楊衛(wèi)華，王文惠，楊樂園，楊振華

(上海市寶山區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科,上海 201999)

梅毒是由梅毒螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病。主要通過性途徑傳播，感染后可導(dǎo)致全身多器官損害[1]。由于梅毒的病程進(jìn)展緩慢，常出現(xiàn)長時間的潛伏感染，并且顯性和隱性感染患者都具有傳染性，故梅毒的發(fā)生率在我國一直呈上升趨勢。近20年來，梅毒疫情一直是我國乃至世界范圍的嚴(yán)重公共問題[2]。

在梅毒防控和治療中，性能優(yōu)越的梅毒檢測方法至關(guān)重要[3]。梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)是一種具有很高的靈敏度和特異度的檢測方法，也是目前公認(rèn)常用的梅毒抗體檢測的確證方法，但由于檢測時間較長、步驟繁瑣，不適宜實(shí)驗(yàn)室大批量標(biāo)本的檢測。且采用主觀的人眼判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對于一些弱陽性樣本可能發(fā)生漏報(bào)，某些強(qiáng)陽性樣本則可能由于“HOOK”效應(yīng)而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。為了提高檢測效率和準(zhǔn)確性，目前越來越多的實(shí)驗(yàn)室采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行梅毒特異性抗體的檢查，其中高敏化學(xué)發(fā)光法(HISCL)是新的梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法，該方法不僅提高了檢測自動化程度，同時大大縮短了檢測時間[4]。

本研究應(yīng)用HISCL和TPPA對5 568例血清標(biāo)本進(jìn)行梅毒螺旋體特異性抗體檢測，對于陽性和不一致的檢測結(jié)果采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)進(jìn)行確證試驗(yàn)[5]。

1 資料與方法

1.1一般資料 5 568例血清標(biāo)本來自于2017年12月至2018年6月本院門診及住院患者，其中男2 270例，女3 298例。<1歲18例，1～18歲895例，>18～60歲3 876例，>60歲779例。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 HISCL 5000全自動免疫分析儀及其配套的梅毒螺旋體抗體試劑盒(日本希森美康醫(yī)用電子有限公司)；TPPA試劑盒(日本富士必歐株式會社)；抗梅毒螺旋體抗體IgG免疫印跡試劑盒(德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷股份公司)；梅毒螺旋體室內(nèi)質(zhì)控品(上海市臨床檢驗(yàn)中心提供，濃度為8 NCU/mL)。

1.3方法 所有血清標(biāo)本分別用HISCL和TPPA進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)前操作人員掌握檢測方法、實(shí)驗(yàn)方案和質(zhì)量控制方法。所有操作嚴(yán)格按照試劑說明書以及《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[6]進(jìn)行。

檢測樣本的同時檢測室內(nèi)質(zhì)控品及陰、陽性對照，確保室內(nèi)質(zhì)控在控，以保證檢測質(zhì)量。兩種方法試劑盒陰、陽性對照應(yīng)符合預(yù)期；且外部室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果符合預(yù)期，TPPA外部陽性質(zhì)控結(jié)果允許靶值上下一個滴度內(nèi)，HISCL外部陽性質(zhì)控結(jié)果應(yīng)符合22S和13S規(guī)則。

HISCL檢測結(jié)果采用臨界值指數(shù)(COI)表示。COI為樣本發(fā)光強(qiáng)度和臨界值發(fā)光強(qiáng)度之比。COI 不足1.0的樣本，判定為陰性；COI在1.0及以上的樣本，判定為陽性。

TPPA檢測結(jié)果用陰陽性表示，非致敏顆粒檢測結(jié)果為陰性、致敏顆粒檢測結(jié)果為陽性，標(biāo)本檢測孔肉眼可見U型板底均勻、散在顆粒，且滴度大于或等于1∶80即為陽性結(jié)果；否則即為陰性結(jié)果。

WB檢測結(jié)果時，印跡膜條上出現(xiàn)1條以上，相對分子質(zhì)量為47 000、45 000、17 000或15 000的特異度條帶時，結(jié)果判為陽性；當(dāng)僅出現(xiàn)1條特異度條帶即為臨界陽性，判為可疑；無特異度條帶出現(xiàn)則為陰性。TPPA和WB檢測結(jié)果均由兩位以上實(shí)驗(yàn)操作人員進(jìn)行獨(dú)立復(fù)核確認(rèn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件，方法一致性采用Kappa檢驗(yàn)[7]，一致性判斷標(biāo)準(zhǔn)：弱(Kappa≤0)，輕(0

2 結(jié) 果

2.1HISCL和TP檢測結(jié)果 5 568例血清標(biāo)本中，HISCL和TPPA的均各檢出陽性標(biāo)本201例，陰性標(biāo)本5 367例，陽性檢出率均為3.61%。見表1。

表1 HISCL和TPPA符合率實(shí)驗(yàn)表[3](n)

由表中計(jì)算得陽性符合率=201/(201+0)×100%=100%；陰性符合率=5 367/(5 367+0)×100%=100%，即本研究中HISCL和TPPA的符合率為100%，結(jié)果一致性等級達(dá)到最強(qiáng)(kappa=1.0)。靈敏度可達(dá)100%，特異度達(dá)99.70%，陽性預(yù)測值為92.04%，陰性預(yù)測值為100%。

2.2結(jié)果不符及陽性樣本進(jìn)行免疫印跡法檢測結(jié)果 201例陽性血清標(biāo)本中，經(jīng)Western blot驗(yàn)證，共計(jì)確認(rèn)陽性標(biāo)本185例，陰性標(biāo)本10例，可疑標(biāo)本6例。此6例可疑標(biāo)本經(jīng)臨床隨訪確認(rèn)排除梅毒螺旋體感染。見表2。

表2 HISCL檢測性能表[3](n)

3 討 論

血清學(xué)檢測是診斷梅毒的重要依據(jù)，敏感度高和特異度好的檢測方法對梅毒診治至關(guān)重要[8]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，上海市近年來Ⅰ、Ⅱ期梅毒發(fā)病有所趨緩，隱性梅毒發(fā)病逐漸升高[9]。然而，目前普遍采用RPR和TRUST進(jìn)行梅毒的初篩，TPPA進(jìn)行梅毒確診的檢查方案，該方案對于潛伏期梅毒和神經(jīng)性梅毒會造成一定的漏檢，不僅延誤臨床的治療，更容易導(dǎo)致性病的進(jìn)一步傳播。

本實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用HISCL和TPPA檢測了2017年11月至2018年6月的5 568例血清樣本，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析HISCL與TPPA的符合率為100%。

應(yīng)用Western blot對檢出的201例陽性標(biāo)本進(jìn)行驗(yàn)證，HISCL與Western blot法檢測結(jié)果相比較出現(xiàn)的16例不符合中，COI值均在4.0以下。HISCL檢出陽性而Western blot確認(rèn)為陰性的10例樣本中，主要為60歲以上的老年人、孕婦和1歲以下兒童。有文獻(xiàn)報(bào)告，老年患者隨著年齡的增高，梅毒抗體的假陽性率也呈上升趨勢，且年齡越高假陽性率越高，陽性率隨年齡增大呈階梯性升高[10-13]。導(dǎo)致老年患者梅毒抗體檢測生物學(xué)假陽性的因素有許多，主要包括癌癥、溶栓劑或抗凝劑治療、糖尿病、肝硬化、肝炎、腎病、自身免疫病、嚴(yán)重感染、代謝紊亂、手術(shù)等[14-15]。而且在實(shí)際診療過程中老年患者經(jīng)常伴隨不止一個以上原因。而1歲以下兒童由于自身免疫系統(tǒng)尚未完全建立，因此不能單以實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果判斷是否感染梅毒，應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查加以判定。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告[16]：孕婦樣本中有較高比例的抗TP抗體假陽性，可能是其體內(nèi)免疫、血脂及內(nèi)分泌環(huán)境等因素改變引起的干擾所致。Western blot確認(rèn)可疑的6例樣本經(jīng)均為非陰性結(jié)果，即出現(xiàn)了1條特異度條帶，可能為梅毒早期感染或抗原較差反應(yīng)，需臨床跟蹤隨訪。按ALTER等[17]在美國疾病預(yù)防控制中心擬定的“抗HCV的實(shí)驗(yàn)室檢測和結(jié)果報(bào)告指南”中對Western blot確證試驗(yàn)“不確定”結(jié)果的解釋，在排除檢測對象處于血清轉(zhuǎn)換過程的前提下，在低感染率人群中，Western blot“不確定”結(jié)果提示篩查試驗(yàn)的結(jié)果為假陽性。6個可疑樣本經(jīng)臨床流行病學(xué)調(diào)查結(jié)合隨訪，確認(rèn)為非梅毒螺旋體感染。

TPPA因存在手工倍比稀釋、價格昂貴、檢測時間長、操作人員要求較高、主觀判讀結(jié)果等不足限制了使用范圍[15]。在檢測原理上，與傳統(tǒng)的TPPA采用“一步法”不同，HISCL采用兩步法檢測梅毒特異性抗體，在方法學(xué)上可以盡可能避免“HOOK”效應(yīng)的產(chǎn)生，且自動化程度高，檢測速度快，以COI值進(jìn)行結(jié)果判斷更客觀簡便，適宜進(jìn)行大批量梅毒樣本的檢測。

4 結(jié) 論

HISCL法檢測梅毒特異性抗體結(jié)果與TPPA有很高一致性，且能實(shí)現(xiàn)自動化、高通量以及節(jié)省勞動力成本，可用于大規(guī)模梅毒初篩試驗(yàn)。在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)注意COI值4.0以下的弱陽性結(jié)果，而對老年人、腫瘤患者等梅毒抗體陽性報(bào)告無法確認(rèn)，必要時應(yīng)與臨床溝通，結(jié)合病史、臨床癥狀并進(jìn)行WB確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，以期為臨床提供更準(zhǔn)確判斷依據(jù)。