖1。透射電鏡觀察可見GFB-PML呈球狀或類球狀，粒徑集中在50～100 nm。

圖1 GFB-PML的透射電鏡圖

2.2 體外模擬釋放結(jié)果 以釋放時(shí)間為橫坐標(biāo)，GFB累積釋放百分率為縱坐標(biāo)，繪制釋放曲線，結(jié)果見圖2。其中A代表GFB原料藥組累積釋放率，B代表GFB-PML組中GFB累積釋放率。GFB原料藥組2 h時(shí)GFB累計(jì)釋放率為59.83%，8 h累積釋放率接近100%，釋放迅速。GFB-PML組2 h時(shí)GFB累計(jì)釋放率為21.62%，釋放相對(duì)于原料藥組較為緩慢，這是由于GFB-PML有較高的包封率，藥物GFB無法迅速透過雙分子層進(jìn)入釋放介質(zhì)中；GFB-PML組24 h時(shí)GFB累計(jì)釋放率接近80%，至48 h仍持續(xù)釋放，緩釋效果明顯。

圖2 GFB(A)與GFB-PML(B)體外模擬釋放曲線(n=3)注：與GFB-PML組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.3 GFB-PML對(duì)A549細(xì)胞攝取與毒性影響 攝取結(jié)果見圖3～4。綠色熒光為細(xì)胞攝取C6-PML后顯示的熒光，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核染色后顯示的熒光，紅色熒光為細(xì)胞骨架染色后顯示的熒光。綠色熒光越強(qiáng)，表明細(xì)胞攝取越多C6-PML。熒光在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)均有分布，圖3顯示，在相同濃度下(500 μg·mL-1)，隨攝取時(shí)間增加，綠色熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，表明細(xì)胞攝取更多C6-PML，細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取呈時(shí)間依賴性；圖4顯示，在相同攝取時(shí)間下(4 h)，C6-PML濃度越高，綠色熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，攝取呈濃度依賴性。由此可以看出，細(xì)胞對(duì)GFB-PML的攝取呈現(xiàn)出時(shí)間和濃度雙重依賴性。

圖3 不同攝取時(shí)間下C6-PML在A549細(xì)胞內(nèi)攝取情況(比例尺為20 μm)

圖4 不同濃度C6-PML在A549細(xì)胞內(nèi)攝取情況(比例尺為20 μm)

細(xì)胞毒性結(jié)果如圖5～6。圖5為PML作用于A549細(xì)胞毒性結(jié)果，PML在高達(dá)1 000 μg·mL-1時(shí)對(duì)細(xì)胞幾乎無毒性，表明PML安全性好，細(xì)胞順應(yīng)性高。圖6為GFB和GFB-PML對(duì)A549細(xì)胞毒性結(jié)果，在低濃度下(0.01 ～ 1 μg·mL-1)，GFB原料藥組對(duì)細(xì)胞毒性不明顯，說明游離原料藥入胞能力較差，在低濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞抑制作用較??；GFB-PML組顯示出較高的細(xì)胞殺傷性，細(xì)胞存活率顯著低于GFB組(P<0.05)，表明GFB-PML能攜帶GFB入胞，增加了GFB對(duì)A549細(xì)胞的殺傷性。同時(shí)在較高濃度下GFB-PML組細(xì)胞存活率低于GFB組(P<0.05)，結(jié)合GFB-PML體外釋放結(jié)果，可看出GFB-PML能延長GFB在細(xì)胞內(nèi)作用時(shí)間，增加細(xì)胞對(duì)GFB的攝取，進(jìn)而提高GFB對(duì)A549細(xì)胞抑制效果。

圖5 PML對(duì)A549細(xì)胞毒性結(jié)果(n=6)

圖6 GFB(A)與GFB-PML(B)對(duì)A549細(xì)胞毒性結(jié)果(n=6)注：兩組間比較，*P<0.05

2.4 GFB-PML對(duì)小鼠腫瘤生長的影響 H22荷瘤小鼠腫瘤生長趨勢如圖7，各組小鼠腫瘤體積均隨給藥時(shí)間而增長，第0至第2天腫瘤生長較為緩慢。從第4 天開始，生理鹽水組與PML組腫瘤體積增長較快，兩組體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。GFB組第4、6、8 d與生理鹽水組相比，腫瘤體積大小有所降低，兩組體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.881、0.443、0.224)。GFB-PML組與生理鹽水組對(duì)比，3次測量的腫瘤體積均降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.028、0.024、0.009)，對(duì)腫瘤生長有較強(qiáng)抑制作用。小鼠處死后解剖瘤體，生理鹽水組瘤重為(6.83 ± 0.87)g，PML組瘤重為(5.85±1.88)g，與生理鹽水組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.973)；GFB組瘤重為(4.28±1.72)g，與生理鹽水組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.016)；GFB-Lip組瘤重為(3.64±2.00)g，與生理鹽水組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001)。GFB組抑瘤率為37.34%，GFB-PML組抑瘤率為46.71%?？梢钥闯觯珿FB-PML能增強(qiáng)GFB抑制腫瘤生長的效果。

圖7 H22荷瘤小鼠腫瘤生長曲線(n=8)注：與生理鹽水組對(duì)比，*P<0.05，**P<0.01

3 討論

傳統(tǒng)磷脂、膽固醇通過薄膜分散法制備的脂質(zhì)體包封率較低，包封率值為50%～80%[13]；本文利用泊洛沙姆407修飾脂質(zhì)體，包封率明顯提高。相比于泊洛沙姆188，有研究顯示隨泊洛沙姆188含量增加，包封率值沒有顯著性改變[14]，顯示出泊洛沙姆407應(yīng)用于脂質(zhì)體載藥時(shí)具有提高包封率的優(yōu)勢。制備的脂質(zhì)體于4 ℃冰箱放置12 h，沒有出現(xiàn)沉降現(xiàn)象，穩(wěn)定性較好。

制備的GFB-PML在粒徑測定時(shí)由于濃度較大，脂質(zhì)體之間出現(xiàn)了重疊，而納米粒度測定儀難以分辨，造成測定粒徑結(jié)果較透射電鏡觀察結(jié)果偏大。體外釋放實(shí)驗(yàn)中，我們選擇磷酸鹽緩沖液作為釋放介質(zhì)，但由于GFB在中性pH值的磷酸鹽緩沖液中幾乎不溶，所以加入30%(V/V)的甲醇溶液，增加GFB在介質(zhì)中的溶解度[15]。由于本實(shí)驗(yàn)制備的GFB-PML包封率高，能有效降低突釋現(xiàn)象，發(fā)揮緩釋效果。體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)從時(shí)間和濃度兩方面說明細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取有時(shí)間和劑量依賴性。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)中，相同濃度下GFB-PML比GFB原料藥對(duì)A549細(xì)胞殺傷性更強(qiáng)，可理解為GFB-PML增加了GFB穿過細(xì)胞膜的能力，運(yùn)載GFB進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)并作用于ATP位點(diǎn)，阻斷信號(hào)傳導(dǎo)，從而抑制A549細(xì)胞的繁殖、轉(zhuǎn)移[16]。

有研究以100 mg·kg-1劑量的吉非替尼灌胃方式考察吉非替尼對(duì)肝癌H22小鼠的腫瘤作用[17]。本文建立了H22小鼠肝癌腹水腫瘤模型，進(jìn)行了GFB-PML對(duì)肝癌H22小鼠腫瘤生長抑制實(shí)驗(yàn)，以6 mg·kg-1的給藥劑量，尾靜脈注射方式給藥，考察GFB-PML的腫瘤抑制效果。結(jié)果可見，制備的GFB-PML對(duì)小鼠腫瘤生長有較強(qiáng)的抑制作用，增強(qiáng)了GFB的抗腫瘤效果。同時(shí)對(duì)比大劑量灌胃方式，低劑量注射給藥也顯現(xiàn)出較顯著的抑瘤效果，為吉非替尼拓展新劑型應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。