楊勇波，伍 玲

(1.重慶市開(kāi)州區(qū)人民醫(yī)院 腫瘤科,重慶405400;2.重慶市開(kāi)州區(qū)中醫(yī)院 婦產(chǎn)科)

卵巢癌是死亡率處于首位的婦科惡性腫瘤疾病[1]，患者早期臨床癥狀及體征較為隱匿，極易出現(xiàn)淋巴結(jié)或其他臟器組織轉(zhuǎn)移及播散等現(xiàn)象，導(dǎo)致患者預(yù)后極差。上述惡性生物學(xué)行為與腫瘤的特殊物質(zhì)、能量生理代謝之間存在密切的聯(lián)系，而脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)是在其中起到重要作用的功能蛋白酶，其不但可調(diào)節(jié)物質(zhì)、能量生理代謝過(guò)程，還可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子的轉(zhuǎn)導(dǎo)，在較多惡性腫瘤組織中呈異常表達(dá)現(xiàn)象，與腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的相關(guān)性[2]。有研究證實(shí)[3]，F(xiàn)ASN基因在卵巢癌發(fā)生、進(jìn)展中也發(fā)揮著重要的作用，但何種作用機(jī)制使得FASN基因出現(xiàn)異常表達(dá)目前仍未研究清楚。近些年國(guó)外關(guān)于結(jié)直腸癌的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)[4]，F(xiàn)ASN可通過(guò)改變血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9)分泌及生物學(xué)活性功能而調(diào)節(jié)腫瘤組織中的新生血管形成。FASN在卵巢癌中是否也有存在上述情況目前尚無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，因此本研究擬觀察FASN、VEGF和MMP-9在卵巢癌組織及外周血中的表達(dá)，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇本院腫瘤科、婦產(chǎn)科2016年2月-2018年5月期間住院治療的110例患者作為研究對(duì)象，術(shù)后經(jīng)病理組織檢查均已確診，所有患者手術(shù)治療前均未經(jīng)任何治療，其中卵巢癌患者38例，平均年齡為(48.4±6.3)歲；卵巢良性腫瘤患者40例，平均年齡為(47.7±7.1)歲；因子宮良性病理改變而實(shí)施卵巢切除治療的患者32例，平均年齡為(48.1±7.8)歲。各組患者年齡經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，所有患者均知曉研究?jī)?nèi)容并簽署知情同意書(shū)，本課題已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核及批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

兔抗人FASN、VEGF、MMP-9單克隆抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa公司，免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAB顯色試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，血清FASN酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒購(gòu)自北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司，血清VEGF、MMP-9 ELISA試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物工程有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法

1.3.1FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達(dá)檢測(cè) 術(shù)后收集各組患者新鮮卵巢癌或卵巢組織標(biāo)本，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋切片處理后采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)FASN、VEGF和MMP-9蛋白在組織中的表達(dá)水平，由專人根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，以PBS溶液替代一抗作為陰性對(duì)照，以乳腺癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)染色后表現(xiàn)為棕褐色顆粒則認(rèn)定為檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，在顯微鏡高倍視野(×400)下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例根據(jù)<5%、5%-30%、31%-70%、>70%計(jì)為0、1、2、3分，染色強(qiáng)度根據(jù)無(wú)著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色計(jì)為0、1、2、3分，兩者計(jì)分相加所得總分>3分則視為陽(yáng)性表達(dá)，分別由兩名本院工作經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師獨(dú)立閱片予以判讀。

1.3.2血清FASN、VEGF和MMP-9表達(dá)水平檢測(cè) 術(shù)前在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取各組患者肘部血液5 ml，離心處理10 min后留取上層血清，采用ELISA法檢測(cè)各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達(dá)水平，由專人根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0對(duì)本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，各組陽(yáng)性表達(dá)率比較采用χ2檢驗(yàn)，各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達(dá)水平比較采用方差分析及兩兩比較，各指標(biāo)之間相關(guān)性關(guān)系采用Spearman法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達(dá)水平比較

FASN、VEGF和MMP-9蛋白在對(duì)照組、卵巢良性病變組及卵巢癌組中的陽(yáng)性表達(dá)率比較均存在顯著性差異(P<0.05)，卵巢癌組和卵巢良性病變組各指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，且卵巢癌組各指標(biāo)陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于卵巢良性病變組(P<0.05)，見(jiàn)表1及圖1。

表1 各組FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達(dá)水平比較 [n(%)]

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；卵巢癌組與卵巢良性病變組比較，#P<0.05。

A：正常卵巢組織；B：卵巢良性腫瘤組織；C：卵巢癌組織1：FASN；2：VEGF；3：MMP-9注：FASN、VEGF、MMP-9蛋白均表達(dá)在細(xì)胞漿內(nèi)

2.2 各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達(dá)水平比較

各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達(dá)水平比較均存在顯著性差異(P<0.05)，卵巢癌組和卵巢良性病變組各指標(biāo)表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，且卵巢癌組各指標(biāo)表達(dá)水平明顯高于卵巢良性病變組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達(dá)水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；卵巢癌組與卵巢良性病變組比較，#P<0.05。

2.3 FASN與VEGF、MMP-9的相關(guān)性分析

采用Spearman法分析，卵巢癌患者病灶組織中FASN與VEGF、MMP-9呈正相關(guān)性關(guān)系(r=0.625，0.577，P<0.05)，血清中FASN與VEGF、MMP-9也呈正相關(guān)性關(guān)系(r=0.684，0.608，P<0.05)。

3 討論

惡性腫瘤病灶組織或細(xì)胞出現(xiàn)周圍組織侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是卵巢癌重要的臨床特征，也是導(dǎo)致卵巢癌患者放化療效果不佳以及最終死亡的重要原因，上述生物學(xué)行為是依賴較多介質(zhì)因子的步驟過(guò)程，尤其以VEGF和MMP-9起到的作用最為重要[5]。MMP-9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員，可有效降解血管基底膜以及其他細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)成分，使得毛細(xì)血管更容易形成血管腔解剖結(jié)構(gòu)，也有助于VEGF順利轉(zhuǎn)移至血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管基底膜表面，從而明顯促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂過(guò)程，顯著性增加毛細(xì)血管的通透性，增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞增殖生長(zhǎng)和遷移等生物學(xué)功能，最終導(dǎo)致新生血管在腫瘤病灶組織內(nèi)的大量形成[6,7]。同時(shí)VEGF還可明顯提高整合素在內(nèi)皮細(xì)胞以及惡性腫瘤細(xì)胞上的表達(dá)水平，有助于惡性腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)遷移、黏附和浸潤(rùn)等惡性生物學(xué)行為[8]。此外，國(guó)外研究還發(fā)現(xiàn)[9]，VEGF可間接促進(jìn)MMP-9的合成分泌，并明顯增加后者的生物學(xué)活性功能。本研究顯示，卵巢癌患者組織及血清VEGF、MMP-9水平均明顯高于卵巢良性病變患者及對(duì)照組，提示VEGF和MMP-9在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著相互協(xié)同的作用，共同促進(jìn)新生血管組織的形成、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)功能。

腫瘤細(xì)胞還具有重新編程能量生理代謝等特征性行為，不管是處于有氧微環(huán)境狀態(tài)或是缺氧微環(huán)境狀態(tài)，其更易將大量葡萄糖代謝成為乳酸，進(jìn)而通過(guò)增強(qiáng)脂肪酸氧化磷酸化生物學(xué)途徑進(jìn)行物質(zhì)合成、能量產(chǎn)生，最終在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起到重要作用[10]。一般情況下，正常細(xì)胞傾向于攝取外源性脂肪酸，而腫瘤細(xì)胞則主要攝取內(nèi)源性脂肪酸，并以脂滴形式將脂肪酸予以大量?jī)?chǔ)存[11]。正常人體可通過(guò)日常飲食獲取脂肪酸，故組織或血清中FASN不表達(dá)或呈低表達(dá)現(xiàn)象，而腫瘤組織對(duì)內(nèi)源性脂肪酸的需求量較多，因此在結(jié)直腸癌、胰腺癌等多種類型惡性腫瘤病灶組織中均可見(jiàn)FASN過(guò)表達(dá)現(xiàn)象[12,13]。本研究也發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者組織及血清FASN水平明顯高于卵巢良性病變患者及對(duì)照組，與上述研究一致。相關(guān)研究還發(fā)現(xiàn)[14-16]，F(xiàn)ASN表達(dá)水平過(guò)高預(yù)示著較多腫瘤患者預(yù)后情況不佳。目前研究證實(shí)[17]，F(xiàn)ASN在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程以及周圍組織侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等多方面有著重要作用，但關(guān)于FASN過(guò)表達(dá)的機(jī)制研究極為復(fù)雜，主要為轉(zhuǎn)錄水平、翻譯后水平及微環(huán)境切應(yīng)力等方面[18]。本研究顯示卵巢癌患者病灶組織及血清中FASN與VEGF、MMP-9均呈正相關(guān)性關(guān)系(P<0.05)，提示FASN可能通過(guò)增強(qiáng)VEGF、MMP-9表達(dá)而在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。FASN作為在細(xì)胞脂質(zhì)生理代謝過(guò)程中起著重要作用的一種酶，有希望成為臨床早期診斷卵巢癌的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)。