閆禎昕，尹 非，李雪晨，姜 楠，田金英，葉 菲

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所，新藥作用機(jī)制研究與藥效評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

高尿酸血癥(hyperuricemia，HUA)是一種嘌呤代謝紊亂。當(dāng)男、女血尿酸水平分別超過(guò)7 mg·dL-1及6 mg·dL-1時(shí)，可以臨床診斷為高尿酸血癥。中國(guó)高尿酸血癥的發(fā)病率逐年上升，患者人數(shù)多，易發(fā)展為痛風(fēng)[1-2]?，F(xiàn)有的流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)分析表明，高尿酸血癥不僅僅是痛風(fēng)的直接致病因素，而且還與代謝綜合征、高血壓、腎損傷、脂質(zhì)代謝紊亂、心血管疾病等有著密切聯(lián)系，作為風(fēng)險(xiǎn)因素，高尿酸血癥對(duì)這些疾病的病程發(fā)展產(chǎn)生重要作用[3-4]。人和禽類體內(nèi)無(wú)尿酸酶，體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物為尿酸，而嚙齒類體內(nèi)因有尿酸酶的存在，尿酸最終會(huì)被氧化成尿囊素排出體外[5]。治療高尿酸血癥藥物的主要作用靶點(diǎn)是黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase , XOD)，可以催化次黃嘌呤或黃嘌呤，生成尿酸的一種黃素鉬蛋白，廣泛分布于小鼠的各個(gè)臟器中[6]。抑制XOD的活性，可以直接降低體內(nèi)尿酸生成量，減低體內(nèi)的血尿酸水平。臨床選擇性XOD抑制劑包括別嘌呤醇(一種嘌呤類抑制劑)及非布索坦(一種非嘌呤類抑制劑)[7-8]。

目前，高尿酸血癥模型動(dòng)物主要為嚙齒類和禽類[5]。根據(jù)尿酸的生成及排泄路徑，造模方式主要包括增加尿酸前體物質(zhì)的攝入、抑制嚙齒類動(dòng)物的尿酸酶、減少尿酸排泄?？刹扇我灰蛩卣T導(dǎo)，或多種因素聯(lián)合誘導(dǎo)形成高尿酸血癥動(dòng)物模型。本研究根據(jù)XOD性質(zhì)，完善了體外XOD抑制劑篩選方法，建立了急性及慢性高尿酸血癥模型等體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法，為基于高尿酸血癥的分子靶點(diǎn)XOD藥物研發(fā)奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1藥物與試劑 牛奶來(lái)源XOD1(CAS 9002-17-9)、微生物來(lái)源XOD2(CAS 9002-17-9)、黃嘌呤(xanthine, XA，CAS 69-89-6)、次黃嘌呤(hypoxanthine，CAS 68-94-0)，均購(gòu)自Sigma公司；氧嗪酸鉀(oteracil potassium，CAS 2207-75-2)，購(gòu)自美侖生物；非布索坦(febuxostat, FBX，CAS 144060-53-7)，購(gòu)自TCI公司；別嘌呤醇(allopurinol, ALP，CAS 315-30-0)，購(gòu)自Alfa Aesar公司；谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、血尿酸(uric acid, UA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、肌酐(creatinine, Cre)、尿素(Urea)測(cè)定試劑盒，均購(gòu)自北京中生北控生物技術(shù)有限公司；XOD活性測(cè)定試劑盒，購(gòu)自南京建成生物科技有限公司。

1.1.2儀器 酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek公司)；THZ-C型恒溫振蕩器(江蘇太倉(cāng)科教儀器廠)；高速低溫離心機(jī)(德國(guó)Heraeus公司)；pH計(jì)(美國(guó)Fisher Scientific公司)。

1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR小鼠，♂，購(gòu)于北京維通利華生物科技股份有限公司，許可證編號(hào)為SCXK(京)2016-0006。飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心，飼養(yǎng)溫度為(22～25) ℃，濕度為40%～60%，每天光照時(shí)間和黑暗時(shí)間各為12 h，進(jìn)食及飲水自由。小鼠經(jīng)過(guò)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK(京)2014-0023。

1.2 方法

1.2.1血清生化測(cè)定 3 500 r·min-1離心小鼠全血4 min，取出上層血清，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)UA、AST、ALT、Cre、Urea、XOD進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2組織XOD活性測(cè)定 取出組織，加入適量預(yù)冷的生理鹽水，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定組織XOD活性。

1.2.3黃嘌呤氧化酶抑制劑體外篩選模型 分別選用牛奶和微生物為酶來(lái)源的兩種XOD作為篩選模型研究對(duì)象，分別探究反應(yīng)體系中酶濃度、底物濃度、反應(yīng)溫度、反應(yīng)pH值和反應(yīng)時(shí)間的影響，根據(jù)終產(chǎn)物尿酸在293 nm處的吸光度，選出最適宜的反應(yīng)條件，并分別測(cè)定陽(yáng)性藥非布索坦和別嘌呤醇的IC50值，選定最適宜的酶來(lái)源。

1.2.4急性高尿酸血癥小鼠模型 單次灌胃次黃嘌呤500 mg·kg-1聯(lián)合皮下注射氧嗪酸鉀300 mg·kg-1。設(shè)正常小鼠為正常對(duì)照組(Control)，灌胃給予純水及皮下注射溶劑0.5% CMC-Na混懸液。將誘導(dǎo)小鼠隨機(jī)分成模型對(duì)照組(Mod-A)和非布索坦組(Mod-A-FBX)，分別灌胃給予純水和非布索坦2 mg·kg-1。同時(shí)，造模前取血，測(cè)定全部小鼠血尿酸水平作為0 h點(diǎn)，之后分別于給藥后1、2、4 h時(shí)取血，測(cè)定小鼠血尿酸水平。并于4 h取血之后脫頸處死小鼠，取血清測(cè)定AST、ALT、Cre、Urea和XOD活性，并迅速取出小鼠肝臟放置于液氮中速凍，然后置于-80 ℃冰箱保存，用于測(cè)定肝XOD活性。

1.2.5慢性高尿酸血癥小鼠模型 多次皮下注射氧嗪酸鉀300 mg·kg-1。誘導(dǎo)期間，分別于d 7、9、11、13、14，通過(guò)內(nèi)眥取血測(cè)定血尿酸水平。設(shè)正常ICR小鼠為對(duì)照組(Control)，取血尿酸值穩(wěn)定且高于180 μmol·L-1的動(dòng)物作為慢性高尿酸血癥小鼠模型(Mod-C)，內(nèi)眥取血之后脫頸處死小鼠，測(cè)定血清AST、ALT、Cre、Urea；取小鼠腎臟和肝臟左外側(cè)葉進(jìn)行病理分析，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin, HE)染色；并快速取肝中葉、心臟、脾、肺、腎和小腸等重要組織，置于液氮中速凍，然后置于-80 ℃冰箱保存，用于檢測(cè)各組織中XOD的活性。將誘導(dǎo)小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(Mod-C)和非布索坦組(Mod-C-FBX)，分別灌胃給予純水和非布索坦2 mg·kg-1，每天給藥及造模1次，連續(xù)5 d，觀測(cè)血尿酸水平、血清XOD活性、肝組織XOD活性的變化情況。

2 結(jié)果

2.1 XOD抑制劑體外篩選模型的建立常見(jiàn)的XOD分別為牛奶(XOD1)和微生物(XOD2)來(lái)源。室溫下分別選擇1、3、5 U·L-1的XOD1或XOD2，固定底物XA 100 μmol·L-1、反應(yīng)時(shí)間30 min、pH 7.4的反應(yīng)體系，觀察不同濃度XOD的反應(yīng)情況。Fig 1A結(jié)果顯示，相同濃度的XOD1、XOD2反應(yīng)效果相似；XOD1濃度為3、5 U·L-1的反應(yīng)體系的OD值無(wú)明顯差異，均明顯高于其濃度為1 U·L-1的反應(yīng)體系；XOD2的3種反應(yīng)體系結(jié)果亦然。因此，選取3 U·L-1為XOD1或XOD2為最適反應(yīng)濃度。

室溫下，分別選擇25、50、100 μmol·L-1的底物XA濃度，固定XOD1或XOD2 3 U·L-1、反應(yīng)時(shí)間30 min、pH 7.4的反應(yīng)體系，觀察不同濃度底物XA的反應(yīng)狀態(tài)。Fig 1B結(jié)果顯示，XOD1和XOD2反應(yīng)體系基本一致，隨著底物濃度的增加，其光吸收度逐漸增加。選擇OD值范圍較適宜的底物XA 50 μmol·L-1為最適的反應(yīng)濃度。

室溫下，固定XOD1或XOD2濃度為3 U·L-1、底物XA 50 μmol·L-1、pH 7.4的反應(yīng)體系，觀察不同作用時(shí)間對(duì)反應(yīng)體系的影響。Fig 1C結(jié)果顯示，XOD1和XOD2反應(yīng)體系基本一致，選取進(jìn)入反應(yīng)平臺(tái)期的20 min作為最適作用時(shí)間。

固定XOD1或XOD2 3U·L-1、底物XA 50 μmol·L-1、反應(yīng)時(shí)間20 min、pH 7.4的反應(yīng)體系，觀察不同溫度對(duì)反應(yīng)體系的影響。Fig 1D結(jié)果顯示，選取XOD酶活性最高點(diǎn)，則對(duì)于XOD1和XOD2反應(yīng)體系的最適作用溫度均為37 ℃。

37 ℃下分別選擇pH為4.4、5.4、6.4、7.4、8.4、9.4的緩沖液，固定XOD1或XOD2 3 U·L-1、底物XA 50 μmol·L-1、反應(yīng)時(shí)間20 min的反應(yīng)體系，觀察不同的緩沖液pH對(duì)反應(yīng)體系的影響。Fig 1E結(jié)果顯示，對(duì)于XOD1和XOD2酶活性最高點(diǎn)的反應(yīng)體系均為pH 7.4。

目前已上市的選擇性XOD抑制劑主要有ALP和FBX。分別應(yīng)用XOD1或XOD2的反應(yīng)體系，測(cè)定ALP、FBX抑制XOD的活性。Fig 2結(jié)果顯示，ALP對(duì)XOD1和XOD2均具有明顯的抑制作用，其IC50均可達(dá)到10-6mol·L-1數(shù)量級(jí)；FBX對(duì)XOD1的抑制活性較強(qiáng)，其IC50可達(dá)到10-9mol·L-1，但對(duì)XOD2則沒(méi)有明顯的抑制作用。

上述結(jié)果提示，選擇牛奶來(lái)源的XOD1 3 U·L-1、底物XA 50 μmol·L-1、反應(yīng)時(shí)間為20 min、反應(yīng)溫度為37 ℃、pH為7.4的反應(yīng)體系，F(xiàn)BX為陽(yáng)性對(duì)照藥，從而建立了XOD抑制劑的體外篩選模型。

2.2 急性高尿酸血癥小鼠模型的建立應(yīng)用體質(zhì)量為(24±2)g的♂ICR小鼠，單次灌胃給予次黃嘌呤500 mg·kg-1聯(lián)合皮下注射氧嗪酸鉀300 mg·kg-1，分別于給予陽(yáng)性藥FBX 2 mg·kg-1后0、1、2、4 h時(shí)，內(nèi)眥取血測(cè)定小鼠血尿酸水平。以誘導(dǎo)劑溶劑代替誘導(dǎo)劑的動(dòng)物作為正常對(duì)照Control組。Fig 3A結(jié)果顯示，Mod-A組動(dòng)物的血尿酸值與對(duì)照組相比明顯上升，于給藥后1 h時(shí)達(dá)到峰值，平均增長(zhǎng)幅度達(dá)到348.2%；而后血尿酸值逐漸下降，于給藥后4 h血尿酸值還原到基線程度；該血尿酸-時(shí)間曲線下面積(area under curve, AUC)上升了204.8%(Fig 3B)。灌胃給予陽(yáng)性藥FBX 2 mg·kg-1治療后，Mod-A-FBX組動(dòng)物的血尿酸值與Mod-A組相比明顯降低，其血尿酸峰值及AUC值各下降了60.2%及59.6%，顯示FBX具有明顯改良小鼠急性高尿酸血癥的功能。

在FBX給藥后4 h內(nèi)眥取血后，脫頸處死小鼠，迅速分離肝。分別測(cè)定血清XOD活性及肝組織XOD活性，結(jié)果顯示(Fig 3C、3D)，對(duì)照組、Mod-A組的血清XOD活性及肝組織XOD活性均未呈現(xiàn)明顯差異；Mod-A-FBX組血清XOD活性與Mod-A組相比明顯下降，肝組織XOD活性未見(jiàn)明顯改變。

測(cè)定對(duì)照組和Mod-A組的肝腎功能血液指標(biāo)，如AST、ALT、Cre和Urea。結(jié)果顯示(Tab 1)，對(duì)照組和Mod-A組均未見(jiàn)明顯差異，提示急性高尿酸血癥小鼠模型的肝腎功能未見(jiàn)明顯損傷。

2.3 慢性高尿酸血癥小鼠模型的建立應(yīng)用體質(zhì)量(20±2)g的ICR ♂小鼠，采用連續(xù)多次皮下注射氧嗪酸鉀300 mg·kg-1的誘導(dǎo)方式，每天1次。于誘導(dǎo)后d 7、9、11、13、14，內(nèi)眥取血測(cè)定血尿酸水平。以誘導(dǎo)劑的溶劑代替誘導(dǎo)劑刺激的動(dòng)物作為正常對(duì)照(No stimulated)組(n=7)。結(jié)果顯示(Fig 4A)，以氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的小鼠(Stimulated組，n=60)血尿酸水平逐漸升高，連續(xù)誘導(dǎo)2周后，與No stimulated組比較，Stimulated組的平均血尿酸水平升高了約2倍，約70%的動(dòng)物血尿酸水平超過(guò)180 μmol·L-1。

Fig 1 Regulation of XOD activity (A), XA concentration (B), and reaction time (C), temperature (D), pH (E) on absorbance at wavelength 293 nm n=3)

Tab 1 Liver function and kidney function in acute hyperuricemia mice n=10)

慢性高尿酸血癥模型小鼠(Mod-C)(n=10)與同批正常對(duì)照小鼠(n=10)比較，血液肝功能指標(biāo)AST和ALT未見(jiàn)明顯差異(Tab 2)；肝臟HE染色(病理分析)未見(jiàn)明顯差異，肝組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)濁腫及壞死等受損現(xiàn)象(Fig 4B)；血液腎功能指標(biāo)Cre和Urea未見(jiàn)明顯差異(Tab 2)；腎臟HE染色(病理分析)未見(jiàn)明顯差異，腎組織結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)水腫及壞死等受損現(xiàn)象(Fig 4C)。說(shuō)明采用此造模方式形成的慢性高尿酸血癥小鼠模型未見(jiàn)明顯肝腎損傷。

檢測(cè)動(dòng)物主要臟器的XOD活性，結(jié)果顯示(Fig 4D)，對(duì)照組、Mod-C組各組織的XOD活性無(wú)明顯差異；其各主要臟器XOD活性強(qiáng)弱順序依次為小腸、心臟、肝臟、肺、腎及脾。

Tab 2 Liver function and kidney function in chronic hyperuricemia mice n=10)

Fig 2 Different activities of XOD1 and XOD2 in vitro n=3)

Fig 3 Changes of serum uric acid and XOD activity in acute hyperuricemia mice n=10)

Fig 4 Characters of oteracil potassium-induced hyperuricemia mice

設(shè)正常小鼠作為對(duì)照組(Control，n=10)。把慢性高尿酸血癥模型小鼠隨機(jī)分為Mod-C組(n=10)和Mod-C-FBX組(n=10)，分別持續(xù)灌胃水及陽(yáng)性藥FBX 2 mg·kg-1，持續(xù)治療5 d，每天監(jiān)測(cè)小鼠血尿酸水平變化情況。結(jié)果顯示(Fig 5A)，Mod-C組的平均血尿酸水平與對(duì)照組相比，上升了2.5倍。Mod-C-FBX組動(dòng)物的血尿酸值與Mod-C組相比，降低大約60%，并保持穩(wěn)定，連續(xù)給藥5 d期間，Mod-C-FBX組動(dòng)物的血尿酸值均保持與對(duì)照組相近的較低水平，顯示FBX具有明顯改善小鼠慢性高尿酸血癥的作用。

在給藥d 5，測(cè)定血清XOD活性(Fig 5B)和肝組織XOD活性(Fig 5C)，Mod-C組的血清XOD活性及肝組織XOD活性與對(duì)照組相比，各上升了31.3%及10.7%。Mod-C-FBX組的血清XOD活性及肝組織XOD活性與Mod-C組相比，分別下降了39.6%及49.0%。

Fig 5 Effects of febuxostat on serum uric acid and XOD activity in chronic hyperuricemia mice n=7)

3 討論

人類體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物為尿酸。體內(nèi)尿酸超過(guò)一定限度則稱為高尿酸血癥。隨著現(xiàn)代人嘌呤類食物攝入增加，高尿酸血癥及其相關(guān)疾病的發(fā)病率逐年升高[1]。XOD能催化黃嘌呤及次黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，是體內(nèi)合成尿酸的限速酶，為抗高尿酸血癥藥物的重要靶點(diǎn)[9-10]。

體外測(cè)定XOD活性的方法有多種，包括HPLC法[11-12]，具有靈敏度高、樣品易回收等優(yōu)點(diǎn)，但單次分析樣品數(shù)量少，不適用于同時(shí)分析大量樣品；酶動(dòng)力學(xué)法[13]具有反應(yīng)時(shí)間較短的優(yōu)點(diǎn)，但測(cè)定結(jié)果易受環(huán)境影響，不穩(wěn)定；酶終點(diǎn)法可同時(shí)測(cè)定多種樣品的抑制情況，受環(huán)境因素影響較小，結(jié)果重復(fù)性好，適用于測(cè)定樣品對(duì)XOD活性的抑制情況。本研究中，根據(jù)適宜的反應(yīng)終點(diǎn)OD值，選取最適XOD酶濃度和底物黃嘌呤濃度；動(dòng)態(tài)觀察反應(yīng)狀態(tài)，選取達(dá)到平臺(tái)期的時(shí)間作為最適反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)效率最高的溫度和pH作為最適反應(yīng)體系，建立了體外XOD活性測(cè)定方法。分別應(yīng)用已上市的XOD抑制劑別嘌呤醇和非布索坦，使用牛奶來(lái)源的XOD1測(cè)定其抑制XOD活性的IC50值分別為1.194 μmol·L-1和2.925 nmol·L-1。使用微生物來(lái)源的XOD2活性測(cè)定方法，嘌呤類經(jīng)典藥物別嘌呤醇抑制XOD活性的IC50值為1.150 μmol·L-1；非嘌呤類新型XOD特異性抑制劑非布索坦沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的抑制作用，出現(xiàn)假陰性。因此，選用牛奶來(lái)源XOD1 3 U·L-1、底物XA 50 μmol·L-1、反應(yīng)時(shí)間為20 min、反應(yīng)溫度為37 ℃、pH為7.4的反應(yīng)體系，F(xiàn)BX為陽(yáng)性對(duì)照藥，建立了XOD抑制劑的體外篩選模型。

在全人類進(jìn)化過(guò)程中，尿酸氧化酶基因序列發(fā)生突變，失去活性[14]，尿酸為體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物，致使體內(nèi)血尿酸上升，使得人類較容易患高尿酸血癥。小鼠的嘌呤代謝過(guò)程中，尿酸氧化酶可氧化尿酸生成尿囊素，后者是一種高度水溶性化合物，可高效排出，減少體內(nèi)尿酸的積累。通過(guò)增加尿酸前體物質(zhì)的攝入而增加尿酸的合成，抑制尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體減少尿酸的排泄和抑制尿酸氧化酶作用，均可導(dǎo)致小鼠的血尿酸升高，形成高尿酸血癥模型。

本研究采取單次同時(shí)給予大劑量尿酸前體物質(zhì)——次黃嘌呤及競(jìng)爭(zhēng)性尿酸酶抑制劑——氧嗪酸鉀[15]的方式，誘導(dǎo)ICR小鼠的血尿酸水平一過(guò)性上升，形成小鼠急性高尿酸血癥模型。該小鼠模型在給予造模劑后血尿酸迅速上升，通常在誘導(dǎo)2 h后達(dá)到峰值；隨后血尿酸水平逐漸下降，于造模劑誘導(dǎo)5 h后恢復(fù)到基線水平。與同批正常對(duì)照組比較，該模型小鼠Mod-A組的肝腎功能未見(jiàn)明顯變化，表明此造模方法并不會(huì)對(duì)小鼠的肝腎功能造成明顯損傷。此外，Mod-A組的血清XOD活性和肝組織XOD活性均未見(jiàn)明顯變化。該模型類似于人類因飲食不節(jié)制，大量攝入嘌呤類食物后，血尿酸出現(xiàn)一過(guò)性升高，可通過(guò)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)血尿酸值變化情況和尿酸-時(shí)間曲線下面積AUC，評(píng)價(jià)受試藥對(duì)急性高尿酸血癥的治療作用。

采取連續(xù)多次給予氧嗪酸鉀的方法，使得小鼠血尿酸值逐漸升高，形成慢性高尿酸血癥小鼠模型。該模型使用ICR小鼠，給予氧嗪酸鉀連續(xù)刺激約2周后，與同批正常對(duì)照組比較，動(dòng)物的血尿酸水平逐漸升高，發(fā)生高尿酸血癥的動(dòng)物數(shù)逐漸增多，血尿酸均值約為正常對(duì)照2倍。慢性高尿酸血癥模型小鼠(Mod-C)血尿酸平穩(wěn)升高。Mod-C組血清及肝組織XOD活性和正常對(duì)照組相比，均未見(jiàn)明顯變化，肝、腎功能也無(wú)明顯變化，肝組織和腎組織的病理檢查(HE染色)亦未見(jiàn)明顯損傷，說(shuō)明此造模方法對(duì)小鼠的肝腎未見(jiàn)明顯損傷。口服給予XOD抑制劑非布索坦治療后，模型動(dòng)物的血尿酸水平下降到與正常對(duì)照組相近的水平，并保持穩(wěn)定。此慢性高尿酸血癥小鼠模型類似于臨床上高尿酸血癥的情況，可以用于高尿酸血癥藥物的藥效學(xué)評(píng)價(jià)及其作用機(jī)制的探究。

小鼠XOD組織分布相關(guān)報(bào)道較少。本研究結(jié)果顯示，ICR小鼠主要臟器均存在XOD的表達(dá)，其XOD活性從高到低依次為小腸、心臟、肝臟、肺、腎、脾臟等組織。至于小腸、心臟高活性的XOD的生理功能，有待進(jìn)一步探討。此外，雖然由氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的慢性高尿酸血癥模型小鼠各組織的XOD活性均未見(jiàn)明顯變化，但是XOD抑制劑非布索坦可明顯抑制該模型動(dòng)物的血清和肝臟的XOD活性。

總之，本研究建立了包括檢測(cè)樣品對(duì)體外XOD抑制活性、對(duì)急性高尿酸血癥小鼠一過(guò)性血尿酸水平上升的影響、對(duì)慢性高尿酸血癥小鼠血尿酸水平“長(zhǎng)”期平穩(wěn)上升作用的XOD抑制劑篩選體系。該體系的3種體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法，各自獨(dú)立又互相補(bǔ)充、相互驗(yàn)證受試樣品的降血尿酸能力，為基于分子靶點(diǎn)XOD的抗高尿酸血癥藥物的研發(fā)和作用機(jī)制研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。