李 娟， 雷春龍， 張 龍， 邱時(shí)秀， 朱佳文，吳永勝*， 許禎瑩， 陳亞迎， 徐麒麟， 劉瀚揚(yáng)

（1.成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所，四川成都 611130；2.西華師范大學(xué)生態(tài)研究院，四川南充 637009）

枯草芽孢桿菌屬于嚴(yán)格需氧菌，并非腸道微生物，其可以殺滅或抑制有害微生物，調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，改善腸道完整性和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收效率（Jeong等，2014）。 Maruta （1996）試驗(yàn)表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌 （Bacillus subtilis C-3102），肉雞活體的屠宰率顯著提高，胴體胸肌增加，腹部脂肪減少，空腸彎曲桿菌的數(shù)量降低，感染雞群的發(fā)病率減少。

酸化劑、益生素作為高效、無(wú)污染、無(wú)殘留的保健型飼料添加劑，正逐步被應(yīng)用于飼料行業(yè)。酸化劑具有降低消化道的pH、提高消化酶的活性、改善腸道菌群的作用（王冉等，2002）。關(guān)于酸化劑和益生素聯(lián)用的文獻(xiàn)報(bào)道較少，本試驗(yàn)研究飼料中添加丁酸鈉和枯草芽孢桿菌單用和聯(lián)用對(duì)彭縣黃雞腸道微生物菌群、肉質(zhì)脂肪酸、屠宰性能的影響，以期為彭縣黃雞的養(yǎng)殖及深入研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)選用的288只健康且體重相近的100日齡彭縣黃雞（公雞），由彭州天華禽業(yè)有限公司提供。

1.2 藥品 試驗(yàn)所需的益生素為枯草芽孢桿菌制劑，由本實(shí)驗(yàn)室篩選，活菌數(shù)≥108cfu/g，其是用米糠作為載體，接種菌液，固體發(fā)酵而成。本試驗(yàn)所需的酸化劑為丁酸鈉，購(gòu)于日照東潤(rùn)德農(nóng)牧發(fā)展有限公司，純度為98.5%。

1.3 主要試劑 鹽酸（HCl），氨水（NH3·H2O），焦性沒(méi)食子酸（C6H6O3），乙醚（C4H10O），石油醚：沸程 30～ 60℃，95%乙醇（C2H6O），甲醇（CH3OH）：色譜純，氫氧化鈉 （NaOH），正庚烷 [CH3（CH2）5CH3]：色譜純，無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4），氯化鈉（Na-Cl），異辛烷[（CH3）2CHCH2C（CH3）3]：色譜純，硫酸氫鈉（ NaHSO4），氫氧化鉀（KOH），均由成都市科龍化工試劑廠提供。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)方式 采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分成4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18只雞。Y0為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧，Y1、Y2、Y3組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.05%丁酸鈉、0.03%枯草芽孢桿菌、0.05%丁酸鈉+0.03%枯草芽孢桿菌。試驗(yàn)雞采用錯(cuò)疊3層小群體籠養(yǎng)方式進(jìn)行。各試驗(yàn)組免疫程序按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行。自由采食和自由飲水。試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧參照我國(guó)黃羽肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)2004（NY/T33-2004）配制，試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)預(yù)試期5 d，正試期47 d。

表1 試驗(yàn)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 屠宰性能 試驗(yàn)結(jié)束，從每組中隨機(jī)抽取體重相近的仔雞8只 （每個(gè)重復(fù)2只），按Zhao（2012）方法進(jìn)行屠宰。

1.5.2 腿肌脂肪酸檢測(cè) 屠宰后取一塊腿肌樣品，參照GB 5009·168-2016《食品中脂肪酸的測(cè)定》方法對(duì)雞腿肌中的脂肪酸進(jìn)行測(cè)定。

1.5.3 腸道菌群檢測(cè)

1.5.3.1 菌群稀釋 屠宰時(shí)精確稱(chēng)取雞盲腸內(nèi)容物，以無(wú)菌生理鹽水稀釋為終濃度為10 mg/mL菌懸液，為100倍稀釋母液。用0.2 mL無(wú)菌吸管精確吸取0.1 mL細(xì)菌懸液放入含有0.9 mL生理鹽水的潔凈滅菌試管中，然后將管內(nèi)懸液混合均勻，即為10-1倍稀釋菌液。另取一支吸管自10-1試管吸0.1 mL放入含有0.9 mL生理鹽水的試管中，其余依次類(lèi)推，最終得到 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀釋的菌液。

1.5.3.2 細(xì)菌分離 培養(yǎng)基種類(lèi)及培養(yǎng)方法見(jiàn)表2。每個(gè)稀釋度菌液取0.01 mL稀釋液分別接種4種培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌的分離培養(yǎng)，每種稀釋度檢測(cè)3次。同時(shí)以生理鹽水加入無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。

1.5.3.3 計(jì)數(shù) 培養(yǎng)一段時(shí)間后取出培養(yǎng)皿，算出同一稀釋度的菌落平均數(shù)，并按每毫升中總活菌數(shù)=同一稀釋度三次重復(fù)的菌落平均數(shù)×稀釋倍數(shù)×10進(jìn)行計(jì)算得到每毫升總活菌數(shù)。

表2 腸道微生物菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)方式和條件

1.6 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析 采用JMP10統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用最小二乘分析法對(duì)四個(gè)組進(jìn)行單因素方差分析，其中P＞0.05表示差異不顯著，P＜0.05表示差異顯著，結(jié)果表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”。

2 結(jié)果

2.1 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對(duì)彭縣黃雞屠宰性能的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，日糧中添加0.05%丁酸鈉組活重、腹脂重（P＜0.05）分別提高3.50%、369.30%，腺胃率（P＜0.05）降低了18.75%。日糧中添加0.03%枯草芽孢桿菌組活重、肌胃重、肌胃率（P＜0.05）分別提高4.3%、17.08%、16.33%。聯(lián)用組中屠體重、全凈膛重、全凈膛率和半凈膛率較對(duì)照組（P＜0.05）分別降低2.52%、6.95%、8.29%、6.90%，肌胃重（P＜0.05）提高15.52%。

表3 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對(duì)彭縣黃雞屠宰性能的影響

2.2 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對(duì)彭縣黃雞腿肌脂肪酸的影響 由表4可知，日糧中添加0.05%丁酸鈉組較添加0.03%枯草芽孢桿菌組飽和脂肪酸十七烷酸的比例（P＜0.05）降低26.92%；添加了丁酸鈉之后，總單不飽和脂肪酸含量增加，但差異不顯著（P＞0.05）；添加0.03%的枯草芽孢桿菌之后，飽和脂肪酸中的硬脂酸C18：0含量（P＜0.05）降低18.39%；總飽和脂肪酸降低，總單不飽和脂肪酸、總多不飽和脂肪酸、總不飽和脂肪酸均升高，但差異不顯著（P ＞ 0.05）。 二者聯(lián)用后，γ-亞油酸 C18：3n6的水平（P ＜ 0.05）提高了 31.25%。

表4 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對(duì)彭縣黃雞腿肌脂肪酸的影響

2.3 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對(duì)彭縣黃雞腸道微生物菌群和pH的影響 由表5可知，與對(duì)照組相比，日糧中添加0.05%丁酸鈉+0.03%枯草芽孢桿菌聯(lián)用組雙歧桿菌數(shù)量 （P＜0.05）提高了652.19%；添加0.05%丁酸鈉組致病菌沙門(mén)氏菌的數(shù)量 （P＜0.05）降低了83.58%。日糧中添加0.03%枯草芽孢桿菌和二者聯(lián)用均能提高彭縣黃雞腸道乳酸菌數(shù)量（P＞0.05），降低沙門(mén)氏菌的數(shù)量（P＞0.05）。添加不同量的丁酸鈉、枯草芽孢桿菌和二者聯(lián)用均未出現(xiàn)致病菌大腸桿菌。添加0.05%的丁酸鈉和二者聯(lián)用均可以降低腸道的pH（P ＞ 0.05）。

3 討論

黃冠慶（2013）等研究認(rèn)為，酸化劑和益生素聯(lián)用，當(dāng)添加量為0.3%時(shí)可顯著降低胸肌滴水損失，添加量為0.5%時(shí)可顯著提高腿肌率及顯著降低胸肌滴水損失和胸肌率。潘康成（2005）等研究認(rèn)為，枯草芽孢桿菌制劑能顯著提高肉雞的腿肌重和腿肌率。Mahmoud（2017）等在飼料中添加枯草芽孢桿菌發(fā)現(xiàn)，肉雞胴體品質(zhì)顯著提高。Bai（2017）等研究表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)滴水損失、蒸煮損失、剪切力、L×24 h、a×24 h、b×45 min和 b×24 h值均有影響（P ＜ 0.05），添加枯草芽孢桿菌組較對(duì)照組體重增加（P＜0.05）。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，日糧中添加0.05%的丁酸鈉能顯著提高地方品種彭縣黃雞的活重、腹脂重，添加0.03%的枯草芽孢桿菌能顯著提高彭縣黃雞的活重、肌胃重、肌胃率。而日糧中添加0.05%丁酸鈉+0.03%枯草芽孢桿菌效果并不理想，可能是影響了腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，進(jìn)而影響了屠宰性能。

表5 丁酸鈉和枯草芽孢桿菌對(duì)雞腸道微生物菌群和p H的影響

補(bǔ)充枯草芽孢桿菌使盲腸中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著增加，而大腸桿菌和葡萄球菌的數(shù)量顯著減少（Yang 等，2016）。 王瑩（2015）研究認(rèn)為，芽孢桿菌制劑對(duì)蛋雞育雛期腸道內(nèi)大腸桿菌的影響不明顯，但顯著增加了乳酸桿菌的數(shù)目，也增加了盲腸內(nèi)的微生物多樣性。本次研究結(jié)果與前人的研究結(jié)果相似，丁酸鈉和枯草芽孢桿菌聯(lián)用能顯著提高彭縣黃雞腸道的雙歧桿菌數(shù)量。有研究證明短鏈脂肪酸如丁酸鹽能抑制肉雞沙門(mén)氏菌的生長(zhǎng)（Leeson等，2005）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，丁酸鈉+枯草芽孢桿菌和單獨(dú)添加丁酸鈉均能降低致病菌沙門(mén)氏菌的數(shù)量，單獨(dú)添加丁酸鈉效果更明顯，能顯著降低沙門(mén)氏菌數(shù)量。

脂肪酸是構(gòu)成脂肪的重要化學(xué)物質(zhì)，是組織細(xì)胞的組成部分，其決定脂肪的理化性質(zhì)，能夠促進(jìn)機(jī)體新陳代謝，其中不飽和脂肪酸含量更是影響肉品風(fēng)味的重要因素（李慧芳等，2004）。彭縣黃雞雞肉不飽和脂肪酸（UFA）相對(duì)含量為56.09%～60.39%。油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸是彭縣黃雞體內(nèi)脂肪酸的主要組成部分，朱仁?。?012）等的研究結(jié)果表明，飽和脂肪酸攝入過(guò)高是導(dǎo)致血液膽固醇升高的主要原因之一。此外，多不飽和脂肪酸中的動(dòng)物必需脂肪酸亞油酸、花生四烯酸和亞麻酸可降低血液中膽固醇的含量，具有預(yù)防心血管疾病的作用，并且可參與精子的形成，同時(shí)也是線粒體和細(xì)胞膜的重要組成物質(zhì) （張秀梅等，2014）。本研究中，丁酸鈉和枯草芽孢桿菌聯(lián)用并沒(méi)有提高總不飽和脂肪酸的比例，但是丁酸鈉和枯草芽孢桿菌聯(lián)用能顯著提高雞肉γ-亞油酸C18：3n6 的水平。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，單獨(dú)添加0.05%丁酸鈉、0.03%枯草芽孢桿菌均能提高彭縣黃雞屠宰性能、改善腸道微生物菌群和肉質(zhì)脂肪酸水平，而二者聯(lián)用并不理想。